罗布麻愈伤组织原生质体分离培养

[目的]探究罗布麻愈伤组织原生质体的分离培养及其影响因素,[方法]以罗布麻无菌苗子叶与下胚轴诱导的愈伤组织为材料,研究MS培养基附加不同激素组合对原生质体分离培养的影响以及愈伤组织继代培养、不同浓度纤维素酶与离析酶组合、DPD和MS等4种培养基对原生质体产量的影响。[结果]激素组合中以6-BA0．5mg／L＋NAA0．5mg／L组合获得最高愈伤组织诱导率,达100％;用固体培养基进行继代培齐的愈伤组织的原生质体产量高于液体培养基,尤其以从继代1次愈伤组织收集的原生质体最为适宜;纤维素酶0．30％＋离析酶0．30％组合获得的原生质体产量最高,且细胞碎片较少;DPD培养基的原生质体较其他培养基的分裂得早,MS培养基的培幂效果最差,[结论]该研究为罗布麻遗传转化、突变体筛选及体细胞融合育种提供了技术途径：     

青花菜子叶和下胚轴原生质体的遗传转化系统

用根癌农杆菌共培养法将外源基因导入青花菜上海１号的无菌苗子叶及下胚轴原生质体。菌株为ＥＨＡ１０５,携带质粒ｐＭＯＧ４１０,含ＧＵＳ和ＮＰＴⅡ基因,实验得出其子叶芽分化率最高的激素组合为６－ＢＡ ５ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ ０．１ｍｇ／Ｌ。原生质体以８￣１０℃暗培养５￣６ｄ,然后于２５℃光照８ｈ生长的无菌苗下胚轴切片游离出的密度最高,Ｋ８Ｐ培养基激素组合（ｍｇ／Ｌ）以２,４－Ｄ１．０＋ＢＡ０．５＋ＮＡＡ０．     

植物生长调节剂对月季组培萌芽和成芽的影响

以ＭＳ为基本培养基，附加不同种类、不同浓度的细胞分裂素（ＢＡ，６－苄基腺嘌呤，ＺＴ，玉米素）和生长素（ＮＡＡ，荼乙酸），对月季组培快速繁殖进行了研究。结果表明：在萌芽率上均以较低浓度的细胞分裂素与生长素按一定比例混合使用效果较好，适宜的增减基为ＭＳ＋ＢＡ１ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．２ｍｇ／Ｌ。而在成芽率上以较高浓度的细胞分裂素单独使用效果最好，适宜的培养基为ＭＳ＋ＺＴ２ｍｇ／Ｌ。     

大蒜花序轴离体培养的研究

以大蒜花序轴为外植体,研究了不同品种、不同生长阶段花序轴离体培养的差异和不同ｐＨ值、激素组成对花序轴培养的影响以及继代培养基种类、激素组成及糖原条件。结果表明,取未熟花序轴为外植体,其繁殖系数可高达７６;花序轴培养适宜条件为Ｂ５＋ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ,ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ,ｐＨ６．５;花序轴培养效率存在品种间差异;继代培养条件为ＭＢ＋ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ,ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ,ＧＡ３０．０５ｍｇ／Ｌ,     

柚类、橘类叶肉原生质体分离方法研究

原生质体是植物遗传改良的重要实验体系之一,而原生质体的分离是该体系的基础。对柑橘叶肉原生质体来说,柠檬、橙类等品种的叶肉原生质体比较容易分离,而柚类、橘类等柑橘品种则相对困难。本研究采用椪柑、黄岩本地早、沙田柚、冰糖橘4个品种为试材,枳壳试管苗为对照,系统研究了不同基因型、不同叶龄、不同酶种类、不同酶液组合对叶肉原生质体分离的影响,探讨了影响柚类、橘类等柑橘叶肉原生质体分离的因素,从中找出了各品种较适宜的分离条件。在适宜条件下,4种供试品种的原生质体得率(FW)可达10×106~20×106g-1。     

枣树组织培养养愈伤组织诱导的研究

将枣树不同品种的不同器官及其部位的外植体接种含有不同激素的培养基中培养，对其愈伤组织诱导条件进行了条件，结果表明，灌阳长枣（中国）和普通枣（日本）为较适宜组培的品种，胚，嫩枝顶部，芽为适宜组培的器官；以ＭＳ（１／２ＮＯ＾－３）的作基本培养基，并添加３μｍｏｌ左右Ｚｅａｔｉｎ和约３０μｍｏｌＮＡＡ或ＩＡＡ可以获得数量较多，质量较好的愈伤组织，叶所产生的愈伤组织颜色较深，数量也较少，并在初代培养时易产     

新疆陆地棉体细胞胚状体的发生和植株再生

以新疆陆地棉品种下胚轴为外植体，在含有４种激素（２，４－Ｄ、ＫＴ、ＮＡＡ、ＩＡＡ）不同组合的培养基上进行愈伤组织诱导，通过对体细胞胚胎发生的悬浮培养条件与植株再生各因子的比较研究，获得了陆地棉新陆中２号、新陆早１号两个优良栽培品种的体细胞胚胎的发生，体细胞胚经固体或液体培养，均可萌发，萌发的胚在成株培养基上形成了具有根、芽的完整再生植株。     

内源激素与小麦抽穗期的相关研究

以导入黑麦外源基因创造的抽穗期特晚的多小穗吕系１０－Ａ及其改良系为供试材料，在幼穗分化过程的伸长期，单棱期，二棱期，小花分化期，雌雄蕊分化期，药隔分化期和四分体时期分别测定了赤霉素，生长素，玉米素和脱落酸等４种激素。对不同时期的各种同源激素与抽穗期的相关研究表明，ＧＡ３和ＩＡＡ含量，ＺＡ／ＩＡＡ值，ＺＴ／ＡＢＡ值，ＺＴ／ＧＡ３值和ＧＡ３／ＩＡＡ值均对小麦抽穗期有影响，而ＺＴ和ＡＢＡ含量以及ＩＡＡ／     

单双低油菜原生质体培养高效成株体系的研究

以甘蓝型单低和双低油菜为材料，对原生质体培养及植株再生进行了研究。结果表明：低温预处理无菌苗可提高原生质体活力。不同下胚轴部部位对原生质体的得率及分裂频率均有影响。用琼脂糖包理法，在不含ＮＨ４ＮＯ３及ＫＮＯ３，而加有丝氨酸和谷氨酰胺的Ｋｍ８ｐ培养基上培养原生质体获得了高频率再生愈组织。在Ｍ＋ＢＡ１ｍｇ／Ｌ分化培养基上两周后得到芽的分化，转至ＭＳ＋ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ＋生根粉０．１ｍｇ／Ｌ的培养基上     

叶用莴苣高频率再生体系的建立

以４份叶用莴苣栽培品种为材料,比较了激素组合、ＡｇＮＯ３及其浓度和不同外植体切段地不定芽形成的影响,结果表明,在本实验条件下ＺＴ１ｍｇ／Ｌ和ＩＡＡ１ｍｇ／Ｌ组合的出芽外植体在分率最高,平均为２０．１４％;培养基中添加ＡｇＮＯ３可明显提高植株再生频率,增加每个外植体的丛生芽数目,浓度以５ｍｇ／Ｌ为最好,具芽外植体百分率平均为４４．９０％;真叶的培养效果好于子叶,真叶柄的培养效果优于真叶其它部位,以真     

辣椒茎尖培养脱毒研究

以新疆辣椒主栽品种“四平头”（带毒率较高）为试材，切取无菌苗生长点，以ＭＳ为基本培养基，在其上分别添加６－苄基腺嘌呤（６－ＢＡ），吲哚乙酸（ＩＡＡ），玉米素（ＺＴ），细胞激动素（ＫＴ），赤霉素（ＧＡ３）和萘乙酸（ＮＡＡ），苯乙酸（ＰＡＡ）以及吲哚丁酸（ＩＢＡ）等生长调节剂进行培养。经筛选８０余种不同激素水平的培养基，其中以ＭＳ＋ＢＡ８＋ＩＡＡ０．０５～１．０较适宜茎尖的培养，ＭＳ＋ＫＴ０．２＋ＧＡ     

基本培养基及激素对蝴蝶兰不同品种叶片诱导原球茎形成的影响

研究不同基本培养基及激素配比对不同花色品种蝴蝶兰叶片诱导原球茎形成的影响。通过观察不同基本培养基及激素配比对不同品种蝴蝶兰叶片原球茎诱导形成率的差异,找出适合不同品种的最佳诱导培养配方。试验表明,不同蝴蝶兰品种叶片诱导原球茎形成的易难程度不同,高浓度的BA与一定浓度的NAA和Ad组合适合3个品种的蝴蝶兰叶片原球体的诱导,不同品种适宜诱导的基本培养基不同。     

橡胶树热研8-79原生质体培养再生植株

[目的]优化橡胶树热研8-79原生质体分离和培养条件,建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系,为橡胶树体细胞杂交育种奠定基础.[方法]以橡胶树热研8-79花药愈伤组织建立的胚性细胞悬浮系为试验材料,设计不同酶组合、酶解时间和悬浮细胞继代时间进行原生质体分离,采用不同培养基、看护细胞浓度和接种密度进行原生质体培养,对原生质体分裂发育的小愈伤组织进行体细胞胚诱导及植株再生培养,统计原生质体的产量、分裂频率、体胚数及体胚萌发率.[结果]酶组合为纤维素酶1.50%+果胶酶0.15%+离析酶0.50%、酶解时间为12h时,继代培养第5d的胚性悬浮细胞达最高产量(3.6 ×107个/mL PCV);用酶解细胞和看护细胞继代培养基分别作为原生质体液体培养基和看护培养基,比使用KPR培养基更有利于原生质体的分裂,当看护细胞浓度为5%、接种密度为5×105个/mL时原生质体的分裂频率最高,达54%.原生质体持续分裂形成肉眼可见的小愈伤组织增殖后经体胚发生途径发育成完整的小植株.[结论]通过优化橡胶树热研8-79胚性悬浮细胞原生质体分离的酶组合、酶解时间、继代培养时间及看护培养过程中培养基组成、看护细胞浓度和接种密度等影响因素,可以建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系.     

橡胶树热研8—79原生质体培养再生植株

【目的】优化橡胶树热研8-79原生质体分离和培养条件,建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系,为橡胶树体细胞杂交育种奠定基础。【方法】以橡胶树热研8-79花药愈伤组织建立的胚性细胞悬浮系为试验材料,设计不同酶组合、酶解时间和悬浮细胞继代时间进行原生质体分离,采用不同培养基、看护细胞浓度和接种密度进行原生质体培养,对原生质体分裂发育的小愈伤组织进行体细胞胚诱导及植株再生培养,统计原生质体的产量、分裂频率、体胚数及体胚萌发率。【结果】酶组合为纤维素酶1.50%＋果胶酶0.15%＋离析酶0.50%、酶解时间为12 h时,继代培养第5 d的胚性悬浮细胞达最高产量（3.6 ×107个/mL PCV）;用酶解细胞和看护细胞继代培养基分别作为原生质体液体培养基和看护培养基,比使用KPR培养基更有利于原生质体的分裂,当看护细胞浓度为5%、接种密度为5 ×105个/mL时原生质体的分裂频率最高,达54%。原生质体持续分裂形成肉眼可见的小愈伤组织增殖后经体胚发生途径发育成完整的小植株。【结论】通过优化橡胶树热研8-79胚性悬浮细胞原生质体分离的酶组合、酶解时间、继代培养时间及看护培养过程中培养基组成、看护细胞浓度和接种密度等影响因素,可以建立橡胶树原生质体培养植株高效再生体系。     

花椒原生质体分离与培养研究

以花椒试管苗叶片、愈伤组织和悬浮细胞为试验材料,通过单因素试验研究酶液浓度、渗透压调节剂浓度对花椒原生质体分离的影响,并以花椒试管苗叶片分离出的原生质体为试验材料,研究培养基种类、培养密度、不同激素配比对花椒原生质体培养的影响。结果表明,酶液浓度、渗透压调节剂浓度对花椒原生质体分离有显著影响。在适宜条件下,用甘露醇作花椒原生质体分离的渗透压调节剂,浓度在0.6~0.7 mol·L^-1时分离效果最佳。以花椒叶片为原生质体分离材料的最佳酶液组成为CPW-0.7 mol·L^-1甘露醇+1.0%(w/v)纤维素酶R-10+1.5%(w/v)果胶酶,酶解时间为10 h,纯化后的原生质体产量和活力分别可达82.36×10⁵ 个·g^-1和72.74%。以愈伤组织和悬浮细胞为分离材料的最佳酶液组成均为CPW-0.6 mol·L^-1甘露醇+2.0%(w/v)纤维素酶R-10+0.5%(w/v)果胶酶,酶解12~14 h,纯化后的原生质体产量及活力分别为31.26×10⁵ 个·g^-1、59.15%和53.87×10⁵ 个·g^-1、63.92%。以花椒试管苗叶片为原生质体分离材料,分离纯化后的花椒原生质体在无激素的WPM培养基中,培养密度为1×10⁵个·mL^-1,培养第3天原生质体第1次分裂,2周分裂3~5次,原生质体28 d后形成微细胞团,培养60 d后可形成2 mm左右的愈伤组织。     

超级稻品种与密度试验

为筛选适宜海南省种植的超级稻良种，同时探讨不同品种在强化栽培条件下的适宜栽插密度，于2004年早造引入苗头超级稻组合进行品种和密度两因素试验，现将试验结果总结如下。     

手掌参的组织培养研究

本试验采用植物组织培养的方法对手掌参试管苗形成的适宜外植体及培养基进行了大范围筛选。在选用的８种外植体中，只有芽部外植体在ＭＳ附加适量的ＫＴ、ＺＴ、ＮＡＡ及Ｖｃ的培养其中获得了具有２￣３片幼叶的芽，并进一步诱导生根，首次获得完整的手掌参试管苗。     

芜菁油菜叶肉原生质体再生植株

以芜菁油菜为材料，从无菌苗５—８天叶龄的叶片分离叶肉原生质体，然后以６×１０￣４／ｍＬ的密度用ＭＰ１－３液体培养基进行浅层培养。培养１０天后，用ＭＰ４培养基对ＭＰ１－２中的培养物进行稀释（１：１）．用ＭＰ５培养基对ＭＰ３中的培养物进行稀释（１：１），每次间隔１０天。在培养期间时常用手轻轻摇动培养物。用这种方法，再生细胞分裂并形成愈伤组织，愈伤组织经ＭＳ１培养基增殖３周，转到分化培养基上诱导植株分化，分化出的苗经诱导生根发育成完整的小植株（共５４株）．在研究中发现：①激素的种类、浓度及组合对刺激细胞分裂的作用差异明显；②提高培养基的ｐＨ值可明显地控制细胞褐化；③ＡｇＮＯ＿３（５ｍｇ／ｍＬ）有益于愈伤组织分化植株；④谷氨酰胺（８０ｍｇ／ｍＬ）和腺嘌呤（４０ｍｇ／ｍＬ）能提高愈伤组织的植株分化频率；⑤原生质体培养基对原生质体植株的分化亦有影响．     

包心菜无菌苗子叶及叶片原生质体高频分裂和高频植株再生

以包心菜子叶和叶片原生质体为材料，经不同液体培养基（Ｂｐ１，Ｂｐ２，Ｂ１）浅层培养，再生细胞高频分裂并形成愈伤组织，愈伤组织经扩增后转移至分化培养基上诱导植株分化，从这两种原生质体获得了再生植株。在原生持培养过程中，原生质体及细胞团的褐化程度与培养基中的有要分的多少有关。原生质体的分化频率与培养基中植物激素种类关系基大。在植株分化时，谷氨酰胺和腺嘌呤对植株分化有很促进作用。另外，原生质体的来源...     

内源激素对小麦可育小花数的调控

选用可育小花数目存在较大差异的１３个小麦基因型为供试材料,在小花发育过程中,研究了内源激素的动态变化与每小穗可育小花数和单穗可育小花之间的关系。结果表明,赤霉素（ＧＡ３）、生长素（ＩＡＡ）、玉米素（ＺＴ）和脱落酸（ＡＢＡ）均参与了对小花发育的调控,不同程度地影响可育小花数。在顶小穗形成之前,激素通过调节顶小穗形成来对可育小花进行间接调控;而顶小穗形成之后,激素直接调节小花的发育。激素之间的比值（尤其是ＺＴ／ＩＡＡ和ＺＴ／ＡＢＡ）对可育小花数目的调节作用大于其绝对量的调节作用,激素对上位小花的调节作用又大于其对下位小花的调节作用。