猪OB基因多态性分析及其对仔猪早期生长性能的影响

随着分子生物学技术和现代繁育理论的不断发展,猪的高生长速度机制的研究已达到基因水平。OB基因是近年来人们发现的与肥胖有关的基因,大量的体外试验研究表明,OB基因的表达产物瘦素（1eptin）具有降低体脂含量的作用。因此,人们推断OB基因与猪的生长性能之间可能存在着某种联系。近年来,对猪OB基因多态性与其生产性能关系的分析已成为当前研究的热点。本试验采用PCR—RFLP法分析了三江白猪、大白猪、长白猪、长×大猪群体OB基因3469位点的多态性,并分析了三江白猪OB基因多态性与其仔猪早期生长性能之间的关系,以期找到影脂肪蓄积的数量性状座位,从而为提高我国地方猪种瘦肉率等育种工作提供理论依据。     

猪OB基因不同基因型与胴体性状关系的研究

猪可划分为三种不同的经济类型,即脂肪型、兼用型和瘦肉型.自20世纪40年代动物数量遗传学和现代家畜营养学问世以来,猪的遗传育种研究发展到一个新的阶段.猪的育种方向经历了由脂肪型向兼用型以及向瘦肉型的演变过程,其研究手段也从以动物生产性能表型剖析为基础的传统育种方法向以直接对基因型进行选择的现代分子生物学技术转变.近年来,国外通过大量的研究,已经发现人和小鼠的OB基因与其脂肪蓄积有关,OB基因及其表达产物-"瘦蛋白"(leptin)可以降低采食量、加快代谢速度和减少脂肪.本文采用Bi-PASA(Bidirectional of Specific Alleles 双向PCR扩增特殊等位基因)新技术,对8头长×(大二)和杜×(长大)猪的瘦蛋白基因(OB基因)的不同基因型与胴体性状的关系进行了多态性研究.检测到3种带型,2个等位基因和2种基因型.通过多态性分析、t检验和方差分析等,分析、检测了各基因型间的不同胴体性状的差异,发现长大二中的145号、杜长大中的312号OB基因为G/G型(突变纯合子),肌内脂肪含量在杂交组合中最高,表明OB基因的突变纯合子G/G型可能与猪的脂肪沉积有关,显示OB基因的G/G型与猪胴体瘦肉性状有显著相关性.     

OB基因多态性对母猪产仔数遗传效应的分析

试验采用PCR-RFLP法研究了三江白猪、大白猪、长白猪、长×大猪群体OB基因3469位点的多态性及其对母猪繁殖性能的影响。对试验猪群进行遗传平衡检测结果显示,三江白猪、长白猪、长×大猪群体OB基因3469位点均达到平衡,而大白猪群体在此位点未达到平衡,即处于偏离哈代-温伯格平衡状态。OB基因与母猪产仔数的相关分析结果显示,OB基因型对试验研究的3个繁殖性状的影响都符合一个规律,即产仔数表现出BB＞AB＞AA的趋势。OB基因对产仔数的遗传效应表现出明显的加性-显性效应,且B等位基因具有明显的增加产仔数的效应。     

动物肥胖度的高效调节蛋白Leptin

Leptin是动物肥胖基因的表达产物，有人称之为肥胖蛋白，具有明显降低机体肥胖程度的功能，因此也有人称之为瘦蛋白。最早发现这种新蛋白的是美国洛克菲勒大学的Zhang，YR等人（1994）发现小白鼠的能量平衡受到某种物质的调控，该物质主要是由肥胖基因编码的。他们克隆了几种类型的小白鼠肥胖基因并进行测序，发现mRNA由4．5kb组成，其中一段编码167个氨基酸的序列相对保守。进而他们又从小白鼠白脂肪组织eDNA文库中克隆出了肥胖基因eDNA，测序发现5’端由97个碱基组成，随后是编码167个氨基酸的保守序列，3’端则由3700多个碱基组成的非翻译序列。这段保守序列编码产物就是高效调控能量平衡的物质，命名为Leptin。最近猪、鸡的Leptin基因也得到了克隆，并获得了表达产物。     

肥胖基因研究进展

与肥胖有关的基因已发现很多，但ob基因是研究的重点，其表达产物Leptin的作用机制已有较深入的了解。本文主要介绍了ob基因及其产物Leptin的作用机制、生物学效应、Leptin抵抗现象，以及其它与肥胖有关的基因和蛋白。     

军牧1号白猪OB基因cDNA序列分析

采用RT-PCR法获得军牧1号白猪的OB(OBase)基因cDNA．并对其进行了克隆和序列分析。结果发现2种新变异序列：在编码区第364位GCC突变为CGC，导致第122位的Ala突变为Arg；第153～155位的碱基(CAG)发生缺失．使第49位的谷氨酸(Gln)发生缺失。     

动物肥胖基因(ob)的研究进展

肥胖基因（ob）是近年来克隆的新基因,该基因产物－Leptin(瘦蛋白）是反映体内脂肪含量和调节体重的信号因子,具有调节摄食行为,减少能量消耗和降低动物采食量的作用。本文对肥胖基因的研究现状、结构、克隆、表达及影响表达的因素进行了综述。     

ob基因及其表达产物的生物学效应

ob基因自从被克隆后,围绕其表达产物的作用机理和生物学效应进行了大量的研究,最近研究证明Leptin对小鼠大脑发育有重要功能,标志着Leptin的研究进入了一个新的阶段,今后将从单一的营养调控研究转向兼顾神经生物学的研究,更深入研究Leptin作用机理。同时国内外学者从分子领域探究ob基因在畜禽育种上的作用,做了很多的工作,也取得了重要的成果。本文总结了ob基因的重要生物学效应,为理解ob基因的作用机制和进一步研究人类肥胖治疗和提高动物生长繁殖性状水平提供必要的支持。     

黄淮山羊Leptin cDNA的克隆及鉴定

根据GenBank中公布的山羊Leptin基因部分基因组核苷酸序列，设计合成一对引物，以山羊脂肪组织总RNA为模板，采用RT—PCR法，扩增出Leptin成熟蛋白编码cDNA序列，将此扩增产物克隆入pMD18-T载体，进行PCR、双酶切鉴定及序列测定与分析。结果表明，扩增的山羊Leptin基因编码序列长为441bp，编码146个氨基酸。同源性分析表明，山羊Leptin基因成熟蛋白编码cDNA与小鼠、人、猪、牛及绵羊基因相应序列的同源性分别为82．22％、87．76％、92．97％、96．15％和98．64％，氨基酸同源性为84．25％、86．99％、92．47％、97．95％和100．00％，说明Leptin是一组在进化上高度保守的蛋白质。山羊Leptin成熟蛋白cDNA的成功克隆，为进一步研究黄淮山羊Leptin基因全结构、基因表达与调控奠定了基础。     

麦洼牦牛肥胖基因部分片段的克隆测序研究

根据普通牛和其他哺乳动物基因的碱基序列以及相关文献资料设计引物，用PCR扩增并测定了牦牛OB基因的部分序列。结果表明：OB基因片段(1820bp)包括内含子2全部，外显子2～3的一部分。通过GenBank中的Blastn序列比较分析，牦牛的OB基因与普通牛种同源性高达98％。这为开展牦牛功能基因组计划和分子育种提供了科学的理论依据。     

Leptin基因第3469位点基因型对合作猪繁殖性能和体尺的影响

以Leptin基因作为控制猪产仔性状和生长性状的候选基因,采用PCR-SSCP技术在合作猪群体中进行单核苷酸多态性(SNPs)检测,分析Leptin基因的遗传多样性及突变位点基因型频率与基因频率。同时,结合生长性状和母猪产仔性状记录,研究了不同基因型对产仔性状、生长性状的遗传效应。结果:通过对合作猪Leptin基因SNPs分析,检测到了2个等位基因,3种基因型。Leptin基因第3469位点的基因型效应对合作猪体重、体高、胸围、头长、头胎总产仔数、2胎总产仔数、2胎活产仔数、3胎总产仔数、3胎活产仔数和4胎活产仔数影响均显著(P0.05),而对体长、头胎活产仔数和4胎总产仔数影响不显著(P0.05)。这表明Leptin基因第3469位点的突变与合作猪的产仔数和生长性状有密切关系,Leptin基因可作为控制合作猪产仔性状和生长性状的候选基因。     

陆川猪瘦素基因的克隆及序列分析

为了研究广西陆川猪瘦素(Leptin)基因编码区序列(CDS)的组成,并为下一步开展Leptin基因表达与陆川猪优质肉质形成的相关性研究提供科学理论依据,试验以11月龄陆川猪背最长肌总RNA为模板,根据Gen Bank中已公布的猪Leptin基因序列(登录号为GQ268936)设计1对PCR引物,利用RT-PCR方法扩增Leptin基因c DNA序列,扩增得到的目的片段经过纯化、连接p MD 18-T载体,然后转化大肠杆菌DH5α感受态细胞并测定序列,应用PMP生物分析软件进行蛋白质二级结构预测分析。结果表明:成功克隆获得陆川猪Leptin基因编码区长504 bp,与Gen Bank公布的巴马小型猪的基因同源性为99.2%,与藏猪的基因同源性为99.0%;陆川猪Leptin基因CDS与其他猪种相比,存在第73位点的T→C,碱基C为陆川猪所特有,导致色氨酸突变为精氨酸。由Leptin基因系统进化树构建结果可知,广西陆川猪与藏猪的遗传距离最近,其次是弓头鲸,最远是小鼠;陆川猪Leptin蛋白质二级结构包含有4个α-螺旋和2个β-折叠。说明Leptin基因可作为研究陆川猪脂肪沉积的主要候选基因之一。     

莱芜黑猪肥胖基因的多态性分析

肥胖基因 (ob)发生遗传变异而不能产生正常的蛋白产物———Leptin ,而Leptin的最主要功能是反映脂肪组织含量 ,调节体重 ,使体重维持相对稳定 ,因此突变个体表现为肥胖。本文分析了不同品种猪内ob基因HinfI的多态性分布 ,该多态性是有点突变造成的。结果表明 ,中国地方猪种菜芜猪群体内C基因占优势 ,而长白猪和大约克群体中TT纯合子为 10 0 %。这种多态性分布与莱芜猪属肥胖型品种 ,而长白、约克夏猪属瘦肉型品种相吻合。     

猪Leptin基因多态性及其与产仔性状的相关性分析

试验旨在探究Leptin基因对猪产仔性状的影响,为其新品种持续选育提供遗传学依据。参考GenBank发布的猪Leptin基因DNA序列（登录号:U66254、AF026976）设计3对引物,采用PCR-SSCP技术分析Leptin基因在苏姜猪和姜曲海猪中的单核苷酸多态性（SNP）,并用统计学方法分析基因座多态性与产仔性状的相关性。结果发现,Leptin基因在苏姜猪、姜曲海猪群体中均具有多态性,检测到3种基因型:AA、AB和BB;测序结果发现,编码区第3 469位碱基处发生单碱基突变（T3469C）,为同义突变。χ²适合性检验显示,2个猪种Leptin基因型分布处于Hardy-Weinberg平衡（P>0.05）。多态信息含量（PIC）分析显示,苏姜猪为中度多态,姜曲海猪为低度多态。Leptin基因型与产仔性状关联分析显示,不同基因型间产仔性状差异不显著（P>0.05）,但T3469C位点AB基因型平均产仔数较AA和BB基因型高,初步推断Leptin基因T3469C位点可能是影响猪产仔性状潜在的遗传标记,建议做进一步的研究。     

生猪产业体系工作动态

云南:育种与繁育研究室完成133头种猪的MC4R和OB基因检测黑素皮质素4受体(MC4R)基因对动物的采食行为,体重和能量稳态调控起着重要的作用,该基因能够通过交感神经来调节机体摄食功能,抑制摄食,导致血糖降低、胰岛素降低和瘦素含量降低,从而减少体脂,降低体重。肥胖(OB)基因的表达产物瘦素(Leptin)对家畜脂肪组织和神经内分泌有调控作用,通过对采食量和能量平衡的调节,促进家畜的生长、繁殖、泌乳和体况,其中较重要的作用是对家畜体重和能量平衡的调节。     

ob和obR基因

ob基因主要在脂肪组织中的表达，其表达产物对体重．能量代谢、动物繁殖、胚胎发育等方面具有重要调节怍用外。这种调控作用是通过靶细胞膜上的特异受体和相应的信号转导系统实现的，obR基因产物是一种跨膜受体，与Leptin有很高的录合力。本文将对ob和obR基因的定位、结构、表达、作用等方面进行综述。     

Leptin的研究与展望

Leptin是肥胖基因的编码产物，参与调节脂肪代谢。Leptin还与繁殖、青春期发育有密切关系。Leptin通过抑制食欲减少能量摄取、增加能量消耗、抑制脂肪合成三种途径调节机体脂肪沉积。细胞因子、激素、体脂等都会影响Leptin的表达及含量。Leptin的生物学功能对畜牧业生产有重要意义。     

生猪产业体系工作动态

云南：育种与繁育研究室完成133头种猪的MC4R和OB基因检测黑素皮质素4受体（MC4R）基因对动物的采食行为,体重和能量稳态调控起着重要的作用,该基因能够通过交感神经来调节机体摄食功能,抑制摄食,导致血糖降低、胰岛素降低和瘦素含量降低,从而减少体脂,降低体重。肥胖（OB）基因的表达产物瘦素（Leptin）对家畜脂肪组织和神经内分泌有调控作用,通过对采食量和能量平衡的调节,促进家畜的生长、繁殖、泌乳和体况,其中较重要的作用是对家畜体重和能量平衡的调节。     

云南农大培育出10头转基因克隆猪

本刊辑：据都市时报2011年2月6日报道，云南农业大学最近培育出10头转基因克隆猪。 云南农业大学转基因克隆猪项目总负责人曾养志介绍说，这10头转基因克隆猪都是体细胞繁殖，它们是从英国大白猪的皮肤细胞中分离出细胞，经过培养后，把Leptin基因和水母绿色荧光蛋白基因构建到同一个载体上，获得供体细胞，再进一步构建出转基因克隆胚胎。     

三江白猪OB基因多态性及其与繁殖性能的相关性分析

试验利用PCR-RFLP法研究了三江白猪OB基因3 469位点的多态性及其与繁殖性能的相关性。结果表明:OB基因经HinfⅠ酶切后出现3个条带,表现为3种基因型(AA型、AB型和BB型)和2个等位基因(A和B),A等位基因为优势基因,基因频率为67.6%;头胎产活仔数BB型极显著高于AA型(P<0.01),BB型高于AB型,AB型高于AA型,但差异都不显著(P>0.05),BB基因型比AB型和AA型的头胎产活仔数分别高出1.65头、2.19头;不同的基因型对前5胎最高产仔数的影响差异不显著(P>0.05)。