共查询到20条相似文献,搜索用时 500 毫秒
1.
长大二元杂交猪胎儿成纤维细胞的生物学特性 总被引:1,自引:0,他引:1
【目的】研究长大二元杂交猪胎儿成纤维细胞的生物学特性。【方法】采用室温消化法从妊娠30d的长大二元杂母猪胚胎中分离胎儿成纤维细胞,利用MTT法检测第5、10、15、25、35、45、60、70代胎儿成纤维细胞的增殖能力,通过倒置显微镜观察不同代数的细胞形态,流式细胞仪分析细胞周期变化,DAPI染色观察细胞核染色质的形态以及衰老相关β-葡糖苷酶活性的染色测定等方法来判断细胞的衰老程度。【结果】①采用消化液室温消化法成功分离到猪胎儿成纤维细胞,细胞具有典型的成纤维细胞形态。②猪胎儿成纤维细胞于生长初期1~6d呈对数增长,此后进入平台期。【结论】随着细胞代数的增加,细胞的增殖能力虽有所下降,但仍然呈稳定的增长状态,各代次猪胎儿成纤维细胞生长良好。 相似文献
2.
以版纳微型猪近交系妊娠47d的胎儿为材料,采用胰蛋白酶消化法消化培养胎儿成纤维细胞,对其进行细胞形态观察、细胞冻存前和复苏后存活率测定、生长曲线绘制和染色体核型分析等生物学特征检测.结果表明,培养的版纳微型猪近交系胎儿成纤维细胞呈典型的成纤维细胞形态;细胞冻存前和复苏后的存活率分别为98.06%和92.12%;生长曲线呈"S"形,倍增时间为36h;对所制备染色体核型进行分析,显示2n=38,XY,并在体外培养14个代次后仍能保持正常核型. 相似文献
3.
4.
5.
《吉林农业科学》2014,(4):50-53
为利用核移植法获取转基因克隆猪提供供体细胞,体外分离培养猪胎儿成纤维细胞并进行了绿色荧光蛋白基因转染。首先采用组织块贴壁法分离培养猪胎儿成纤维细胞,绿色荧光蛋白表达载体以脂质法介导转染猪胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得稳定转染的细胞克隆,PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合,利用荧光显微镜检测荧光蛋白的表达。结果表明,组织块贴壁后9 d可获取原代成纤维细胞,基因转染后利用G418筛选9 d即可获得转基因细胞,对转基因细胞进行传代,PCR检测显示荧光蛋白基因整合到细胞基因组中,荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白表达,为下一步通过核移植方法获得转基因猪提供了基础。 相似文献
6.
梅山猪胎儿成纤维细胞的分离培养及SRY-PCR法快速性别鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
对梅山猪胎儿成纤维细胞的分离培养及性别快速鉴定进行研究,为开展猪体细胞克隆、诱导多能干细胞获取及转基因等提供素材。通过取组织块培养法和胰蛋白酶消化培养法均成功得到梅山猪的胎儿(胎龄35 d)成纤维细胞,取其中7个梅山猪(msz4、msz5、msz6、msz9、msz11、msz14和msz15)胎儿的原代成纤维细胞,在传代培养至第5代时收集贴壁生长的细胞,提取基因组DNA。再利用根据SRY及ZFY/X设计的共2对引物进行PCR反应,扩增后进行琼脂糖凝胶电泳,出现166 bp和445/447 bp两条带的为雄性,只有445/447 bp一条带的为雌性。结果表明梅山猪的细胞系msz6、msz9和msz14为雌性细胞系,而msz4、msz5、msz11及msz15为雄性细胞系。试验结果证明了该方法可应用于鉴定不同培养方法获得猪成纤维细胞的性别,可为试验后期的转基因细胞制备提供性别依据。 相似文献
7.
猪胎儿成纤维细胞SOD1基因差异表达研究 总被引:1,自引:0,他引:1
在研究模式生物衰老机制的过程中,发现衰老受某些特定基因的调控。为研究细胞内铜锌超氧化物歧化酶(Cu/ZnSOD,SOD1) 在不同代数的猪胎儿成纤维细胞的差异表达,本试验收集正常传代生长的5,10,15,20,25,30,35,40,45,50,55,60,65,70代的猪胎儿成纤维细胞,分别提取细胞总RNA;采用RT-PCR技术,检测不同代数猪胎儿成纤维细胞SOD1的表达。结果表明猪SOD1在第5代猪胎儿成纤维细胞中表达水平最高,随着细胞代数的增加,表达量逐渐下降,到第70代表达量为最低。结果将为进一步揭示细胞衰老的分子机制提供有价值的参考,同时为丰富猪的分子生物学提供新素材。 相似文献
8.
用Ⅰ型、Ⅳ型胶原酶消化分离兔皮肤细胞,Ⅰ型胶原酶消化皮肤块获得的细胞数显著高于Ⅳ型胶原酶。用组织块直接培养法,也可以得到皮肤的原代培养细胞。2.5g/L胰酶消化胎儿组织,可获得足够原代培养的细胞量。结合使用酶消化法和反复贴壁法,经2~3代后,可获得纯化的成纤维细胞。分离纯化的胎儿和皮肤成纤维细胞的生长曲线都正常且相似。胎儿和皮肤成纤维细胞可分别传至第13代与第11代,传代后染色体数目不变。 相似文献
9.
10.
11.
建立有效可靠的细胞悬浮培养方法对进一步开展原生质体培养和转基因研究具有重要意义。本研究以茎尖和幼穗作为外植体,采用愈伤振荡培养法、匀浆收集培养法和直接培养法三种方法进行了细胞悬浮系建立的方法研究。结果表明:与茎尖相比,幼穗是更适宜开展高粱细胞悬浮培养的理性外植体。采用三种培养方法均可建立幼穗细胞悬浮系,其中幼穗愈伤振荡培养法最为稳定可靠,幼穗匀浆收集培养法和直接培养法的稳定性稍差,但获得的细胞悬浮系生长状态较好,有利于进一步开展增殖继代培养。结果还表明,茎尖愈伤振荡培养法也是一种稳定可靠的细胞悬浮系制备方法,但茎尖匀浆收集培养法稳定性稍差,而直接培养法效果最差不宜采用。 相似文献
12.
目的:建立银染法mRNA差异显示,并与放射自显影法进行比较。方法:以大蒜提取物大蒜素处理胃癌细胞系BGC823细胞,分别进行银染法和放射自显影法的mRNA差异显示,对两种方法所得差异片段进行反向Northern杂交,比较结果。结果:由两种方法得到的片段,杂交后结果基本相符。结论:对高丰度差异表达基因筛选,银染法与放射自显影法mRNA差异显示相比更简便易行。 相似文献
13.
14.
XUE Yong-song XU Shao-zhuo XUE Cheng WANG Run-ze ZHANG Ming-yue LI Jia-ming ZHANG Shao-ling WU Jun 《农业科学学报》2020,19(6):1625-1634
The content of stone cells is an important factor for pear breeding as a high content indicates severely reduced fruit quality in terms of fruit taste. Although the frozen-HCl method is currently a common method used to evaluate stone cell content in pears, it is limited in incomplete separation of stone cell and pulp and is time consuming and complicated. Computeraided research is a promising strategy in modern scientific research for phenotypic data collection and is increasingly used in studying crops. Thus far, we lack a quantitative tool that can effectively determine stone cell content in pear fruit. We developed a program, Pearprocess, based on an imaging protocol using computer vision and image processing algorithms applied to digital images. Using photos of hand-cut sections of pear fruit stained with phloroglucin-HCl(Wiesner's reagent), Pearprocess can extract and analyze image-based data to quantify the stone cell-related traits measured in this study: number, size, area and density of stone cell. We quantified these traits for 395 pear accessions by Pearprocess and revealed large variation in different pear varieties and species. The number of stone cells varied greatly from value of 138 to 2 866, the density of stone cells ranged from 0.0019 to 0.0632 cm~2 cm~(-2), the distribution of stone cell area ranged from 0.06 to 2.02 cm~2, and the stone cell size was between 2e-4 and 1e-3 cm~2. Moreover, trait data were correlated with fruit taste data. We found that stone cell density is likely the most important factor affecting the taste of pear fruit. In summary, Pearprocess is a new cost-effective web-application for semi-automated quantification of two-dimensional phenotypic traits from digital imagery using an easy imaging protocol. This simpler, feasible and accurate method to evaluate stone cell traits of fruit is a promising new tool for use in evaluating future germplasms for crop breeding programs. 相似文献
15.
本试验旨在建立鸽小肠上皮细胞体外分离培养和鉴定的方法体系,为研究鸽小肠上皮细胞的营养转运吸收、细胞增殖代谢等机制提供原代细胞模型。采用胶原酶消化法和组织块贴壁法分离鸽小肠上皮细胞,并通过相差消化法对其纯化,最后运用免疫荧光分析和基因表达分析鉴定鸽小肠上皮细胞。结果表明,2种方法均可成功分离培养鸽小肠上皮细胞,细胞呈铺路石状排列;细胞角蛋白8免疫荧光染色呈阳性;紧密连接蛋白基因CLDN-3和CLDN-4均有表达;细胞生长曲线呈“S”形。综上所述,本试验成功建立了鸽小肠上皮细胞体外分离培养体系,为后续开展雏鸽肠道营养研究提供了细胞模型。 相似文献
16.
17.
Ghosh M Song X Mouneimne G Sidani M Lawrence DS Condeelis JS 《Science (New York, N.Y.)》2004,304(5671):743-746
A general caging method for proteins that are regulated by phosphorylation was used to study the in vivo biochemical action of cofilin and the subsequent cellular response. By acute and local activation of a chemically engineered, light-sensitive phosphocofilin mimic, we demonstrate that cofilin polymerizes actin, generates protrusions, and determines the direction of cell migration. We propose a role for cofilin that is distinct from its role as an actin-depolymerizing factor. 相似文献
18.
19.
马兜铃酸广泛存在于中草药和中成药中,该化合物已被证实可导致人类肿瘤。研究通过体外小鼠淋巴瘤细胞致突变试验来检测马兜铃酸(AA)的致突变率和药剂剂量的相关性,对试验具体所采用的96孔板法进行了详细的论述,并进而希望能够建立可以用于各种中草药遗传毒性检测的方法。经过试验证实了小鼠淋巴瘤细胞tk基因突变试验方法可以有效地检测马兜铃酸的细胞毒性和致突变性。并且随着AA剂量的增加,L5178Y细胞的相对存活率和悬浮生长率均明显降低。表明AA对L5178Y细胞具有明显的细胞毒性,并可以诱导tk基因的突变。 相似文献