枯草芽孢杆菌Tpb55抗烟草普通花叶病毒活性研究

利用三生-NN烟测定Tpb55菌悬液对烟草普通花叶病毒(TMV)钝化、预防和治疗作用结果表明,Tpb55菌悬液对TMV具有较好的钝化、预防和治疗效果,枯斑抑制率分别为96.15%、79.72%和65.71%。为进一步揭示Tpb55抗毒机理,选用易感TMV烟草品种K326为实验材料,研究以Tpb55对烟草花叶病毒(TMV)进行预防和治疗处理,测定烟草中与抗病毒性相关的部分生理生化指标的变化。结果表明,先用Tpb55菌液再接种毒液处理的烟株,对TMV的抑制作用优于先接种毒液再接种菌悬液处理,说明Tpb55对TMV的预防具有积极效果;不论在烟株接种毒液前或后,用Tpb55菌液处理烟株的叶片与只接种毒液的相比,叶片内过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性均显著提高,以接毒前Tpb55菌液处理的烟株活性水平最高。从本试验结果来看,Tpb55具较强的抗TMV活性,可通过直接接触钝化作用及诱导烟草抗病性提高来抑制TMV侵染。     

枯草芽孢杆菌菌株Tpb55的安全性毒理学研究

对枯草芽孢杆菌菌株Tpb55的安全性进行了合理的评价,就菌粉Tpb55对试验动物进行了相关的毒理学试验。结果表明,菌株Tpb55对小鼠、大鼠急性经口LD50大于5000mg·kg-1,对大鼠急性经皮LD50大于5000mg·kg-1;对兔皮肤刺激强度为无刺激性,眼刺激平均指数48h后为0,眼刺激强度为无刺激性;对豚鼠致敏率为0,属I级弱致敏物,无致敏性;对小鼠骨髓嗜多染红细孢微核以及性染色体及常染色体单价体等3项致突变试验为阴性,说明菌株Tpb55没有致突变作用。     

木霉对烟草黑胫病菌的拮抗机制

采用平板对峙法、水解酶平板活性测定、圆孔滤液法与游动孢子萌发检测、挥发性抑菌物检测等方法探讨木霉生防菌株对烟草疫霉Phytophthora nicotianae Brada de Hann的拮抗作用机制。结果表明,TR13、TR14、TR17对烟草疫霉有竞争、重寄生和抗生作用,但不同木霉菌株对烟草疫霉的拮抗作用有所不同,TR13、TR14的竞争作用较强;水解酶平板活性测定表明,3个木霉菌株均产生β-1,3-葡聚糖酶、纤维素酶,两种酶均参与烟草疫霉细胞壁的消解,以TR13与TR14酶的活性较高;3个菌株均产生非挥发性抗生素抑制烟草疫霉菌孢子萌发,但对疫霉菌菌丝的生长影响不大;TR13、TR14几乎不产生挥发性抗生素,TR17则产生挥发性抗生素,明显抑制疫霉菌生长。     

烟草叶围细菌Tpb55菌株的鉴定及其抑菌活性

Tpb55是从烟草叶面生境中分离获得的一株拮抗细菌,本研究从形态、生理生化、16S-23S rDNA转录间隔区PCR（ITS-PCR）分析,初步明确了该菌株的分类地位。光学显微镜下观察到Tpb55菌体为杆状,革兰氏染色均匀,鞭毛周生,产芽孢,各项生理生化测试指标与枯草芽孢杆菌菌株表现一致;16S-23S rDNA ITS-PCR分析结果表明,Tpb55与枯草芽孢杆菌同源性达到99.75%。Tpb55代谢产物对7种病原真菌和3种病原细菌均有不同程度的抑菌作用,表明该菌株代谢产物具有较高的抑菌活性和较广的抑菌谱。进一步研究发现,该菌株代谢产物对有机溶剂、蛋白酶、热和pH值都有很高的稳定性,是具较好开发潜能的生防菌株。     

烟草黑胫病菌培养特性的研究

研究了云南烟草黑胫病菌在不同培养基、不同温度的生长情况及不同菌龄与不同诱导时间孢子囊的产生数量。结果表明,菌株在8种供试培养基中,以燕麦培养基和选择性培养基上菌落生长最好,其次为胡萝卜培养基,在番茄汁和马铃薯培养基上生长最差。同一菌株在不同培养基上产孢量不同、产生的孢子囊大小亦有所不同。05P226菌株在玉米培养基上产孢量最高;05P55菌株在燕麦培养基上产孢量最高,在番茄汁培养基上产生的孢子囊最大,而05P62菌株在燕麦培养基上产孢量最高,在烟叶汁培养基上产生的孢子囊最大。在30℃菌丝生长速率最高,其次为28℃,以35℃生长最差。供试3个菌株间生长差异显著,以05P226生长最好,05P55菌株次之,05P62生长最差。05P226、05P55菌株皆以培养14d、诱导72h产孢量最高,最适宜试验中产孢培养。     

烯酰吗啉对我国烟草黑胫病菌的毒力研究

从山东和云南烟区采集分离了20个烟草黑胫病菌Phytophthora parasitica var. nicotianae菌株,采用菌丝生长速率法测定了烯酰吗啉对这些菌株的毒力。结果表明:20个田间菌 株的EC50值在0.60~1.28 μg/mL之间,与实验室保存的敏感菌株(S)的EC50 值(0.32 μg/mL) 相比,毒力倍数在1.87~4.00之间,均属于敏感菌株。烯酰吗啉对烟草黑胫病菌孢子囊的产生有明显的抑制作用,8.00 μg/mL的烯酰吗啉对孢子囊产生的抑制率为100％。通过烯酰吗啉对烟草黑胫病菌继代培养物的毒力比较证明,烟草黑胫病菌对烯酰吗啉存在抗性风险。     

链霉菌Sa-21对烟草黑胫病的防效及抑菌作用研究

烟草疫霉引起的烟草黑胫病,是烟草生产上的重要病害之一。为了明确链霉菌Sa-21防治烟草黑胫病的应用潜力,用盆栽试验测定了链霉菌Sa-21的生防效果,并用生长速率法等手段探讨了链霉菌Sa-21对烟草疫霉的抑菌作用。盆栽试验表明,链霉菌Sa-21菌株发酵液对苗期和成株期烟草黑胫病有较好的控制效果,最高防效可达98.39%。菌株Sa-21粗浸膏对烟草疫霉菌丝生长的抑菌中浓度为56.1 μg/mL,50 μg/mL的粗浸膏处理后可以降低50%的菌丝生物量。菌株Sa-21粗浸膏对烟草疫霉孢子囊的产生、游动孢子释放、休止孢萌发以及细胞膜透性均有抑制作用,100 μg/mL的粗浸膏基本能够完全抑制孢子囊的产生,并且对游动孢子释放的抑制率达50%以上;粗浸膏浓度为150 μg/mL时,对休止孢萌发的抑制率达94.35%;随着粗浸膏浓度增加,菌丝细胞膜的透性也会加大。研究结果表明,链霉菌Sa-21代谢物对烟草疫霉的生长繁殖产生抑制作用,并为链霉菌Sa-21生防菌剂的开发及其对烟草黑胫病的防治提供了理论依据。     

生防细菌PA2101和PG3402抑菌和促生特性的研究

以本实验室分离的在烟草生产上具有较大生防潜力的铜绿假单胞杆菌PA2101和格拉纳达假单胞杆菌PG3402为对象，测定了这2株细菌的抑菌活性及促生特性。试验结果表明，菌株PA2101和PG3402对烟草根腐病、烟草赤星病、小麦纹枯病、芝麻茎点枯病和地黄轮纹病等多种作物常见病害的病原菌具有较强的拮抗作用；2株菌株的无菌发酵滤液能使烟草疫霉和根串珠霉菌丝生长畸形、抑制根串珠霉分生孢子的萌发。菌株PA2101和PG3402产生对2种病原菌有抑制作用的挥发性物质。抑菌特性检测结果表明，菌株PA2101和PG3402均能产生蛋白酶、纤维素酶和β-1，3-葡聚糖酶等胞外酶，PA2101还能分泌几丁质酶。另外，2株菌株能合成抑菌活性物质氢氰酸（HCN）。抗生素合成基因检测结果发现，菌株PA2101和PG3402均包含吩嗪-1-羧酸（Phenazine-1-carboxylic acid，PCA）合成基因，PG3402还含有2，4-二乙酰基间苯三酚（2，4-diacetylphloroglucinal，DAPG）合成基因。促生物质的检测结果表明，菌株PA2101和PG3402均可产生嗜铁素和生长素（IAA），且具备溶磷特性。综上所述，菌株PA2101和PG3402抑菌谱较广，产生多种抑菌和促生物质，含有合成PCA和DAPG的基因，可用于烟草病害的防控。     

二氯喹啉酸降解菌嗜麦芽寡养单胞菌菌株J03生长特性及其对烟草和水稻的安全性

二氯喹啉酸被广泛用于稻田除草,其残留易对后茬作物烟草的生长造成危害。本课题组前期从福建烟区植烟土壤中分离获得的嗜麦芽寡养单胞菌Stenotrophomonas maltophilia菌株J03对烟草二氯喹啉酸药害具有较好修复作用。为明确该菌株生长特性及其对烟草和水稻的安全性,本研究测定了J03菌株对烟草和水稻种子萌发及幼苗生长的影响,同时测定了环境因子温度和酸碱度对J03菌株生长的影响。结果表明:经J03菌株处理的烟草和水稻种子,发芽率分别大于80%和95%,与空白对照无显著差异。J03菌株处理的烟苗株高、叶片数和地上部鲜重分别为2.82 cm、6.4片和6.08 g,均显著高于空白对照,其他生长参数与对照无显著差异;J03菌株处理的水稻幼苗的株高和叶面积与空白对照相比均无显著差异。J03菌株在4~40℃内均可生长,但最适生长温度为30~37℃;在pH值为5.0~9.0的LB培养基中均可生长,但最适生长pH值为6.0~8.0。综合研究表明,嗜麦芽寡养单胞菌菌株J03对烟草和水稻生长安全,且其在田间的适合度较高。     

出芽短梗霉菌株YW1防治储藏期草莓灰霉病的研究

本文研究了出芽短梗霉Aureobasidium pullulans菌株Yw1防治储藏期草莓果实灰霉病Botrytiscinerea的效果,并对其防病机制进行了初步探索。结果表明,菌株Ywl可以有效的控制储藏期草莓灰霉病的发生,发病率可由95．1％降至30．5％-55．6％,菌株Ywl产生的挥发性物质可以抑制灰葡萄孢菌丝生长,抑制率达到52．1％。去除菌体的上清液对灰霉菌无明显抑制活性,说明其抗菌作用机制可能是活菌的竞争作用。由此可见,菌株Ywl是1株有应用潜力的生防菌。