诱导子促进链霉菌702产农抗702作用机制的初探

为探讨诱导子诱导链霉菌702产农抗702的作用机制。将大肠杆菌诱导子添加链霉菌702中,测定链霉菌702发酵过程中生化指标,异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、丙酮酸脱氢酶(PDH)酶活测定以及采用凝胶电泳法分析菌体蛋白质谱带变化。结果显示,与对照相比,添加诱导子促进农抗702提前合成,可溶性氨基氮、p H值上升;发酵末期,农抗702的效价提高了47.18%。诱导子添加浓度为3.1μg/m L时,ICDHc、ACC、PDH酶活及总蛋白浓度最大,分别为1.15,0.17,0.75 U,3.38 mg/m L,比对照分别提高了2.24、2.31、0.22、0.22倍。在蛋白质分子质量为20~80 ku,对照蛋白电泳图谱有12条条带,诱导子添加浓度为1.1和3.1μg/m L时,电泳图谱中有14条条带,且有10条带比对照明显增强。试验表明,诱导子促进了农抗702的合成,提高了ICDHc、ACC、PDH酶活及总蛋白浓度,且蛋白质的种类和含量与对照差异显著,可为揭示诱导子促进微生物产次级代谢物的作用机制提供一定的参考。     

促进链霉菌702产生农抗702的诱导子筛选研究

通过分别添加非生物诱导子、生物诱导子对链霉菌702菌株进行诱导,考查诱导子对菌株合成农抗702的促进作用。结果表明,在培养32和64 h时,往链霉菌702培养物中分别加入苏氨酸和山梨醇的促进作用较明显,其中,添加苏氨酸的发酵液农抗702的抑菌圈直径比对照提高了30.25%。黑曲霉、桔青霉制备的诱导子作用不明显,而金黄色葡萄球菌制备的诱导子在培养64和96 h时添加都有促进作用,在64 h时添加效果最佳。枯草芽孢杆菌制备的诱导物只在64 h时添加抑菌效果较明显。大肠埃希菌制备的诱导子分别在培养0、32、64及96 h时添加至培养物中均能促进农抗702的产生,且在32 h时添加达到最佳状态,抑菌圈直径比对照提高了39.67%。苏氨酸和大肠埃希菌的最适添加浓度分别为50和3 μg·mL-1,其发酵产物抑菌圈直径分别比对照增加了25.78%和51.17%。     

农抗702诱导水稻抗瘟性研究

为探讨农抗702诱导水稻抗瘟性,分别采用稻瘟病易感水稻品种陆两优996和农抗702为试验材料,首先在水稻3叶1心时,将不同浓度的供试农抗702分别进行喷施,进行诱导水稻抗瘟性作用最佳浓度的筛选;然后在水稻7个不同生长发育期进行喷施药液,进行诱导抗瘟性的水稻最佳生长期和抗瘟性持续时间的测定。各试验处理喷施药液后4 d后分别接种稻瘟病菌孢子液,7 d后分别调查不同试验处理的病情指数和发病率及诱抗效果。结果表明:供试6种不同浓度的农抗702均能诱导水稻产生抗瘟性,且抗瘟性作用的较佳浓度为15μg/m L;在水稻7个不同生长发育期分别喷施浓度为15μg/m L的农抗702,均能诱导水稻抗瘟性,诱导抗瘟性较佳生长期为水稻3叶1心期,其诱抗效果达到56.56%;且水稻抗瘟性作用最佳时期为喷施后48~96 h,其诱导水稻抗瘟性的持续时间超过144 h。研究为农抗702进一步研发和防治水稻稻瘟病方法的应用提供有益的试验数据。     

链霉菌702发酵液对草莓保鲜作用的研究

采用链霉菌702发酵液对草莓的防腐保鲜效果进行了研究。通过测定不同处理草莓的含糖量、Vc变化和腐烂指数及重要的贮藏外观表明，链霉菌702发酵酒精浸提稀释50倍液和250mg／L纳他霉素处理的草莓的糖降解进度减缓，Vc含量维持较高含量，腐烂指数明显低于对照．且链霉菌702发酵液处理优于250mg／L纳他霉素处理。试验结果表明，链霉菌702发酵液对草莓有较好的保鲜效果，可有效的降低微生物的生长。     

农抗702诱导水稻抗瘟性对水稻丙二醛含量及抗氧化酶活性的影响

在水稻品种陆两优996三叶一心时,分别喷施15μg/m L农抗702、15μg/m L井冈霉素、蒸馏水,在喷雾48 h后接种稻瘟病菌,以只喷蒸馏水、不接种稻瘟病菌为空白对照,研究了农抗702诱导抗瘟性对水稻丙二醛(MDA)含量及5种抗氧化酶活性的影响。研究结果表明:与空白对照相比,农抗702处理、井冈霉素处理和只接种稻瘟病菌处理的水稻叶片中MDA含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、脂氧合酶(LOX)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)的活性均有所提高,其中农抗702处理的水稻MDA含量以及SOD、CAT和POD活性在早期显著高于只接种稻瘟病菌处理的,且APX和LOX活性上升速度及峰值高度也均高于后者的;农抗702处理的诱导抗瘟性效果能够达到或超过井冈霉素处理的。     

农抗702诱导水稻抗瘟性对水稻丙二醛含量及抗氧化酶活性的影响

在水稻品种陆两优996三叶一心时,分别喷施15μg/m L农抗702、15μg/m L井冈霉素、蒸馏水,在喷雾48 h后接种稻瘟病菌,以只喷蒸馏水、不接种稻瘟病菌为空白对照,研究了农抗702诱导抗瘟性对水稻丙二醛(MDA)含量及5种抗氧化酶活性的影响。研究结果表明:与空白对照相比,农抗702处理、井冈霉素处理和只接种稻瘟病菌处理的水稻叶片中MDA含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、脂氧合酶(LOX)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)的活性均有所提高,其中农抗702处理的水稻MDA含量以及SOD、CAT和POD活性在早期显著高于只接种稻瘟病菌处理的,且APX和LOX活性上升速度及峰值高度也均高于后者的;农抗702处理的诱导抗瘟性效果能够达到或超过井冈霉素处理的。     

不同诱导子对黄芪悬浮培养细胞中黄芪多糖积累的影响

[目的]研究水杨酸、茉莉酸甲酯、硝酸银、高糖、高盐、超声等诱导子对黄芪细胞生长和黄芪多糖合成的影响.[方法]向细胞悬浮液中加入各种诱导子或对细胞悬浮液进行超声处理,测定细胞干重增殖倍数和黄芪多糖的合成量.[结果]加入10.0 mg/L水杨酸可使黄芪多糖的含量为对照组的2.04倍;添加较低浓度的茉莉酸甲酯浓度（1.0 mg/L）使黄芪多糖的含量达48.974 mg/g,比对照提高了2.50倍;添加4 mg/L浓度的硝酸银能使黄芪多糖含量提高1.60倍;高糖和高盐胁迫处理均能诱导黄芪多糖的合成.高糖处理能使黄芪多糖的产量比对照提高了1.92倍.低剂量的超声刺激对黄芪细胞生物量的积累有显著的刺激作用.[结论]诱导子的添加可有效促进黄芪悬浮培养细胞中黄芪多糖的积累.     

潞党参对环磷酰胺诱导蚕豆根尖的抗突变作用

为明确潞党参的抗突变作用,采用不同质量浓度(0.01、0.05、0.10、0.15、0.20 g/mL)潞党参水提液对30 mg/L环磷酰胺诱导的蚕豆根尖进行恢复培养,统计其微核数,并测定还原糖含量、根系活力、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果表明,与阳性对照(30 mg/L环磷酰胺处理后蒸馏水恢复培养)相比,不同质量浓度潞党参均可降低30 mg/L环磷酰胺处理下蚕豆根尖的微核率,增加根尖还原糖含量,增强根系活力,提高SOD活性并降低MDA含量。当潞党参质量浓度为0.05 g/mL时,蚕豆根尖的微核抑制率为35.41%,还原糖含量最高,为2.81%,根系活力最高,为120.73μg/(g·h),SOD活性最高,为88.44 U/g,MDA含量最低,为13.75 nmol/g。因此,潞党参对30 mg/L环磷酰胺诱导蚕豆根尖细胞损伤有一定的抗突变作用,且以质量浓度为0.05 g/mL时效果最好。     

链霉菌702产抑真菌物质发酵培养基优化及动力学研究

用响应面分析方法对链霉菌702产抑真菌物质发酵培养基成分进行了优化研究,并对优化后链霉菌发酵动力学进行了分析。通过优化得到玉米淀粉和蛋白胨的最适浓度分别为16.83 g/L、8.64 g/L,在优化后的培养基中链霉菌702产抑真菌物质效价达到1214.52μg/ml,比优化前789.41μg/ml提高了53.85%。动力学分析表明,所选动力学模型能较好地反映链霉菌702合成抑真菌物质的发酵过程,链霉菌702发酵产抑真菌物质过程属于部分偶联型。     

两株链霉菌对小麦幼苗生长及诱导抗性的影响

研究2株链霉菌D74和Act12对小麦生长的促进作用及诱导抗性的影响,为链霉菌剂在小麦生产中的应用提供科学依据。通过皿内发芽试验、砂培和土培盆栽试验,测定2种链霉菌的混合制剂(1∶1质量比)在不同用量及处理方式下的小麦发芽率、发芽指数、种子活力、幼苗生物学性状、叶片诱导抗性及生化特性。结果表明:(1)供试链霉菌具有显著的促生功能。菌粉包衣量为每粒10mg时,小麦发芽率较对照提高41.9%(P0.05),发芽指数提高40.0%(P0.05);叶面积增加149.2%(P0.05),植株总鲜质量增加100.0%(P0.05),根系鲜质量增加220.0%(P0.05)。10倍菌粉浸提稀释液浸种,种子活力较对照提高31.8%(P0.05);包衣量每粒5mg处理根系活力提高62.7%(P0.05);10倍发酵稀释液浸种,小麦株高、叶面积较对照分别增加29.2%、27.6%(P0.05),稀释10~2~10~4倍发酵液浸种,小麦出苗率较对照提高44.0%~103.8%(P0.05)。(2)供试链霉菌可提高小麦诱导抗性。适量菌粉种子包衣及发酵滤液浸种可使小麦叶片POD酶活性较对照提高46.7%~70.0%(P0.05);菌粉包衣量每粒5mg处理小麦叶片PPO酶活性较对照提高52.5%(P0.05),10~2~10~4倍发酵滤液浸种,小麦叶片MDA质量摩尔浓度降低34.0%~40.2%(P0.05)。可见,供试链霉菌对小麦具有显著的促生作用,并能提高小麦的诱导抗性。     

新型多烯大环内酯抗生素农抗702对水稻5种防御酶活性的影响

探索新型多烯大环内酯抗生素农抗702对水稻病原真菌的防病作用机理。在水稻4~5叶期分别喷施5种不同浓度的农抗702,以喷施浓度为125μg/mL的井冈霉素药液为阳性对照,以蒸馏水为阴性对照。喷施后分别取0、1、3、5、7、9 d水稻叶片进行5种防御酶的提取和活性测定。结果表明,分别喷施浓度为75、100、125、150、175μg/mL的农抗702和浓度为125μg/mL的井冈霉素药液,其水稻叶片内SOD、POD、PPO、CAT和PAL等5种防御酶活显著高于阴性对照;在0~9 d,喷施浓度为125μg/mL的农抗702水稻叶片的5种酶活性达到或超过浓度为125μg/mL井冈霉素喷施效果。可见,农抗702能诱导水稻植株的抗病性。本结果为进一步深入研究农抗702对水稻病原真菌的防病抗病作用机理提供了理论参考。     

农抗702抗真菌活性的测定

探索农抗702的抗真菌活性.通过以农抗702为供试材料,霉菌、酵母菌以及14种植物病原真菌为供试菌,采用菌丝生长速率法和菌丝干重法测定农抗702对各种供试菌的抑制作用.结果表明农抗702对黑曲霉、青霉、毛霉、根霉、木霉、啤酒酵母、产朊假丝酵母、稻纹枯病、稻瘟病和稻曲病的最低抑菌浓度(mg/L)分别为3.3、6.5、6.5、3.3、3.3、6.5、3.3、23.8、59.64、475.4.农抗702对供试植物病原真菌的EC_(50)(mg/L)和EC_(90)(mg/L)依次是:油菜菌核病菌为0.23和1.95,葡萄炭疽病菌为0.27和2.91,车前草穗枯病菌为0.33和8.58,烟草赤星病菌为0.89和12.02,车前草菌核病菌为1.23和4.02,小麦赤霉病菌为1.40和7.38,棉花黄萎病菌为1.53和5.07,富贵竹炭疽病菌为1.73和5.61,水稻纹枯病菌为1.89和7.03,紫荆炭疽病菌为3.21和14.17,辣椒根腐病菌为3.40和20.78,交链孢病菌为4.13和22.01,稻瘟病菌为12.51和29.36,稻曲病菌为59.42和201.80.研究表明农抗702具有较强的抗真菌活性,为农抗702的应用提供有益的试验证据.     

CO_2气肥对北方棚室蒜薹生长发育及品质的影响

以大蒜(Allium sativum L.)蒜薹为研究对象,通过测定蒜薹生长发育和生理生化的的各项指标,以此评价施用不同浓度CO2气肥对北方棚室蒜薹生长发育和品质的影响。结果表明,CO2气肥浓度为1 000 m L/m3时株高和假茎粗达到最高水平,分别为341 mm和4.98 mm。CO2气肥浓度为1 200 m L/m3时叶宽达11.28 mm,最有利于叶片发育,并且蒜薹叶绿素相对含量(SPAD值)、可溶性糖、可溶性蛋白、维生素C含量最高,分别为59、15.6%、6.9 mg/g、312μg/g,分别比空白对照提高了7.3%、83.0%、35.6%、97.5%。游离氨基酸含量在CO2气肥浓度为800 m L/m3时达到最高,为2.75 mg/g,比对照提高了34.8%。蒜薹的干物质含量在CO2气肥浓度为1 000 m L/m3时最高,为12.16%,比对照高5.2%。施用CO2气肥可显著提高蒜薹的产量,在CO2气肥浓度为1 200 m L/m3时产量达到最高,为4.75 kg/m2,比对照高23.2%。大蒜素含量在CO2气肥浓度分别为800、1 600 m L/m3时达到较高水平,分别比对照提高了17%、5%。总之,在北方棚室内施用CO2气肥可以显著促进蒜薹生长发育及营养物质的积累,施肥的最佳浓度为1 000~1 200 m L/m3。     

诱导子对雷公藤悬浮细胞中雷公藤甲素积累的影响

[目的]雷公藤甲素是雷公藤主要药用活性成分之一,具有抗肿瘤、免疫抑制和抗炎等多种作用.应用植物细胞培养技术生产雷公藤甲素具有重要意义,而诱导子是提高植物细胞培养中次生代谢产物积累的有效途径之一.研究通过探究非生物和生物诱导子对雷公藤悬浮细胞中雷公藤甲素积累的影响,以期提高雷公藤甲素产量,为雷公藤悬浮细胞规模化生产雷公藤甲素等药用活性物质提供基础.[方法]以水杨酸(SA)、LaCl3以及雷公藤内生真菌NS-5、NS-17作为诱导子,研究不同类型及不同浓度诱导子添加对雷公藤悬浮细胞中雷公藤甲素积累及细胞活力、细胞生长、总糖消耗、PAL活性的影响.[结果]SA、LaCl3和内生真菌NS-5、NS-17诱导子均可促进雷公藤悬浮细胞培养物中雷公藤甲素的积累.非生物诱导子的效应大小受其浓度的影响,0.1 mg/L的SA诱导作用最好,可提高细胞活力,促进细胞生长,总糖消耗增加,升高PAL活性,雷公藤甲素产量最高是对照的3.5倍.随着浓度的降低,LaCl3对雷公藤甲素的诱导作用增强,20 mg/L LaCl3诱导下的最高含量是对照的2.0倍,同时20 mg/L LaCl3也提高了PAL活性和总糖消耗,但对细胞活力和细胞生长影响不大.内生真菌诱导子的效应大小即与诱导子种类和添加时间有关.细胞培养第4天添加NS-5、NS-17菌丝体提取物,第8天添加任一内生真菌诱导子均提高了雷公藤甲素的积累,其中NS-5菌丝体提取物的诱导效果相对最强,细胞培养第8天添加时雷公藤甲素产量最高,是对照的2.4倍,但雷公藤甲素的积累与细胞生长及PAL活性无明显的关联.[结论]诱导子的添加能够提高雷公藤悬浮细胞中雷公藤甲素的积累,诱导效应的大小与诱导子种类、添加浓度及添加时间有关.本研究中的0.1 mg/L SA、20 mg/L LaCl3及内生真菌NS-5菌丝体提取物显示了良好的诱导效果,在利用细胞培养技术进行雷公藤甲素生产中具有较好的应用前景.     

响应面法优化链霉菌702产抑真菌物质生料发酵培养基

用响应面分析方法对链霉菌702产抑真菌物质生料发酵培养基进行了研究。实验首先利用部分重复因子试验筛选出链霉菌702发酵产抑真菌物质的关键因素为玉米淀粉和蛋白胨,其次利用最陡爬坡试验逼近最大响应区,最后利用中心组合设计及响应曲面分析确定关键因素的最佳浓度。通过优化得到玉米淀粉和蛋白胨的最适浓度分别为16.83 g/L、8.64 g/L,在优化后的培养基中链霉菌702产抑真菌物质效价达到1 214.52μg/mL,比优化前789.41μg/mL提高了53.85%。     

链霉菌702对水稻种子萌发、幼苗生长及土壤微生物的影响

土壤微生物及其代谢产物往往会对作物生长产生影响。以春光1号水稻为供试种子,链霉菌702及其代谢产物为供试菌和抗生素,通过盆栽试验研究链霉菌702及其代谢产物农抗702对水稻种子萌发、秧苗素质和土壤微生物区系影响。结果表明,低浓度农抗702促进水稻种子萌发、胚根和芽的生长,根系活力提高,但含糖量下降;种子中的淀粉酶活性、蛋白质含量随农抗702浓度的升高先升后降。施加链霉菌702菌剂后土壤细菌和霉菌数量均有所减少,放线菌数量增加,硝化细菌和亚硝化细菌减少,好气性纤维素分解菌增加,土壤微生物不同生理类群的变化,加速了土壤养分循环,增强了水稻的养分吸收,从而促进水稻生长。     

铬胁迫对莴苣幼苗生长的影响

采用砂培法,研究了莴苣幼苗在生长过程中受到不同质量浓度Cr3+胁迫后,植株的叶绿素合成、可溶性糖与脯氨酸含量以及膜脂过氧化程度和抗氧化酶活性等方面的变化情况。结果表明:Cr3+≤40 mg/L时对莴苣叶绿素合成有一定促进作用,在40 mg/L时叶绿素含量最大,约为对照的145%;Cr3+≤80 mg/L能诱导并提高SOD、POD活性,在Cr3+为80 mg/L时,活性达到最大值,分别是对照的253%、287%;植株受到Cr3+(≤80 mg/L)胁迫,其体内可溶性糖含量也呈现增加趋势,在80 mg/L时为对照的207%,而高质量浓度的Cr3+(>80 mg/L)不但抑制酶的活性,而且植株体内可溶性糖含量也呈下降趋势,例如,当Cr3+为320 mg/L时,SOD、POD和可溶性糖含量分别为对照的27%、31%和24%;脯氨酸和MDA则随着质量浓度的升高而呈现增加趋势。     

铁皮石斛内生真菌诱导子制备及其可溶性糖含量测定

采用PDA(马铃薯葡萄糖琼脂)培养基固体培养、PDB(马铃薯葡萄糖肉汤)培养基液体发酵、水提醇沉透析法制备铁皮石斛内生真菌诱导子,用蒽酮比色法测定诱导子可溶性糖含量。结果表明,内生真菌DO14[拟盘多毛孢属(Pestalotiopsis)]、DO18[蓝状菌属(Talaromyces)]、DO19[炭角菌科(Xylariaceae)]、DO120[炭团菌属(Hypoxylon)]菌丝提取物(EM)诱导子可溶性糖含量在培养4d时最高,含量分别达1. 530、3. 484、1. 188、3. 015 mg/m L。不同菌株乙醇沉淀(ES)、上层清液(SL)、蛋白-多糖部位(PPF)诱导子得率存在显著差异(P 0. 05),其中DO120菌株ES、SL诱导子得率最高,分别达5. 048 7、12. 548 2 mg/g,DO14菌株PPF诱导子得率最高,达0. 840 7 mg/g。以培养4 d的EM诱导子为母液,根据得率可制备特异性ES、SL、PPF诱导子,作为内生真菌与植物互作机制研究的备选材料。     

藜麦种子总黄酮的提取及体外抑菌作用

采用96孔板微量法和牛津杯法研究藜麦种子总黄酮对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、铜绿假单胞菌的抑制作用。结果表明,藜麦种子总黄酮对供试菌株的抑制效果由大到小顺序为大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、铜绿假单胞菌,对金黄色葡萄球菌基本没有抑菌作用。最低抑菌浓度值分别为:大肠杆菌32 mg/m L、枯草芽孢杆菌64 mg/m L、白色念珠菌128 mg/m L、铜绿假单胞菌256 mg/m L、金黄色葡萄球菌512 mg/m L。说明藜麦种子总黄酮对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和铜绿假单胞菌有抑菌作用,对金黄色葡萄球菌不敏感。     

寡聚糖激发子对杨树抗溃疡病的诱导作用

【目的】研究寡聚糖激发子对毛白杨愈伤组织抗杨树溃疡病菌的诱导作用。【方法】分别采用筛选出降解杨树溃疡病菌丝体、壳聚糖、果胶糖且活性较高的寡聚糖激发子A1、B、C3诱导毛白杨愈伤组织,以无菌水处理的毛白杨愈伤组织为对照,并在诱导48 h后挑战接种杨树溃疡病菌,测定毛白杨愈伤组织内Vc、可溶性蛋白质和可溶性糖含量的变化。【结果】经A1、B、C3 3种寡聚糖激发子诱导48 h后接种杨树溃疡病菌,毛白杨愈伤组织中Vc、可溶性蛋白质含量的变化基本上呈单峰曲线,A1、B、C3 3种寡聚糖激发子诱导接种的毛白杨愈伤组织中Vc含量峰值比对照峰值分别提高了99.02％,95.46％和85.64％;寡聚糖激发子诱导接种的毛白杨愈伤组织中可溶性蛋白质含量在发病初期（0～48 h）比对照高,在发病后期（60～96 h）均缓慢下降,而对照毛白杨愈伤组织中的可溶性蛋白含量在60 h时上升到最高峰（4.48 mg/g）,均高于3种寡聚糖激发子诱导接种毛白杨愈伤组织,之后急剧下降,至96 h时为2.33 mg/g,比3种寡聚糖激发子诱导接种毛白杨愈伤组织都低;4个处理毛白杨愈伤组织中可溶性糖含量的变化呈双峰曲线,寡聚糖激发子A1、B、C3诱导接种的毛白杨愈伤组织中可溶性糖含量最大值分别比对照的最大值高42.4%,27.6%和16.5%。方差分析表明,A1、B、C3 3种寡聚糖激发子对挑战接种毛白杨愈伤组织中的Vc、可溶性蛋白质和可溶性糖含量均有极显著影响（P<0.01）。【结论】在一定质量浓度范围内,寡聚糖激发子可诱导毛白杨愈伤组织中的Vc、可溶性蛋白质和可溶性糖含量明显提高,从而增强了其抗杨树溃疡病菌入侵的能力。