橘蚜传播柑橘衰退病毒的研究进展

就橘蚜传播柑橘衰退病毒 (CTV)的传毒特性、传毒率、影响传毒率因素、与柑橘衰退病流行的关系、对混合株系的虫传分离作用以及带毒橘蚜的分子生物学检测等研究进展作一综述 .橘蚜传播 CTV的方式为非循回型半持久式 ,其从甜橙和墨西哥莱檬植株上传播 CTV的效率高于棉蚜、橘二叉蚜和绣线菊蚜等蚜虫 .橘蚜对 CTV不同株系的传毒率有所差异 ,对重型株系的传毒率较轻型株系高 .影响传毒率的因素有蚜虫发育虫态、毒源植物、接毒植物和环境条件等 .橘蚜与酸橙砧甜橙衰退病的发生与流行 ,特别是衰退型强株系衰退病的发生与流行有密切相关性 ,它是甜橙衰退病发生与流行的最主要传播介体 .橘蚜对 CTV具有分离株系的作用 ,通过单虫传播 ,可以将混合感染状态的 CTV不同株系分离而获得纯化株系 .检测橘蚜携带 CTV的分子生物学反转录 -聚合酶链式反应技术已建立 ,并已应用于检测橘蚜等蚜虫的单虫带毒情况 .讨论认为 ,不同发育虫态、毒源植物、接毒植物和环境条件等因素对橘蚜传播 CTV的影响 ,特别是毒源植物和温度条件对橘蚜传毒率的影响 ,及利用橘蚜单虫传播分离 CTV株系等方面的研究有待进一步加强     

蚜虫与蔬菜病毒流行的关系及阻断蚜虫传毒的途径

 在田间多数蔬菜病毒都以蚜虫为媒介进行传播,蚜虫与蔬菜病毒流行关系密切,了解这些关系对有效防治蚜传蔬菜病毒病有重要意义。为此,本文综述了蔬菜上主要蚜传病毒及传毒蚜虫种类;蚜虫传播蔬菜病毒病的特点;有翅蚜迁飞与蔬菜病毒流行的关系及阻断蚜虫传毒的途径等问题。     

褐色橘蚜中柑橘衰退病毒实时荧光定量 RT-PCR检测方法的建立与应用

【目的】建立SYBR Green I实时荧光定量RT-PCR方法,测定褐色橘蚜（Toxoptera citricida）中柑橘衰退病毒（Citrus tristeza virus,CTV）含量。【方法】根据CTV CP25保守序列,设计特异性引物HD-F/R,通过优化得到最佳反应条件建立橘蚜中CTV实时荧光定量RT-PCR,并进行灵敏性、重复性检验,评价该方法的可行性。应用该方法测定单头橘蚜中CTV含量。【结果】该实时荧光定量RT-PCR方法最低检测限为9.0拷贝/μL,其灵敏度是常规RT-PCR的100倍。标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系,相关性系数为0.998,扩增效率达104.7%。批内和批间变异系数均小于3.24%,表明该方法重现性好。获毒24 h单头橘蚜中CTV最低含量为2.5×103拷贝,最高含量为1.24×106拷贝。【结论】本研究建立的实时荧光定量RT-PCR检测方法能够准确检测褐色橘蚜中的CTV,可用于研究褐色橘蚜-CTV-寄主互作关系及CTV的流行。     

褐色橘蚜在健康与CTV植株上的EPG比较

利用刺探电位图谱（EPG）技术对褐色橘蚜Toxopter acitricida （Kirkaldy）在健康与感染CTV的植株上的取食行为进行了比较研究.结果显示,褐色橘蚜在二者上均产生8种取食波形,分别为非刺探波（np波）、路径波（A波、B波、C波）、Pd波、韧皮部分泌唾液波（E1波）、韧皮部被动吸食波（E2波）以及木质部主动吸食波（G波）.刺探过程中,二者非刺探总时间（np波）存在差异;褐色橘蚜在健康植株上的刺探次数最多且C波的总持续时间最长,与感病植株差异显著.感病植株上,E1波的次数和持续时间均显著多于健康植株.褐色橘蚜在感病植株上E2波的总持续时间为（241.33±24.12 min）,显著长于在健康植株上（160.30 ±24.63 min）的持续时间.由此可初步推断,感染CTV的植株在一定程度上会增加褐色橘蚜获毒与传毒的几率.     

柑橘衰退病毒株对两种橘蚜不同翅型取食行为的影响

为明确感染柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)的柑橘对不同翅型橘蚜取食行为的影响,通过刺探电位图谱技术(electrical penetration graph,EPG)对褐色橘蚜和棉蚜在感染CTV植株上的取食行为进行持续记录,与健康植株进行比较分析。结果表明,褐色橘蚜无翅型在感病植株的参数均与有翅型无显著差异;棉蚜无翅型在感病植株上的非刺探波(no penetration,np波)和路径波(C波)的总持续时间、电势落差(potential drops,pd波)的次数均显著小于有翅型,C波和刺探的次数均极显著小于棉蚜有翅型。褐色橘蚜无翅型在感病植株上的pd波的次数和韧皮部分泌唾液波(E1波)的平均持续时间显著小于棉蚜无翅型;褐色橘蚜有翅型在感病植株上的C波的次数和总持续时间、刺探的次数、pd波的次数和总持续时间均极显著小于棉蚜有翅型,韧皮部被动吸食波(E2波)的总持续时间和平均持续时间均极显著大于棉蚜有翅型。褐色橘蚜无翅型在感病植株上的刺探和pd波的次数均显著高于健康植株,但总刺探时间相反,np波、C波和非韧皮部阶段的总持续时间极显著高于健康植株,E2波的总持续时间极显著短于健康植株。表明柑橘感病状态对无翅型和有翅型的影响是相似的;柑橘感染CTV对褐色橘蚜无翅型的取食行为影响明显,且偏好健康植株,从而促进病毒的传播。     

小麦黄矮病的发生与防治

<正> 小麦黄矮病是由麦蚜传播的一种病毒病.近几年来,随着生产条件的改变和麦蚜危害的加重,小麦黄矮病也逐趋流行.据我县近年观察,其传毒蚜虫,一是来源于自生麦苗和禾本科杂草或秋作物上的带毒蚜虫,迁回麦田危害传毒;一是随着季风远距离迁飞来的带毒蚜虫,定居麦田危害传毒,是该病的初次侵染源.初次发病时间在3月上旬,以后随着带毒麦蚜的扩散危害,再次侵染.     

安徽省种传大豆病毒的初步鉴定

从我省各地征集150个大豆品种,通过种子带毒情况的测定,从中选择种子带毒率最高表现花叶和皱缩症状的“陈寨大豆”,进行了种子带毒毒源的分离。该分离物,能侵染大豆、菜豆、决明。陈寨大豆种子带毒率为27.59%。桃蚜、蚕豆蚜和棉蚜均可传毒,麦长管蚜不传毒。病毒的致死温度为63—70℃;稀释限点为10~(-4)—10~(-5);体外保毒期为3—4天,可与SMV抗血清呈阳性反应,初步认为我们所鉴定的毒源分离物为大豆花叶病毒(Soybean mosaic virus)。     

种植方式对西瓜,甜瓜病毒病发生及流行的影响

西瓜甜瓜病毒病的症状有斑驳,花叶,皱缩,多样型４类,其发生始期甜瓜地５月底６月初,西瓜较甜瓜偏晚１０ｄ左右;危害特点是早播瓜单种瓜覆膜瓜,相邻油菜和番茄地的瓜及同一瓜田四边受害严重;基本明确了订传毒蚜虫的危害周期和转主传毒循环;其流行的主要因素是有较大群体的传毒蚜虫和以油菜病毒为主要毒源之一的充足毒源。     

利用弱毒株交叉保护技术防治甜橙茎陷点型衰退病

 【目的】获得对中国甜橙茎陷点型衰退病具有防治作用的柑桔衰退病毒(Citrus tristeza virus,CTV)弱毒株。【方法】对7个国内外CTV弱毒分离株进行褐色桔蚜接种强毒株的拮抗试验,并运用p25/HinfⅠRFLP组群分析、特异性RT-PCR分析和寄主植株症状观察的方法对拮抗试验效果进行检测。【结果】本研究中所用7个弱毒株对甜橙茎陷点型衰退病均有一定的防治作用,其中弱毒株CT9、CT17和CT77对茎陷点型强毒株CT14的拮抗效果最为明显,分别为70%,50%和40%。分子检测与生物学检测的结果相一致。【结论】初步筛选出的具有拮抗作用的CTV弱毒株CT9、CT17和CT77具有应用于交叉保护的潜力,可供进一步田间区试研究。     

大白菜病毒病的蚜虫传毒规律及防治进展

<正> 天津大白菜病毒病的毒源种类和组成为 TuMV 占65.9%,TMV 占31.9%和 CMV 占2.2%,其中除 TMV 为非蚜虫传毒的种群外,TuMV 和 CMV 种群都是由蚜虫传播的非持久性病毒。为更好地指导大白菜病毒病的防治,必须对传毒介体——蚜虫的发生生态和传毒规律有比较深入的了解。     

承德春小麦黄矮病毒（WYDV）株系鉴定

承德春麦在历史上曾为河北省小麦黄矮病的主要流行区，近年再度严重流行。严重威胁着小麦生产。经多点取样，采用３种无毒蚜虫即麦长管蚜［Ｍａｃｒｏｓｉｐｈｕｍ（ｓｉｔｏｂｉｏｎ）ａｖｅｎａｅ（Ｆａｂｒｉｃｉｕｓ）］（Ｍａ）。麦二叉蚜［Ｓｃｈｉｚａｐｈｉｓ（Ｔｏｘｏｐｔｅｒａ）ｇｒａｍｉｎｕｍ（Ｒｏｎｄ）］（ｓｇ）和禾缢管蚜［Ｒｈｏｐａｌｏｓｉｐｈｕｍｐａｄｉ（Ｌｉｎｎａｅｕｓ）］（Ｒｐ）传毒进行生物测定和血清学酶标（ＤＡＳ—ＥＬＩＳＡ）试验，明确了河北省承德春麦黄矮病流行有２种株系类型；麦二又蚜、麦长管蚜株系（ＧＡＶ）和禾缢管蚜、麦长管蚜、麦二叉蚜株系）ＰＡＧＶ）混合发生，且ＧＡＶ株系为主流株系。蚜虫调查结果明确了造成该病害在生产上流行、传毒的主要蚜虫介体是麦长管蚜。试验结果为生产上抗病育种和治蚜防病提供了依据。     

蔬菜非持久性病毒病蚜虫传毒规律及防治理论与实践

蔬菜非持久性病毒病,以蚜虫为介体传毒。传毒流行是病原、寄主和蚜虫三者适应的结果,也受环境因素影响。不同种类蚜虫传毒效能有差异,传毒能力受迁飞、光照、风向、风速、湿度、温度、寄主水肥条件、营养环境等影响。菜蚜在相对湿度７８ 、温度２５～２８ ℃发育最快,一日中上午８时前、下午６时后光弱时为迁飞高峰,夜间不起飞,阴天起飞少,风速超１．８７ ｍ ／ｓ起飞受阻,暴雨可把蚜虫震落到泥土中溺死。华北地区,蚜虫迁飞高峰：春季４月中旬至５月中旬,秋季７月中旬至８月中旬。药剂灭蚜防治非持久性病毒病无效。春露地番茄、西葫、甜椒早播,秋大白菜晚播均可避病。控制蚜虫传毒的生态防治措施为：播前翻地、晒土、浇底水,降低蚜量;间、套作玉米、韭菜使蚜虫在试探取食时失毒;利用蚜虫对不同颜色反应不同,设置银灰色反光塑料薄膜避蚜;苗期用５０病毒１号乳油２５０倍喷雾防蚜。这些措施可有效地防治十字花科蔬菜病毒病,银灰反光塑料膜防效９４．２９ ,病毒１号ＥＣ２５０倍,苗期３次施防效达８６．１ ,增产３５．９ ,利用生防天敌瓢虫控制传毒蚜虫也有前途。     

青海省麦类黄矮病发生情况调查

对青海省重要麦类种植区麦类黄矮病的发生情况、株系种类及传毒介体蚜虫进行系统调查,结果表明,2013年麦类黄矮病在青海省为轻发生年,2014年为轻度流行年;冬麦区田间麦蚜在小麦灌浆期达到高峰,拔节期开始出现黄矮病病株;春麦区麦蚜在拔节期以有翅蚜形态出现,灌浆期蚜量达到高峰,孕穗期田间开始出现黄矮病病株;麦蚜在禾本科杂草和春麦上越夏,冬小麦、春小麦、青稞、栽培燕麦、野燕麦均可以感染大麦黄矮病毒;流行黄矮病株系为GAV,株系PAV有少量发生,没有发现GPV株系;传毒介体蚜虫优势种为麦长管蚜,麦二叉蚜及禾谷缢管蚜发生量较小;青海省循化、贵德等冬麦区的麦蚜可以越冬。     

甜橙和柚中CTV强弱毒株系p20的遗传变异

【目的】对7个柑橘衰退病毒(CTV)株系进行遗传变异研究,明确寄主甜橙和柚中CTV强弱毒株系p20的变异水平。【方法】运用RT-PCR、克隆及测序等技术建立CTV p20种群,并借助MEGA6构建单倍型系统发育树,运用软件DNAStar对两种寄主中CTV强弱毒种群的遗传结构、变异水平进行分析,运用DnaSP软件对各种群进行单倍型多样性、核苷酸多样性分析和中性检验分析。【结果】构建了7个CTV p20种群,由162条序列构成,包含11个单倍型,单个种群有1个或更多单倍型出现。序列分析发现,来自不同种群的单倍型对应的原始核苷酸序列一致性为88.2%—100.0%,对应的氨基酸序列的一致性为92.3%—100.0%,最低的氨基酸序列一致性发生在CT23-1和CT9-2之间;其中单倍型PeraIAC-4、CT22和CT9-1共有50条序列,对应的原始核苷酸序列一致性为100.0%,属优势单倍型,与标准株系T36亲缘关系较近;单倍型多样性最丰富的是甜橙种群PeraIAC,单倍型多样性为0.800,而单倍型多样性最低的是柚种群CT22,单倍型多样性为0.170;相比柚种群的单倍型多样性(0.170—0.552)和核苷酸多样性(0.00032—0.05919),甜橙种群具有更为丰富的单倍型多样性(0.513—0.800)和核苷酸多样性(0.04208—0.05677)。系统发育树分析表明,来自甜橙的分离株种群结构复杂,甜橙种群中检测到的单倍型与标准株系T30、T36、VT和T3均有相关性;与标准株系T3相距很近的CT31-2与优势单倍型在系统发育树上距离最远,对应的原始核苷酸序列一致性仅为88.3%。中性检验结果表明,CTV甜橙种群趋于平衡或收缩状态,而CTV柚种群除CT23外则趋于扩张状态;其中TR-514Y、CT31和CT23种群的Tajima’s D值、Fu和Li’s D*值以及Fu和Li’s F*值均为正值且达到显著水平,而CT9种群的Tajima’s D值、Fu和Li’s D*值以及Fu和Li’s F*值均为负值且达到显著水平。运用DnaSP软件对各种群进行重组分析表明,在各种群中均未检测到重组事件发生。种群变异分析发现,各种群突变克隆百分比在0—30.8%,碱基突变频率在0—7.706×10~(-4),其中CTV甜橙强毒种群有最高的突变克隆百分比(30.8%),最高的碱基突变频率(7.706×10~(-4)),最多的碱基突变数量(11个)和最多的突变位点(7个);CTV甜橙弱毒种群的突变克隆百分比和碱基突变频率均明显低于甜橙强毒种群,CTV柚弱毒种群的突变克隆百分比和碱基突变频率略低于柚强毒种群。碱基突变类型分析发现碱基突变以碱基替代为主,其中A→G突变为优势类型,仅在柚强毒种群CT3的156和157位点间检测到一个碱基插入突变类型,为碱基A插入,未检测到碱基缺失突变类型。【结论】在寄主甜橙和柚中CTV强弱毒p20种群结构及变异存在差异,CTV甜橙种群有着更复杂的种群结构和更高的种群变异水平,且CTV强毒种群变异更大。     

柑橘衰退病毒分子生物学研究进展

柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus，CTV)是对世界柑橘生产具有严重为害的重要病原物之一。近年来，CTV的分子生物学研究取得了很大的进展。本文综合有关文献，主要就CTV的基因组结构与功能、复制与表达及其分子诊断等方面进行综述。同时，本文简要指出了目前CTV分子生物学研究中存在的问题，并对研究前景做了简要展望，认为关于CTV的弱毒株系构建、弱毒系交叉保护机理、抗病毒基因工程等还有待进一步深入研究。     

水稻条纹叶枯病主要病区灰飞虱传毒率测定

水稻条纹叶枯病是由带毒灰飞虱传播的病毒病，田间灰飞虱传毒率是反映条纹叶枯病发生流行的重要指标。为明确湖州市水稻条纹叶枯病主要病区灰飞虱的传毒率，2005年笔者捕捉了本市老病区——道场乡菰城村直播单季晚稻田的二代灰飞虱成虫。进行网罩大棚繁殖饲养后。测定了五代灰飞虱成虫的传毒率，现将结果报道如下。     

华南地区甘蔗黄叶病发生及甘蔗绵蚜传毒特性研究

近年华南多个蔗区发生由甘蔗黄叶病毒(Sugarcane yellow leaf virus, SCYLV)引起的甘蔗黄叶病。田间调查显示，华南地区果蔗和糖蔗均已受到该病毒的侵染，被侵染的品种有黑皮果蔗、黄皮果蔗、ROC16、ROC22、ROC25、粤糖93-159、127Q、Q174、粤糖8388和HOCP91-555等。大多田块病株零星分布，病株率0.5%～10%，但少数田块病株率超过80%。RT-PCR扩增及扩增产物序列分析揭示，华南地区大多数SCYLV分离物 CP基因核苷酸序列(591bp)与SCYLV巴西分离物(SCYLV-B1)相应基因同一率为100%，仅少数分离物与SCBV-B1存在1至3个核苷酸的差异。本文还首次证实华南地区甘蔗上普遍发生的甘蔗绵蚜为SCYLV传毒媒介。建立了能够检出单头蚜虫及侵染早期未现症植株体内SCYLV的巢式RT-PCR技术，在超过80%的饲毒2周以上的甘蔗绵蚜无翅成虫体内检测到病毒的存在。甘蔗绵蚜除能在甘蔗植株间高效地传播SCYLV外，还可将SCYLV传至高粱、水稻及玉米幼苗，每株接种15头饲毒甘蔗绵蚜，传毒成功率分别为100%（9/9）、75%（6/8）和50%（4/8）；本试验中，甘蔗绵蚜未能将SCYLV传至小麦和香蕉。     

带毒灰飞虱对水稻条纹叶枯病的传毒率测定

[目的]为了明确湖州市条纹叶枯病主要病区灰飞虱的传毒率。[方法]用人工饲养的五代灰飞虱,对“嘉花1号”水稻进行水稻条纹叶枯病的接毒试验。将饲养的5代灰飞虱成虫每穴1头接入瓶内的试验苗上,用网罩隔离培养接虫苗,连续观察60 d,通过统计计算带毒灰飞虱传毒率。[结果]主要病区灰飞虱的传毒率为5.69%。[结论]带毒灰飞虱对水稻条纹叶枯病的传毒率较高,应密切监控灰飞虱的发生动态,防止条纹叶枯病扩散蔓延。     

小麦黄矮病毒4种株系鉴定与应用

 本文明确我国小麦黄矮病毒至少有4种株系类型。它们是麦二叉蚜禾缢管蚜株系（GPV）、麦二叉蚜麦长管蚜株系（GAV）、禾缢管蚜麦长管蚜麦二叉蚜株系（PAGV）和玉米蚜专化性株系（RMV）。血清学测定证明GPV为我国新株系。GAV、PAGV与美国MAV、PAV等株系相关，RMV与美国的相似。从超薄切片中在国内首先看到密集而清晰的球状病毒粒体。GPV与GAV抗血清具有明显的专化性，并以该株系为毒源对15000多份麦类种质资源进行了有效鉴定，同时从理论上阐明为什么麦二叉蚜是我国小麦黄矮病毒的主要传毒介体，为麦蚜与小麦黄矮病的流行测报提供了科学的依据。