大肠杆菌 K88ac-ST1-LTB基因工程疫苗菌株培养条件的优化

试验使用发酵罐对大肠杆菌K88ac-ST_1-LT_B三价基因工程疫苗菌株进行培养,从培养基、通气量、诱导剂以及诱导条件4个方面进行研究,根据该工程疫苗菌株的特性进行灭活试验研究。结果表明,改良LB培养基为该菌株的最适培养基,诱导剂乳糖100 mmol/L、诱导6 h以上,可以达到经济效益的最大化;在20万mL发酵罐中培养K88ac-ST_1-LT_B重组菌株的最适宜通气量为500 L/min。灭活试验结果显示,在37℃条件下,加入0.4%甲醛溶液搅动、灭活48 h,灭活效果较为彻底。     

云南羊源O78型大肠埃希氏菌的分离鉴定

巍山县某山羊养殖户,出生15 d内的羔羊出现共济失调等神经症状,死亡率高达85%。样品经阿卡班(AKA)、山羊病毒性关节炎-脑炎(CAE)、梅迪-威斯纳病(MV)、蓝舌病(BTV)real-time PCR及普通PCR检测均为阴性。样品(脑组织)划线接种于5%的绵羊血琼脂、营养琼脂及麦康凯琼脂培养基上,37℃培养24 h。结果:在5%的绵羊血琼脂、营养琼脂平板上生长出直径2~3 mm、稍凸、圆形、湿润、灰白色、边缘整齐、不透明的菌落;在麦康凯琼脂平板上菌落呈粉红色。经革兰氏染色镜检、细菌生化鉴定为大肠埃希氏菌,血清型鉴定为O78型。昆明小白鼠致病性试验显示,致病性较强,实验组25只小白鼠接种后48 h内全部死亡,并从死亡小白鼠肝脏和心血内成功回收到该株细菌。     

鸭疫里氏杆菌和大肠杆菌蜂胶二联灭活苗的研制与应用

广东省农科院兽医研究所黄承锋等,对鸭疫里氏杆菌和大肠杆菌双联灭活苗进行了研制。将分离到的鸭疫里氏杆菌接种于 P－ L肉汤培养基中摇振培养 24 h后,进行纯度检验,取无杂菌污染菌种培养液接种于大瓶 P－ L肉汤培养基中培养 24 h,再进行纯检后加入甲醛灭活 48 h,取灭活菌液接种于巧克力培养基中以无菌生长为准。再有,将分离到的大肠杆菌菌株接种于牛肉汤培养基培养 24 h后,进行纯检作为种子液。取无杂菌种子液接种于大瓶牛肉汤培养基中培养 24 h,再进行纯检后加入甲醛灭活 48 h,取灭活菌液接种于普通琼脂培养基中,以无杂菌生…     

副猪嗜血杆菌的分离鉴定与培养基筛选

从陕西省关中地区患多发性浆膜炎和关节炎猪场的32个样品中分离到6株细菌,并对其进行了形态观察、菌落纯培养、生化特性鉴定、PCR检测等,最终确定分离菌株均为副猪嗜血杆菌.该结果表明,关中地区存在副猪嗜血杆菌病流行;对副猪嗜血杆菌分离株最适培养基进行了筛选,将分离菌株分别接种于LB、TSA、巧克力琼脂等固体培养基上,接种12 h后通过观察菌落大小,筛选出最适合副猪嗜血杆菌生长的固体培养基TSA(加0.1 g/L NAD和50 mL/L的犊牛血清)和固体培养基巧克力琼脂(加0.8 g/L NAD).同时,将副猪嗜血杆菌分离菌株接种于LB、TSB等液体培养基中,培养至16h后,每隔4h分别取样,通过与麦氏比浊管对比确定菌液中的菌数,筛选出最佳液体培养基为TSB(加0.1 g/L NAD和50 mL/L的犊牛血清).     

犊牛致病性大肠杆菌蜂胶佐剂灭活苗的研制和检验

将血清型O111k58、O119k69、O128k67、O44k74、O144k90和O126k676个大肠埃希氏优势菌株分别接种于肉汤培养基,37℃振荡培养18 h,纯检合格即为制苗菌种。分别将6个菌株接种于营养琼脂培养基,37℃恒温培养22 h,用生理盐水洗下菌苔,细菌计数,浓缩成含菌数200亿/mL的悬液,等量混合。经甲醛灭活,以蜂胶为佐剂,按一定比例配制成100亿/mL大肠杆菌的蜂胶佐剂灭活苗。经安全试验、免疫剂量试验、免疫效力和免疫持续期试验证明本疫苗安全、有效。免疫接种1 mL,试验兔即可获得坚强免疫力,80 d保护率为100%。     

品质异常奶粉中芽孢杆菌的分离和鉴定

南疆某乳品企业生产的奶粉偶尔会出现异味、凝固、微生物检验超标等问题。为研究品质异常奶粉是否存在芽孢杆菌污染,试验将品质异常奶粉通过水浴80℃处理20 min后,接种于锰盐培养基、LB固体培养基、嗜冷培养基,分别于高温(55℃)、中温(37℃)和低温(4℃)3种培养方式进行培养。分离培养后,通过革兰染色和芽孢染色后,对镜检有芽孢的单菌落进行菌体扩增、DNA提取、16S rDNA序列PCR扩增、克隆、鉴定后送测序。序列分析结果表明:从品质异常奶粉中分离鉴定出3株短小芽孢杆菌和7株地衣芽孢杆菌。对地衣芽孢杆菌进行进化树的构建结果显示,该菌与登录号为KU986668、CP025226、MK063874、MN493780、MG97702的地衣芽孢杆菌处于同一分支,且同源性为100%。对短小芽孢杆菌进行进化树的构建结果显示,该菌株与登录号为FJ641024、MT367713、FJ641028、KU662344、DQ275671、KR780437、KF463141的短小芽孢杆菌处于同一分支,且同源性为100%。该检测结果为企业建立科学、准确、高效的微生物污染防控体系,从源头分析和控制微生物的污染途径,提高产品质量奠定基础。     

一株产耐热纤维素酶放线菌的固体发酵研究

以一株产耐热纤维素酶放线菌为材料,研究了该菌固体发酵培养基组分的改良及固体发酵工艺的优化,同时探讨了该菌与酵母混菌发酵时的产酶情况。实验结果表明,该菌株的最适培养基成分为:稻草粉与麸皮比为1、豆粕30%、KH2PO41%、MgSO4·7H2O0.2%。最佳的发酵工艺条件为:培养基的初始pH值为7、发酵温度为35℃、培养基固与水体积比为0.8、菌株接种量为5%。该菌固体产酶发酵过程中第72h接入酵母菌的效果较好,酵母菌最佳接种量为1%,浓度为4.6×105cfu/ml。     

活菌制剂对肉仔鸡盲肠微生物数量的影响

1材料与方法 1.1试验材料 1.1.1微生态制剂的制备SPF成年鸡200只,无菌取其盲肠内容物按1:10制成悬液,取样检其沙门氏杆菌、溶血性大肠杆菌、球菌阴性者为合格.将制成的悬液接种在液体培养基上(接种所用的液体培养基121℃灭菌15 min,冷却后再接种),置恒温32℃摇床培养48 h.将培养液离心(5 000g)20 min,单独收集菌体细胞用腐植酸(游离腐植酸含量为31%,含N量4%)吸附并混合,即为本实验所用的活菌制剂产品,该活菌数为5×108CFU/g,将该产品保存于4℃以下备用.     

副猪嗜血杆菌培养条件的筛选及对豚鼠的致病性试验

为筛选副猪嗜血杆菌最适培养基,将副猪嗜血杆菌血清5型标准株（Nagasaki菌株）接种固体培养基TSA、PPLO琼脂、巧克力琼脂、胰月示蛋白胨琼脂和液体培养基TSB、PPLO液体、胰月示蛋白胨和马丁肉汤,通过观察菌落大小和平板计数,筛选出副猪嗜血杆菌生长最适培养基。将Nagasaki菌株接种TSB培养基,取10h～16h不同培养阶段的培养物,腹腔接种豚鼠,确定副猪嗜血杆菌感染实验动物的最佳培养阶段。结果表明,TSA和TSB是副猪嗜血杆菌的最适培养基,副猪嗜血杆菌血清5型接种于TSB中,在37℃、200r／min培养10h～13h,菌数可达到10^9cfu／mL。     

复合微生物固体发酵玉米秸秆中试工艺研究

为了确定最佳发酵工艺条件,试验采用黄孢原毛平革菌、绿色木霉进行了混合固体发酵玉米秸秆工艺条件的中试研究。结果表明:固体发酵培养基的组成为玉米秸秆与麸皮为4∶1,加入5%的尿素、0.5%的KH2PO4、0.1%的MgSO4.7H2O;加水量为1∶1.3;发酵温度为32℃;接种比例为2∶1;接种时间为接入黄孢原毛平革菌发酵48 h后接入绿色木霉;发酵周期为120 h。混合固体发酵后含有纤维素酶420 U/g,木质素酶85 U/g,粗纤维的利用率为69%。     

A型产气荚膜杆菌产毒条件的测定

以肉肝胃酶消化汤作为培养基,对同一A型产气荚膜杆菌分离株在33℃、35℃、37℃、39℃下培养,每个温度分别培养6h,7h,8h,10h,之后提取出每组的毒素,分别测定小白鼠的最小致死量,以确定最佳产毒条件,其中在35℃、7h产毒最强。按不同剂量进行接种,发现接种剂量对产气荚膜梭菌产毒也有较大的影响。     

酵母培养物高活性菌株的分离及发酵条件优化

酵母培养物是一种集营养和保健为一体的饲料添加剂,在畜牧生产中应用广泛。从土壤样品中分离纯化得到1株生物量较高的酵母菌BLNJ03,经16S r DNA鉴定为一株酿酒酵母。采用单因素和正交试验确定菌株BLNJ03的最佳发酵条件为:以液体深层发酵20 h菌株作种子液,固体发酵培养基为麸皮90%、玉米面3%、豆粕7%,料水比1∶0.7,初始p H值7.0,接种量6%,30℃有氧发酵48 h后厌氧发酵96 h。液体深层发酵与固体发酵相结合的两步两态法,好氧发酵与厌氧发酵相继进行,得到高活菌数、高营养成分及高消化率的酵母培养物。     

一株枯草芽孢杆菌发酵培养基的优化

通过正交优化试验对一株枯草芽孢杆菌的发酵培养基进行优化,结果发现,当培养基中豆粕液为20 g/L,葡萄糖浓度为5 g/L,玉米粉浓度为2 g/L时,在接种量为5 %的情况下,采用此种配比的发酵培养基37 ℃培养24 h,活菌数最高,可达4.0×109 CFU/mL.     

猪瘟猪副伤寒混合感染的诊断报告

2002年11月,贵州省某公司从北京引进40～50kg大约克种猪(曾接种过猪瘟兔化弱毒疫苗),1周后,有30头猪先后发病,其临床症状为:体温升至40℃以上,全身皮肤发红,后期发绀,同时伴有腹泻。经青霉素等抗生素治疗,效果不显著,死亡20头,病死率达66.7%。经实验室诊断,报告如下:1材料与方法1.1材料(1)病料贵州省某公司送检病死亡猪。(2)猪沙门氏菌标准血清购于兰州生物制品研究所。1.2方法1.2.1细菌分离无菌取肝脏、脾脏、淋巴结病料分别接种在鸡鲜血琼脂培养基上37℃培养24h后,挑取鸡鲜血琼脂培养基上单个菌落接种在麦康凯琼脂培养基上37℃培养24h。1.…     

牛链球菌Ⅰ型的分离与鉴定

2005年5月份,从石河子郊区某养殖场送检的以纤维素性腹膜炎为主要剖检变化的濒死蛋鸡中,分离到2株牛链球菌,现报道如下. 1方法 1.1细菌分离 无菌取濒死蛋鸡的肝脏、心血、脾脏,划线接种于5%兔血LB平板(按常规方法配制),37℃培养24 h,观察结果,并挑取单个菌落做纯培养.     

微生态制剂对肉仔鸡血液激素水平的影响

1材料与方法 1.1试验材料 1.1.1微生态制剂的制备 SPF成年鸡200只,无菌取其盲肠内容物,制成1:10悬液,取样检其沙门氏杆菌、溶血性大肠杆菌、球菌阴性者为合格.将制成的悬液接种在液体培养基上(接种所用的液体培养基121℃灭菌15 min,冷却后再接种),置恒温(32℃)摇床培养48 h.将培养液离心(5 000 g)20 nin,单独收集菌体细胞,用腐植酸(游离腐植酸含量为31%,含N量4%)吸附并混合,即为本实验所用的活菌制剂产品,该活菌数为5×108 CFU/g,4℃保存备用.     

生物反应器悬浮培养Vero细胞制备水貂犬瘟热活疫苗

为实现利用生物反应器制备规模化、自动化生产水貂犬瘟热Vero活疫苗,在7 L生物反应器中悬浮培养Vero细胞,并考察培养基、细胞初始接种密度、培养方式、病毒感染复数和感染时间等参数对细胞增殖、病毒滴度以及细胞代谢的影响。结果显示,在含有5 g/L微载体的DMEM培养基中接种Vero细胞(30～40 cells/球),设定p H、温度、溶氧值和转速分别为7.2、37℃、50%和55 r/min,培养方式为批次培养(0～48 h)+灌流培养(48～96 h)组合方式,培养Vero细胞3～4 d或细胞密度达到200 cells/球以上时,按照MOI=0.0001～0.001吸附接毒,调低温度(33℃)继续培养100～120 h,即可获得高滴度病毒液(10~(6.5)～10~(7.2)TCID_(50)/0.1 m L),经无菌检验合格后,配制水貂犬瘟热Vero细胞活疫苗(CDV3-CL株,悬浮培养),疫苗符合《中国兽药典》三部(2015版)的规定。试验建立了7 L生物反应器悬浮培养Vero细胞制备水貂犬瘟热活疫苗的新工艺,为进一步规模化生产奠定了基础。     

仔猪副伤寒活疫苗生产用菌株生长曲线的建立及合成培养基初步应用

建立了仔猪副伤寒活疫苗生产用菌株生长曲线,获取菌株培养参数,从而实现合成培养基初步应用。将猪霍乱沙门氏菌(CVCC79500株)运用试管和三角瓶分别静置和振荡培养30 h,期间取4、8、12、18、24、30 h等6个点进行活菌计数并建立生长曲线,确定37℃静置培养18~24 h,37℃、200 r/min振荡培养8~24 h为培养稳定期。不同接菌量比较结果表明,37℃静置培养24 h,37℃、200 r/min振荡培养12 h均可达到菌体稳定期。在稳定期参数条件下,比较合成培养基与常规普通肉汤培养基对该菌的增殖效果,结果表明,37℃静置培养24 h,试管及三角瓶培养菌数分别为27×108~31×108、33×108~41×108CFU/m L;37℃、200 r/min振荡培养12 h,试管及三角瓶培养菌数分别为58×108~66×108、78×108~88×108CFU/m L。而同条件3批普通肉汤培养菌数均低于合成培养基,且批次间稳定性较合成培养基差。将合成培养基振荡培养12 h的菌液接种小鼠均10/10存活;免疫后攻毒家兔达4/5~5/5保护,与普通肉汤基本一致。合成培养基保存期试验表明,25℃避光保存28 d与当天配制的液体合成培养基,振荡培养菌数基本一致。获取的培养参数适合用于合成培养基的初步评价,研制的合成培养基培养菌数优于普通肉汤,且不影响菌体安全性及免疫原性,室温保存期可达28 d。     

副鸡嗜血杆菌A、B型攻毒用菌液制备方法的研究

通过对副鸡嗜血杆菌A型、B型攻毒用菌液的活菌计数及预攻毒效果的比较,得出使用A型菌液攻毒,菌液制备的较佳条件是:菌种接种于鸡肉汤琼脂板,5%二氧化碳,37℃培养48小时后,挑取典型菌落,接种鸡肉汤培养基,摇菌8小时后,按兽药典方法要求进行攻毒。使用B型菌液攻毒,菌液制备的较佳条件是:菌种接种于鸡肉汤琼脂板,5%二氧化碳,37℃培养16小时后,挑取典型菌落,接种鸡肉汤培养基,摇菌6小时后,按兽药典方法要求进行攻毒。     

益生菌酪酸菌CB-7发酵培养基及培养条件的研究

通过单因子试验及正交试验对酪酸菌CB-7发酵培养基和培养条件进行研究.结果表明,最优化培养基组成为玉米淀粉1.0 %,牛肉蛋白胨1.0 %,酵母膏0.5 %,乙酸钠0.3 %,NaC1 0.5 %,CaCO3 0.3 %,MgSO4*7H2O 0.05 %.确定最佳培养条件为初始pH 7.0,培养温度37 ℃,接种量7.5 %,培养36 h,菌体浓度可达8.5×108 CFU/mL,芽孢率可达95.3 %.