禽流感病毒T细胞表位与体外重建鸡MHC Ⅰ类分子结合试验

为探讨体外重建的MHCⅠ复合体BF2-linker-β2m鉴定病毒抗原肽系统能否在体外结合抗原多肽，以及不同类的MHCⅠ类分子结合相同和不同抗原多肽表位能力的差异，本研究采用人工合成的禽流感病毒的3条多肽，猪口蹄疫病毒的2条多肽，以及来源于草鱼呼肠孤病毒的2条多肽分别与4类体外重建的串联鸡MHCⅠ类分子复合体BF2-linker-β2m进行了体外结合试验。BF2-linker-β2m与不同的病毒抗原九肽按照1：10的摩尔比进行混合，作用后取反应混合物离心除去未与MHCⅠ类分子结合的抗原多肽；然后取BF2-linker-β2m分别与抗原多肽形成的复合体，利用酸洗法将结合的多肽白MHCⅠ类分子的抗原多肽结合槽中洗脱，洗脱后的蛋白和多肽混合物离心收集洗脱的多肽溶液，随后利用C18柱对洗脱的多肽进行去盐、脱酸处理；将多肽样品冻干，用基质溶解后直接点样进行一级质谱（MS）和二级质谱（MSMS）测定，结果表明，3类体外重建的BF2-linker-β2m可与禽流感病毒多肽KILTIYSTV和LLLAIVSLV结合，而不与禽流感病毒多肽TIGECPKYV以及猪口蹄疫病毒和草鱼呼肠孤病毒的4条多肽结合。证实由于MHCⅠ类分子的多态性导致复等位基因的MHCⅠ类分子结合病毒抗原表位的能力存在差异；病毒的T细胞抗原表位是MHCⅠ类分子限制性的；KILTIYSTV和LLLAIVsLV是禽流感病毒的候选表位。     

鸡主要组织相容性复合体分子结构与抗病性关系研究进展

主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex, MHC)作为鸡免疫系统中的一个重要部分，主要负责将抗原表位递呈到特异性T淋巴细胞中，诱导免疫应答反应。鸡MHC优势表达1个MHCⅠ分子BF2和1个MHCⅡ分子BLB2,其中MHCⅠ分子结合来自细胞质中蛋白多肽，MHCⅡ分子结合来自细胞内囊泡中蛋白多肽和细胞外源性多肽。MHC等位基因多态性对其分子空间结构和结合肽段特性非常重要。不同单倍型MHC由于等位基因的差异其肽结合基序也存在差异，进而影响MHC分子递呈抗原肽数量，影响T细胞免疫应答强度，最终导致不同单倍型鸡对同一病原体表现出抗性或易感性。与人MHC分子相比，紧凑且简单的鸡MHC优势表达单个Ⅰ类分子的特性可以决定鸡是否会对某种病原体存在抗性。为了更好地认识鸡MHC分子在病毒感染过程中的作用及抗病性机制，解析其结构并进行功能研究非常必要。作者主要介绍了鸡MHC的分子结构特征，重点比较了不同单倍型MHC分子结构差异与抗病性的关系，总结了鸡MHC肽结合基序和禽流感病毒抗原肽的鉴定工作，为进一步理解MHC分子递呈肽给T淋巴细胞的机制和开发T细胞表位疫苗奠...     

鸡MHCⅠ分子三维结构与抗原多肽结合特征的研究进展

随着养殖规模的扩大,鸡病毒性传染病的种类和复杂程度日益增加,许多养殖场遭受了巨大的经济损失。疫苗免疫是控制鸡病毒性传染病的主要手段,但由于多种原因,使免疫鸡群仍有疫病暴发。多项研究表明,鸡主要组织相容性复合体Ⅰ类分子(MHCⅠ)在抗病毒免疫应答中起着十分关键的作用,MHCⅠ决定鸡对马立克氏病毒(MDV)、劳氏肉瘤病毒(RSV)等病毒的抗性与易感。编码BF分子(鸡的MHCⅠ分子)的BF基因(鸡的MHCⅠ)包含两类Ia基因,即BF1 (以前称为BFⅠ、BFⅡ或次要的BF)和BF2 (以前称为BFIV或主要的BF)基因。在确定BF2分子结构和功能方面的研究,已经取得了相当深入的进展,之后的研究明确了BF2分子是鸡唯一的以递呈抗原方式来诱导CTL特异性免疫反应的分子。多项研究表明,鸡BF2分子三维结构与鸡马立克氏病(MD)和劳氏肉瘤病(RS)等病毒病的遗传抗性密切相关。论文以鸡BF2分子三维结构与抗原多肽结合特征为出发点,对鸡BF2分子三维结构进行分析,并着重分析其与抗原多肽相互作用关键位点的空间结构,进而从结构免疫学角度,解析鸡BF2分子对MD/RS遗传抗性的影响,为养禽业中抗病育种、病毒多肽抗原筛选及疫苗设计提供理论依据。     

鸡主要组织相容性复合体的结构与功能研究进展

鸡主要组织相容性复合体(MHC)分子是免疫应答过程中抗原递呈的分子基础,利用其多肽结合特性可鉴定病原的T细胞表位,阐述不同单倍型鸡的抗病机制。论文总结了鸡MHCⅠ类分子的结构特征,分析了与哺乳动物MHC分子在结构上的差异,并对鸡MHCⅠ、MHCⅡ、MHCⅣ类分子在免疫应答过程中功能的研究进展做了综述。     

淮南麻黄鸡MHCⅠα链基因的克隆及序列分析

典型的主要组织相容性复合体(MHC)是抗原递呈的关键分子,具有重要的免疫功能,与多种疾病密切相关。为深入了解地方品种鸡MHCⅠ类α分子的特征,尤其是抗原结合区域的特点,通过RT-PCR技术获得了29个淮南麻黄鸡完整的α链基因,并进行了分析。结果显示,淮南麻黄鸡MHCⅠα分子高度多态,但主要集中在α1和α2区域,该区变异氨基酸位点共68个,其中高度变异22个。淮南麻黄鸡MHCⅠ分子α1和α2区域氨基酸序列同源性介于79.3%~99.5%之间,仅少部分序列完全一致。鸡氨基酸序列同源性与鸭较高,介于57.6%~64.1%之间;其次为人和鼠。进化分析显示,淮南麻黄鸡MHCⅠ分子α1和α2区域分属于两个类群,但未显示明显的品种差异。此外,鸡与鸭的亲缘关系较近,与其他物种则遗传距离较远。研究结果表明,淮南麻黄鸡MHC分子在进化过程中呈现高度的多态性,但受到病原体的选择压力,多态性主要位于抗原肽结合部分的α1和α2区域。     

MHC-Ⅰ类分子抗原递呈与病毒免疫逃逸

简要阐述主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类分子递呈抗原过程,分析病毒干扰MHC-Ⅰ类分子抗原递呈所采取的策略,以期揭示病毒的免疫逃逸机制,为病毒疫苗的研制提供一定的思路。     

鸡β2微球蛋白基因克隆及其在大肠杆菌中的高效表达与纯化

β2微球蛋白（β2m）是组成主要组织相容性复合体（MHC）Ⅰ类分子复合体的轻链分子,对于MHCⅠ类分子在细胞表面稳定表达和有效递呈抗原肽必不可少。本试验从来航鸡全血细胞中克隆了鸡β2m（Chβ2m）全基因,利用软件预测了其信号肽序列,并构建了表达成熟Chβ2m的重组载体,在大肠杆菌表达系统中以包涵体形式高效表达。将所得包涵体溶于8 mol/L脲,并在变性条件下对包涵体中的重组Chβ2m进行纯化,获得了高纯度的Chβ2m,为制备MHCⅠ四聚体及探索禽类MHCⅠ类分子结构与功能的关系提供了条件。     

鸡恒定链协助抗原肽结合MHCⅡ类分子并进入细胞内吞体

为探明鸡恒定链(invariant chain,Ii)的胞质区/跨膜区[Ii(Cyt/Tra)]作为载体是否可携带抗原肽在细胞内结合MHCⅡ类分子和进入转运途径的细胞器(内吞体),构建4个基因目的片段[Ii、Ii(Cyt/Tra)、F2(新城疫病毒F蛋白片段)和Ii(Cyt/Tra)/F2],分别将它们插入原核表达载体pET-32a和真核表达载体pmCherry-C1/N1中,构建8个重组质粒,再转入工程菌(E.coli)和人肾细胞系(293T),并应用拉下法(pull-down)检测目的蛋白与MHCⅡβ的结合,应用激光共聚焦确定它们在真核细胞与MHCⅡβ的共定位以及在内吞体的定位。结果表明,构建的重组质粒均能相应地原核或真核表达相应目的蛋白;Ii、Ii(Cyt/Tra)和Ii(Cyt/Tra)/F2不仅能够与MHCⅡβ结合,还能进入细胞内吞体;但是F2既不能与MHCⅡβ结合,也不能进入内吞体。Ii活性片段Cyt/Tra不仅本身具有结合MHCⅡβ的作用,而且还可以携带抗原肽与之结合并一起转入细胞内吞体而进入抗原递呈途径。该结果为进一步研究Ii载体转运抗原提供了理论依据。     

乌骨鸡和珍珠鸡BF2与β微球蛋白(β2m)基因克隆及品种多态性分析

克隆了乌骨鸡（BF2＊SI）和珍珠鸡（BF2＊NM）群主要组织相容性复合体I（MHC class I）和β微球蛋白（β2m）基因，分析了其分子特征与等位基因多态性。BF2＊SI相互问氨基酸同源率为75．5％～93．9％，保留了人HLA-A2与抗原多肽结合的7个关键性氨基酸。BF2＊NM相互问氨基酸同源率为81．1％～98．5％，保留了人HLA-A2与抗原多肽结合的6个关键性氨基酸。BF2＊SI在α1和α2区（抗原多肽结合区，PBD）有24个高置换率位点，置换率最高的为69位和9位。BF2＊NM在PBD区共有6个高置换率位点。BF2＊SI PBD发生氨基酸置换的位点数大于来航鸡BF2，BF2＊NM PBD区氨基酸置换的位点数和置换率则远远小于来航鸡BF2。根据同源率，将BF2＊SI α1区分为4类，α2区分为3类，α3区分为3类，并由此聚类为5个系谱（A-E）。将BF2＊NM α1区分为3类，α2区分为3类，α3区分为1类，并由此聚类为3个系谱（A～C）。比较发现BF2＊03SI、BF2＊04SI和BF2＊05NM的α1区与抗马立克氏病的BF2＊2I同源率最高（分别为86．4％、86．4％和87．5％）；BF2＊05SI和BF2＊05NM的α2区与BF2＊2I同源率最高（均为93．4％）。另外，根据成熟肽区的氨基酸序列可将乌骨、珍珠鸡β2m分为两类，第一类和来航鸡β2m（M84767）氨基酸序列完全相同，第二类与第一类相比，氨基酸序列相互间同源率为85．7％。结果揭示了各类鸡的MHCI和β2m基因具有品种分子特征。     

肿瘤多肽疫苗研究进展

肿瘤的发生、发展和治疗与机体免疫系统功能密切相关,伴随着肿瘤抗原、抗原递呈、T细胞识别机制的突破性研究进展,研究者发现抗肿瘤多肽疫苗能够通过肿瘤抗原多肽识别抗原递呈细胞表面的主要组织相容性复合体(MHC)分子,形成肽-MHC-T细胞受体复合物,引起相应的细胞毒性T淋巴细胞免疫反应,从而杀伤肿瘤。因此,研制既能打破肿瘤患者存在的免疫耐受又能诱发针对肿瘤相关抗原特异性免疫应答的高效多肽疫苗已成为肿瘤免疫治疗研究的热点。论文综述了肿瘤多肽疫苗抗肿瘤相关机制及其在该领域所取得的最新临床研究进展。     

MHC分子在动物疫病防治中的作用

主要组织相容性复合体(MHC)是个高度多态性的基因群。MHC基因产物根据结构和功能的不同可分为4种类型:MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ、MHC-Ⅲ及MHC-Ⅳ。其中MHC-Ⅰ、MHC-Ⅱ类是能够递呈抗原的分子,在调节免疫应答和免疫细胞发育中发挥作用,而MHC-Ⅲ和MHC-Ⅳ类分子具有与免疫反应相关的其他功能。在某些病毒感染的疾病中,病毒     

畜禽疱疹病毒逃避CTL识别的策略：干扰MHC-Ⅰ分子抗原递呈途径

畜禽疱疹病毒持续感染会损害养殖动物的健康，影响生产性能。借助自身强大的免疫逃避能力，疱疹病毒可以有效抵抗畜禽宿主免疫系统的识别和清除。疱疹病毒在复制过程中，充分利用宿主细胞加工机制产生多种分子类型，干扰MHC-Ⅰ介导的抗原递呈途径，从而避免被细胞毒性T细胞清除。解析病毒蛋白下调MHC-Ⅰ的分子机制是疱疹病毒研究的热点领域之一。本文总结近十年来畜禽疱疹病毒调节MHC-Ⅰ分子的研究进展，按MHC-Ⅰ递呈抗原的不同阶段详细介绍相关蛋白的分子机制，分析了病毒同源蛋白的结构域和功能差异，指出本研究领域目前存在的问题和今后需要突破的方向，以期为治疗畜禽疱疹病毒感染、开发和优化疫苗提供新的视角。     

免疫佐剂的研究进展

佐剂（A山uvants）是先于抗原或与抗原同时注射于动物体内，能非特异性地改变或增强机体对该抗原的特异性免疫应答的物质，亦称免疫增强剂。[1]佐剂可选择性的改变免疫应答类型，产生体液和／或细胞免疫。改变体液抗体种类，IgG亚类及抗体的亲和性。佐剂可改变抗原的构型，使疫苗诱导T－辅助细胞和细胞毒T淋巴细胞（CHL）反应。佐剂可改变兔疫反应为MHCⅠ型或MHCⅡ型、MHCⅠ型反应通常是在细胞内寄生的病原体如病毒感染时产生，诱导CTL，而蛋白质或多肽抗原则不能诱导。佐剂如免疫刺激复合物，QS21与蛋白质、多肽或灭活病毒结合可…     

动物免疫失败原因分析与对策

免疫接种是预防和控制疾病的有效途径。只有优质的疫苗、良好的运输、保存条件和正确的使用方法,才能产生良好的免疫预防效果。因种种原因造成的免疫失败时有发生,如何避免免疫失败是一个令人关注的话题。本文将对相关问题进行简要分析。宿主方面的因素个体差异机体的免疫应答主要受遗传因素的影响。在一个畜禽群体中,不同遗传背景的动物对同一抗原产生的免疫应答有明显差异。究其原因,是因为调控特异性免疫应答的基因即主要组织相容性复合物(MHC)不同,即不同宿主带有不同的MHC等位基因。MHC基因编码MHC分子,参与抗原递呈,MHC-I类分…     

家禽MHC的结构与遗传效应

MHC是重要的免疫分子,能够稳定的遗传,并且与疾病有明显的相关性。研究家禽MHC分子特性是阐明机体免疫机制的重要途径之一。本文就家禽MHC基因结构与多态性、抗原递呈作用以及其与疾病和生产性能的相关性等方面进行了阐述。     

羊MHC基因的研究现状

<正>MHC即主要组织相容性复合体（MHC）由紧密连锁、高度多态的基因位点所组成的染色体上的一个区域^[1],连锁于一条染色体上的MHC基因构成一个单倍型。MHC分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类分子,其中Ⅰ、Ⅱ类分子分别提呈内源性和外源性抗原肽,Ⅲ类分子与免疫因子相关。MHC基因产物在各种细胞表面表达,控制免疫细胞之间的相互作用。它早期源于解释器官移植中受体排斥供体组织细胞的现象。1936年,Corer在小鼠体内首次发现了     

家禽MHC的结构与遗传效应

MHC是重要的免疫分子，能够稳定的遗传，并且与疾病有明显的相关性。研究家禽MHC分子特性是阐明机体免疫机制的重要途径之一。本文就家禽MHC基因结构与多态性、抗原递呈作用以及其与疾病和生产性能的相关性等方面进行了阐述。     

5类等位基因鸡BF2胞外区基因的克隆、可溶性表达和纯化

从鸡脾脏中提取总 RNA,以总RNA为模板,5’-ATC TAG AGG TAC CGG ATC C-(T)₁₅-3’为反转录引物,采用TaKaRa AMV反转录酶合成First-strand cDNA (fcDNA)。根据GenBank中登录的鸡的BF2基因胞外区序列,设计了含EcoRⅠ和 HindⅢ 酶切位点的2对引物,分别扩增鸡BF2的胞外区基因。PCR产物经纯化回收后,插入到含LacZ基因的原核克隆载体pGEM-T Easy中,转化至大肠杆菌JM109感受态细胞,经EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶切及PCR鉴定,筛选出阳性克隆。再把所克隆的片段亚克隆到表达载体pMAL-p2X vector,构建重组质粒p2X/BF2（1-5）。将重组表达质粒转化入大肠杆菌TB1感受态细胞,筛选阳性克隆,经IPTG诱导表达后,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析。结果表明,本研究克隆了5类鸡BF2的胞外区基因序列,试验结果证明本研究已成功克隆并可溶性表达了5类BF2胞外区蛋白质分子,全长约807~819 bp,编码约269~273个氨基酸。采用淀粉树脂柱亲和层析和DEAE凝胶过滤方法对表达产物进行了纯化,并对纯化的表达产物进行了western blot鉴定。本研究为进一步利用BF2的胞外区在体外构建MHC Ⅰ类分子结合筛选抗原表位肽平台奠定了基础。     

新疆哈萨克绵羊MHC Ⅰ类分子基因的克隆与生物信息学分析

为了研究新疆哈萨克绵羊主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类分子基因序列的多态性,采用PCR和测序的方法分别克隆新疆哈萨克绵羊MHCⅠ类分子基因重链和轻链的c DNA全长,并进行生物信息学分析。结果表明:成功扩增出新疆哈萨克绵羊MHCⅠ类分子基因重链、轻链,大小分别为1 107 bp、357 bp;通过生物信息学软件预测蛋白质分子质量分别为90 ku和29.694 ku;等电点(p I)分别为5.00,5.23;重链富含G、C碱基,有两段跨膜螺旋,最大疏水指数为3.622,最小疏水指数为-2.922,预测整条肽链表现为亲水性,在1~84位碱基之间存在信号肽;轻链四种碱基含量基本一致,也有两段跨膜螺旋,在1~63位碱基之间存在信号肽。新疆哈萨克绵羊MHCⅠ类分子基因编码蛋白质的二级结构以无规则卷曲元件的含量最高,该蛋白质的三级结构由一条α链,另一条为β链通过非共价键组成,由α1、α2组成抗原结合槽;NCBI数据库中不同地区的哈萨克绵羊的MHCⅠ类分子基因的同源性在89.87%~99.91%之间,与数据库中牛的MHCⅠ类分子基因同源性达到了98.88%,轻链MHCⅠ类分子基因还与猪和人的同源性相对较高。     

猪MHC结构与分类研究进展

猪主要组织相容性复合物(MHC)位于第7号染色体上,一般分为3大类,即Ⅰ类基因、Ⅱ类基因和Ⅲ类基因。近年来又发现非传统的称之为Ⅳ类的基因,约长300kb。MHC分子不但具编码移植抗原、调控免疫应答中免疫球蛋白和补体的生成等功能,而且其产物还具产生及转运抗原多肽等方面的作用和功能。