不同温度解冻对冻后精子活力及生存时间的影响

不同温度解冻对冻后精子活力及生存时间的影响郝爱玲阿淑艳李淑坤（黑龙江省家畜繁育指导站哈尔滨１５００６０）牛冷冻精液质量的好坏，直接影响受胎率，影响着养牛户的经济效益。而冻后精子活力及生存时间（解冻后３７℃保存４小时精子活力）又是冷冻精液质量中最重要的...     

离心条件对犬精液冷冻保存精子活率的影响

通过手握法,采集的精液汇集,分成3等份,分别用3种离心条件离心。对离心后的精液进行稀释冷冻。解冻后保存在37℃水浴中,0~6h测定精子活率、对精子活力进行评估。结果表明,解冻后放入37℃水浴中,立即检查,3种离心处理组在0h精子活力、活率差异不显著（P〉0.05）。精子活力、精子活率随保存时间的增加明显下降（P〈0.05）,3组之间变化差异不显著（P〉0.05）。     

磁场对低温保存牛精液的影响

将５ｍＬ稀释后的新鲜精液分为５组，每组１ｍＬ。取其中１组作为对照组，不经磁场处理，其余４组分别放入磁化杯磁化２ｈ、５ｈ、２４ｈ和一直磁化，５组均放在冰箱０－５℃的环境中保存。对其精子活率、顶体完整率和精子存活时间进行分析，试验重复１５次。结果表明，精液经过磁化可以提高活率，并且延长了存活时间，尤以磁化５ｈ效果最明显，其存活指数比对照组提高了２３．７％，差异显著。磁场能使精液的顶体完善率下降，且随着     

不同离心条件对犬精液冷冻保存质量的影响

为评估3种离心条件对犬精液解冻后的影响。将手握法采集的精液分成3等份,分别用3种离心条件离心、稀释冷冻,解冻后保存在37℃水浴中,0-6h测定精子活力、活率、畸形率、顶体完整率。结果表明,3种离心处理组的精子0h活力、活率、畸形率、顶体完整率差异不显著（P〉0.05）,但随保存时间的增加明显下降（P〈0.05）,3组之间变化差异不显著（P〉0.05）。     

牛细管冻精解冻后常温保存对受胎率的影响试验

[目的]为测试牛细管冷冻精液解冻后在常温水中的保存时间对精子活力的影响,为非定点配种寻求有效简便的冻精携带方法,观察精子在不同解冻温度下的存活时间及受胎率。[方法]选择5个解冻温区及不同时间解冻肉牛细管冻精,解冻后置于常温水(17℃~19℃)中保存,观测解冻温度和精子存活时间对受胎率的影响。[结果]50℃、60℃、70℃、解冻后精子的保存时间差异不显著,保存至72h时精子活力均低于0.35;受胎率差异不显著;随保存时间延长,受胎率呈下降趋势,在48h以内情期受胎率和总受胎率分别维持在61.8%~67.1%和91.9~95.8。[结论]70℃各时间段解冻后保存效果最佳,60℃解冻组次之,二者在精子活力≥0.35时情期受胎率和总受胎率达到63.0%、92.5%,略高于当地黄牛两项受胎率的平均值61.1%、91.7%,解冻后细管精液置于常温水中携带到较远的区域输精对精子活力、母牛受胎率无影响。     

死精子对猪精液17℃液态保存的影响

为揭示17℃液态保存过程中猪精子质量和功能持续下降的机制，本试验采集9头在役的不同品种公猪（长白、大白和杜洛克）的精液48份，使用BTS溶液等体积稀释后分为3份，其中的两份分别使用反复冻融（方法 A）和低渗处理（方法 B）方法杀死精子并离心获得稀释液A和B，将另一份精液样品离心分离精浆（Seminal Plasma,SP）和精子。分别使用不同体积比例稀释液A:精子（1:1、4:1和19:1），稀释液B:精子（1:1、4:1和19:1）,SP:精子（1:1和4:1）和BTS:精子（4:1）重悬离心后的猪精子，以SP和BTS重悬的精液及原精液样品作为对照，所有精液样品于17℃下保存3 d。结果表明：随着保存时间的延长，所有稀释液和稀释倍数处理均损伤了精子活率和活力（P<0.01）及质膜完整性（P<0.05）。稀释液A比B引起的精子脂质过氧化水平更低（P<0.05）。5倍稀释精子，稀释液B的精子活力较BTS组降低（P<0.05），稀释液B引起的精子细胞内活性氧族（ROS）水平比稀释液A更高（P<0.05），而精液总抗氧化物（TAC）水平更低（P<0.05）...     

鸡精液稀释配方对低温保存精子活力和输精效果的影响

为了完善中国南方地区鸡场公鸡精液的保存技术、提高精液的利用率，本试验研究了在低温（4 ℃）保存的条件下，不同的保存时间（0、4、8、24 h）、不同的稀释液配方（原精液、配方Ⅰ和配方Ⅱ）对精液的精子活力变化以及人工输精繁殖效果的影响。选用33周龄黄鸡母鸡192只、公鸡42只，192只母鸡依笼号分为12组（3种处理精液×4个保存时间），每组16只母鸡，公鸡不分组。统一采精后用两种不同稀释液稀释、低温（4 ℃）保存至0、4、8、24 h后观察精子活力，并对母鸡输精，分组收集鸡蛋，对各组受精率、出雏率、健雏率进行比较分析，以原精液低温保存作为对照。结果显示，两种稀释液组的精子低温（4 ℃）保存4、8、24 h，其精子活力极显著高于原精液组（P<0.01），配方Ⅱ组精子的活力高于配方Ⅰ组（P>0.05）；两种配方稀释液组的精液低温（4 ℃）保存4 h，输精受精率高于原精液组（P<0.05）；两种配方稀释液组的精液在低温（4 ℃）保存8 h，输精受精率极显著高于原精液组（P<0.01）。表明这两种精液稀释液更有利于精液保存，经稀释后的精液可以显著提高受精率，可为中国南方鸡场种公鸡精液保存技术的完善提供有力的数据支撑。     

犬精液冷冻及解冻技术研究

犬冷冻精液质量的好坏直接影响受胎率 ,影响养犬户的经济效益。而冻精解冻后精子活动和生存时间 (解冻后 37℃保存 4ｈ精子活力 )又是冷冻精液质量中最重要的两个指标。我们进行了同一样品 ,采用不同温度解冻 ,对冻后精子活力及生存时间影响的对比试验。目的是寻找最佳的解冻温     

谷胱甘肽提高牛冻精活力及受胎率的研究

冻前于牛稀释精液中添加３２ｍｍｏｌ／Ｌ还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）做为试验组，对照组冻精中无ＧＳＨ。结果表明：冻精刚解冻后精子活力试验组比对照组高７５％（Ｐ＜００１）；解冻后稀释精液在３７℃水浴中保存３小时后，精子活力和顶体正常精子数量试验组比对照组分别高７８％（Ｐ＜００１）和４４５％（Ｐ＜００５）；３７℃水浴条件下保存时精子寿命试验组比对照组平均延长３２ｍｉｎ（Ｐ＜００１）；此外，ＧＳＨ使母牛情期受胎率提高了６２４个百分点（Ｐ＜００５）。     

牛冷冻精液的保存及使用

精液冷冻保存是将精液进行特殊处理，保存在超低温条件下以达到长期保存的目的。通常采用液氮（－１９６℃）和干冰（－７９℃）保存。其最大优点是可长期保存，使用不受时间、地域以及提高种用公牛的利用率。１稀释液配方１２％的蔗糖液７５mL、甘油５mL、卵黄液２０mL。２稀释方法将经过检查合格的精液（活力０．６以上、精子密度中等）按１∶２～５倍稀释液进行稀释，稀释后应保证每个颗粒精液中所含精子数不少于３０００～４０００万个，解冻后呈直线前进的精子数３冷冻在装有液氮的容器上置一铜纱网，距液氮面２cm左右，温度维持在－…     

温度与稀释液pH对猪精液常温保存效果的影响

 为提高猪精液常温保存的效果,研究不同温度和稀释液pH对猪精液常温保存效果的影响。结果表明：（1）当精子活力分别为50％和30％时,配方Ⅰ与Ⅱ稀释液保存的精液,在温度为15~20 ℃条件下的精子存活时间均显著高于21~25 ℃（P<0.05）;在pH为6.5~6.9条件下的精子存活时间均显著高于6.0~6.4（P<0.05）;（2）精子顶体染色结果表明,适宜温度与pH条件下,精液保存48 h后,顶体完整率达到96%以上。研究结果表明,猪精液常温保存适宜温度为15~20 ℃,适宜PH为6.5~6.9。     

不同稀释液和温度对猪精液稀释及常温保存效果的影响

本试验分别设计了4种稀释液配方和保存温度。结果表明：1号稀释液（即变温液）对原精液稀释保存效果最好,精子活力、有效存活时间、总存活时间和生存指数分别为0.75、101.5 h、134.6 h、76.8 h,稀释后的精子活力与其他组之间差异不显著（P〉0.05）;精子有效存活时间、总存活时间、生存指数1号与2号配方差异不显著（P〉0.05）,但与其他配方组之间差异极显著（P〈0.01）;且试验得出,17℃条件下保存的稀释精液,其活力、存活时间的生存指数等个指标最高,保存效果最好。     

干冰用于鸡超低温冷冻精液短期保存和运输的可靠性评估

为解决液氮保存下鸡冷冻精液的异地运输难题,研究对北京油鸡冷冻精液在干冰（-79℃）中进行短期保存,分别保存0 h（对照组）、12 h、24 h、48 h和72 h,以模拟冷冻精液在干冰中的短期运输,并测定干冰不同保存时间的鸡冷冻精液精子质量和受精能力。结果显示：干冰保存后北京油鸡冷冻精液的精子活力、存活率、顶体完整率、质膜完整率和受精率均显著降低（P<0.05）,精子畸形率显著增高（P<0.05）,且随着干冰保存时间的增加,精子质量和受精能力逐渐下降。研究表明,干冰作为冷源对鸡冷冻精液的精子质量有较大的损害作用,使用干冰难以实现对鸡冷冻精液的有效短期保存和运输。     

猪精液保存时间及不同稀释液配方试验

采用磷安液作稀释液,恒温１４℃保存,结果表明：精液维持有效活力０．５级的保存时间为１２０ｈ,比对照组采用葡柠液,室温保存延长１８ｈ。保存至４８ｈ的精液其精子畸形率和顶体异常率与采精当天差异不显著（Ｐ〉０．０５）。并用其精液给母猪输精,情期受胎率比对照组（采精当天或室温何存至２４ｈ）略高（Ｐ〉０．０５）,产仔数和仔猪成活率也无显著差异。     

不同条件对牛卵母细胞体外成熟的影响

本研究分析了卵巢不同离体时间（＜３ｈ、４～５ｈ、＞６ｈ），不同培养时间（１８～２２ｈ、２３～２４ｈ、＞３０ｈ），不同成熟培养液（添加ＦＳＨ、ＨＣＧ、ＦＣＳ）以及不同培养温度（３４℃、３６℃、３８．５℃）对卵母细胞体外成熟的影响。结果表明，小于３小时离体时间成熟率、受精率（７８．８３％、５８．０％）高于其它组；培养时间大于３０小时组成熟率高于其它组（９３．８１％），但受精率低于其它组（２３．０％）；添加ＨＣＧ与ＦＣＳ组成熟率、受精率（８９．４％、７８．９５％）大于ＦＳＨ组；培养温度以３８．５℃为佳，成熟率与受精率（８７．２％、７３．６％）皆高于另二组，差异显著。     

Percoll法处理牛精子对体外受精胚胎发育的影响

牛冷冻精液解冻后，在Ｐｅｒｃｏｌｌ梯度液中４００ｇ离心２４ｍｉｎ有效地获得了５７．８７％±８．０％的精子回收率；对照组上游法精子回收率仅为１５．８７％±１．９％（Ｐ〈０．０５）。Ｐｅｒｃｏｌｌ和上游２种方法分离的精子在受精液中８，１８ｈ后的活率，分别为６０％，１０％和７０％，２０％，２种浓度Ｐｅｒｃｏｌｌ法分离的精子对不同成熟处理的卵母细胞体外受精子（ＩＶＦ）卵裂率的影响，精子最终浓度为２×１０＾     

波尔山羊冻精解冻方法效果的分析

采用不同解冻方法对波尔山羊冻精精子活力、存活时间、顶体完整率、死活染色率以及受胎率几方面的影响进行试验分析。结果表明：８０℃高温干解冻最理想，活力０．３￣０．４，存活时间１２￣１８ｈ，优于４０℃低温湿解冻（Ｐ＜０．０５）；干解冻效果与温度呈正相关关系，以８０℃为量好，湿解冻与温度呈负相关关系，以４０℃为最好；精子存活时间与受胎率呈正相关关系；一次性解冻一粒冻精活力最好，两项指标均超过一次解冻多粒冻     

应用CASA系统对公猪精子活力和活动率影响因素的研究

为了探讨品种、密度、温度和时间对公猪精子活力的影响,试验利用计算机辅助精子分析(CASA)系统对不同品种(大约克猪、长白猪、杜洛克猪、巴克夏猪和梅山猪)、密度、温度和时间点下的公猪精子进行分析,采用倒S曲线模型对精子活力或活动率的时间变化情况进行曲线拟合。结果表明:梅山猪精子活力、活动率、保存时间普遍高于其他4个品种。37℃下理论上1.0×10~8个/mL、1.0×10~8～1.5×10~8个/mL、1.5×10~8～2.0×10~8个/mL、≥2.0×10~8个/mL 4个密度梯度的精子活力差异不显著(P0.05),但后二者的精子活力半衰期明显高于前二者;17℃下精子活力随密度增加而增大,精子活力半衰期亦增加。说明不同品种猪的精子活力或活动率或保存时间是由遗传背景、季节、营养等因素决定的;密度越大精液品质越好、保存时间越长;低温能抑制精子运动、延长精子保存时间;精子活力随时间延长呈现倒S型曲线变化规律。     

稀释倍数对湖羊精液低温保存效果的影响

为探究稀释倍数对湖羊精液4℃保存的影响，本实验使用3只1～2岁体况良好的公羊，将采集的精液稀释2、5、10、15、20、25倍后，检测4℃保存过程中精子活率、活力、运动速率以及质膜完整性和顶体完整性。结果表明：保存3～5 d,10倍稀释保存的精子活率和活力显著高于其他各组；保存1～4 d,25倍高倍稀释的精子活力下降最快，且显著低于其他组；保存1～3 d,10倍稀释保存的精子曲线速率（VCL）和路径速率（VAP）显著高于20和25倍稀释组；保存期间，10倍稀释保存的精子质膜完整性最高，且在第4天显著高于其他组；保存3～5 d,5和10倍稀释保存的精子顶体完整性显著高于15～25倍稀释组。因此，在本实验条件下，5～10倍为湖羊精液4℃保存的最适宜稀释倍数，过低或者过高的稀释倍数都不利于湖羊精液4℃保存。     

不同稀释液对波尔山羊冷冻精液保存效果的研究

通过比较三种冷冻精液保存稀释液对冻后精子活力的影响,采用设定的工艺流程制作细管冻精.结果表明,其精子的解冻活力稀释液Ⅲ保存效果极显著优于稀释液Ⅰ的保存效果（P＜0.01）,稀释液Ⅱ保存效果极显著优于稀释液Ⅰ的保存效果（P＜0.01）,稀释液Ⅲ与稀释液Ⅱ的保存效果差异不显著（P〉0.05）.总存活时间稀释液Ⅱ保存时间明显长于稀释液Ⅲ的保存时间.