乙烯受体基因LeETR1在番茄Epi和VFN8中的表达及反义表达载体构建（英文）

采用RPA方法对番茄乙烯过表达单基因突变体Epi和野生型VFN8中LeETR2mRNA的表达特征进行了研究，结果表明，在所有被检组织中LeETR2mRNA均表达，其表达丰度在叶组织中叶发育调节模式，但不受内源乙烯含量的影响；而在果实成熟后期受乙烯的轻微诱导。LeETR2的这种表达模式明显有别于其他乙烯受体基因，为了进一步研究LeETR2的功能，构建了LeETR2反义基因表达载体系统。     

bzr1基因的转化对番茄果实性状的影响

目的将BR信号转导因子BZR1转入到番茄中,研究其对果实性状的影响。方法通过根癌农杆菌介导的方法,将bzr1基因转入到番茄栽培品种中蔬4号中,并对转化植株进行分子鉴定以及T1代遗传学分析;以转基因系和对照为材料,分析转基因植株果实典型发育时期的主要品质性状、色素和乙烯含量的变化,并分析BR生物合成基因Dwarf和调节基因LeBR1,以及乙烯生物合成关键基因LeACS4,乙烯响应基因ERF1和信号转导受体基因(LeETR1和LeETR3)的表达。结果转基因株系果实在转色期,其可溶性固形物、可滴定有机酸、可溶性蛋白、维生素C、番茄红素和类胡萝卜素含量,以及乙烯释放量均显著高于对照,在幼苗期和果实发育的前3个时期BR调节基因LeBR1的表达均高于对照,从绿熟期开始一直到转色期,转基因株系中乙烯生物合成的限速酶基因LeACS4的表达均高于同期的对照;在破色期,转基因株系中乙烯响应基因ERF1和信号转导受体基因(LeETR1和LeETR3)的表达显著高于同期的对照。结论bzr1基因在番茄中的转化使番茄食用器官(转色期果实)的各种营养成分含量显著增加,从而改善番茄的营养品质。     

钙素对乙烯诱导番茄花柄脱落过程中乙烯受体LeETRs基因表达的调控作用

以番茄(Lycopersicon esculentur Mill)品种辽园多丽的花柄外植体为试材,用生长素、乙烯及乙烯条件下钙及其抑制剂处理,研究不同处理对番茄花柄外植体脱落的影响及此过程中乙烯受体基因的变化情况。结果表明:生长素处理抑制脱落,乙烯处理加速脱落;乙烯条件下,钙处理进一步加速乙烯诱导的脱落,钙胞外螯合剂(EGTA)、钙调素抑制剂(TFP)处理降低了乙烯诱导的脱落。对番茄乙烯受体家族基因表达规律分析表明,LeETR3是生长素调控途径的重要乙烯受体基因,LeETR1,2是乙烯调控番茄花柄脱落过程中的关键乙烯受体基因;LeETR1,2,3是乙烯诱导番茄花柄脱落过程中钙调控的关键乙烯受体基因。     

猪Cathepsin B基因和Cystatin B基因mRNA表达的发育性变化及组织差异

 【目的】研究猪肉嫩度性状候选基因-组织蛋白酶B（cathepsin B,CTSB）和半胱氨酸蛋白酶抑制素B（cystatin B,CSTB）在体内不同组织、不同发育阶段的表达变化规律,为研究嫩度性状的遗传调控机理提供依据。【方法】采用荧光探针RT-PCR,定量分析CTSB和CSTB mRNA在两个品种猪的多个组织、多个发育时间点的表达量。【结果】RT-PCR结果表明,CTSB和CSTB mRNA表达量最高的组织为肾脏,心肌和骨骼肌中表达丰度低,股四头肌CSTB mRNA表达量极显著高于背最长肌。CTSB mRNA表达量在0～5月龄长白猪和梅山猪背最长肌中表现出先升高后降低的变化趋势,梅山猪峰值出现较早,并在4月龄后再次出现急剧上升。CSTB mRNA表达量在梅山猪中表现出生初期较高,随后逐渐降低的表达模式,长白猪的表达模式则为出生后表达量急剧升高,2月龄达到峰值,随后逐渐降低。2品种猪背最长肌组织CTSB和CSTB mRNA表达量表现出显著正相关。【结论】CTSB和CSTB mRNA表达量受到组织、发育阶段和品种影响,2基因mRNA表达量呈显著正相关。     

不同种类鱼中snrpc的组织表达特征研究

为了深入研究鱼类RNA剪接相关基因snrpc的作用机制,实验应用RT-PCR研究了斑马鱼成鱼组织中snrpc mRNA的表达模式,并比较分析了鲫鱼中snrpc的表达。结果显示,斑马鱼snrpc在垂体和卵巢中有表达,而鲫鱼中在肾脏、垂体和卵巢中有表达,表明snrpc在不同鱼类中具有组织表达的差异性。     

大恒鸡与金阳丝毛鸡TGFB2基因在不同组织中的表达差异

【目的】探讨TGFB2基因对鸡肌肉生长发育的影响。【方法】利用定量PCR方法对TGFB2基因在鸡不同组织、不同生长发育阶段的表达差异进行了比较研究。【结果】研究结果显示:2周龄大恒鸡腿肌中TGFB2 mRNA表达量显著高于金阳丝毛鸡,并且达到最高值。10周龄金阳丝毛鸡母鸡胸肌组织中TGFB2 mRNA表达量均显著高于大恒鸡,并达到最高值;大恒鸡公鸡10周龄腿肌组织中TGFB2 mRNA表达量均与其他周龄差异显著,并达到最高值。金阳丝毛鸡、大恒鸡母鸡10周龄胸肌组织中TGFB2 mRNA表达量均显著高于2周龄。【结论】TGFB2基因可能是影响鸡肌肉生长发育的候选基因。     

阳光玫瑰葡萄果粒和穗轴乙烯释放及VvETRs基因的表达模式分析

为探究乙烯在葡萄果实生长发育期和采后的释放规律,及其乙烯受体Vv ETRs基因的表达模式,本研究利用气相色谱仪分别测定了‘阳光玫瑰’整个生长发育期和采后的果粒和穗轴的乙烯释放量,利用荧光定量RTqPCR的方法检测了每个时期葡萄果粒和穗轴中乙烯受体Vv ETR基因家族的表达量。结果表明,葡萄果粒和穗轴乙烯释放的变化模式完全不同,葡萄果粒一直处于低乙烯释放水平,均低于0.12μL·kg~(-1)·h~(-1),随着果实的成熟,乙烯释放量趋近于0;葡萄穗轴的乙烯释放量明显高于果粒,在花后14和70 d存在乙烯释放峰值,分别为2.67和1.71μL·kg~(-1)·h~(-1)。果粒和穗轴中的Vv ETRs的表达模式不同,果粒中乙烯受体在生长发育前期表达量较高,而穗轴中乙烯受体则是在生长发育后期及采后表达量较高,且变化范围较大。果粒中受体基因的表达量变化受到穗轴乙烯的诱导和影响。果粒中乙烯受体基因Vv ETR4与乙烯释放量之间呈显著负相关关系,而穗轴中乙烯受体基因Vv ETR2与乙烯释放量之间呈显著正相关关系。     

山羊不同组织中IGFBP-5 mRNA的发育表达模式

[目的]探讨IGFBP-5基因在山羊出生后不同组织的发育性表达模式。[方法]采用荧光定量PCR,分析了出生后0、15、30、60、90和120d36只南江黄羊（公、母羔各18只）的心脏、肝脏、脾、肺、背最长肌、半膜肌、臂三头肌和股二头肌样品中IGFBP-5mRNA水平。[结果]母羔的IGFBP-5mRNA表达丰度显著高于公羔。各组织IGFBP-5mRNA表达量呈现肝脏〉肺〉脾（心脏）〉肌肉的趋势（P〈0.01）,脾与心脏间差异不显著（P〉0.01）,肌肉的表达值最低。随着日龄的增加,各组织中IGFBP-5mRNA丰度均呈现下降-上调-下降的发育性表达模式,而肝脏和肺中的表达模式具有明显的性别差异。[结论]IGFBP-5mRNA主要在内脏,尤其是肝脏中合成,但在各组织的发育性表达模式一致,性别是一个重要的影响因素。     

肉鸡肠道CDX2 mRNA表达的肠段差异性与发育性变化

选用遗传背景相同的1日龄父母代雄性Arbor Acre(AA)肉雏鸡120羽,随机分为4个重复,采用相对定量RT-PCR方法,以从肉鸡30 d肠道样品为模板,研究肉鸡肠道尾形相关同源盒基因(cadua-related type homeoboxgene)家族中CDX2 mRNA表达的组织特异性;以从肉鸡十二指肠和空肠样品为模板,研究肉鸡肠道CDX2 mBNA表达的发育性变化.结果显示:AA肉鸡十二指肠CDX2 mRNA的表达丰度高于空肠(P=0.09)、回肠(P=0.06)和结直肠(P=0.05);从肉鸡CDX2 mRNA在十二指肠及空肠中的表达具有相同的发育模式,2～30 d下降,44 d回升,58 d略微下降;在2和44 d时的表达丰度显著高于30 d(P<0.05).以上结果表明:从肉鸡肠道近端CDX2mRNA的表达丰度高于远端(P>0.05).AA肉鸡十二指肠及空肠CDX2 mRNA的表达具有相同的发育模式,表明CDX2 mKNA表达受到发育阶段的调控,且在十二指肠和空肠间具有稳定性.     

鸭肝脏IGF1基因早期发育表达

IGF1是重要的生长调控因子,在胚后生长发育过程中的主要来源为肝脏。以高邮鸭、金定鸭2个地方鸭品种为研究对象,对胚胎期和出雏早期鸭肝脏IGF1 mRNA的表达规律进行了比较研究。采用荧光定量PCR和原位杂交技术研究了鸭13、17、21、25、27胚龄和出雏后7 d肝脏IGF1mRNA的表达情况。结果表明,2个品种鸭肝脏IGF1mRNA在13胚龄均已有少量表达,到出雏前鸭肝脏IGF1表达量显著增高,7 d时,IGF1 mRNA在高邮鸭肝脏的表达量显著高于金定鸭。原位杂交结果显示,肝脏循环系统中IGF1 mRNA的表达明显高于周边肝脏组织。肝脏IGF1 mRNA的表达可能在鸭早期发育过程中发挥着重要作用。     

The Influence of Co-Suppressing Tomato 1-Aminocyclopropane-1-Carboxylic Acid Oxidase Ⅰ on the Expression of Fruit Ripening-Related and Pathogenesis-Related Protein Genes

The purpose of this study is to explore the influence of co-suppressing tomato ACC oxidase I on the expression of fruit ripening-related and pathogenesis-related protein genes, and on the biosynthesis of endogenous ethylene and storage ability of fruits. Specific fragments of several fruit ripening-related and pathogenesis-related protein genes from tomato (Lycopersicon esculentum) were cloned, such as the 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid oxidase 1 gene (LeACO1), 1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid oxidase 3 gene (LeAC03), EIN3-binding F-box 1 gene (LeEBF1), pathogenesisrelated protein 1 gene (LePR1), pathogenesis-related protein 5 gene (LePR5), and pathogenesis-related protein osmotin precursor gene (LeNP24) by PCR or RT-PCR. Then these specific DNA fragments were used as probes to hybridize with the total RNAs extracted from the wild type tomato Ailsa Craig (AC++) and the LeACO1 co-suppression tomatoes (V1187 and T4B), respectively. At the same time, ethylene production measurement and storage experiment of tomato fruits were carried out. The hybridization results indicated that the expression of fruit ripening-related genes such as LeACO3 and LeEBF1, and pathogenesis-related protein genes such as LePR1, LePR5, and LeNP24, were reduced sharply, and the ethylene production in the fruits, wounded leaves decreased and the storage time of ripening fruits was prolonged, when the expression of LeACO1 gene in the transgenic tomato was suppressed. In the co-suppression tomatoes, the expression of fruit ripening-related and pathogenesis-related protein genes were restrained at different degrees, the biosynthesis of endogenous ethylene decreased and the storage ability of tomato fruits increased.     

协同抑制番茄ACO1对果实成熟及病程相关蛋白基因表达的影响

 【目的】探讨协同抑制番茄ACO1基因对果实成熟和病程相关蛋白基因表达、内源乙烯生物合成及果实耐贮性的影响。【方法】采用PCR或RT-PCR方法克隆了番茄ACC氧化酶1、ACC氧化酶3、EBF1、PR1、PR5以及NP24基因片段，并以此制备探针，以协同抑制ACO1的转基因番茄和野生型番茄为研究对象，进行Northern杂交，同时测定了伤害叶片和果实的乙烯释放量，并进行了果实贮藏试验等。【结果】Northern杂交结果表明，番茄ACO1基因表达被抑制后，与果实成熟相关基因LeACO3和LeEBF1，以及病程相关蛋白基因LePR1、LePR5 和LeNP24的表达量急剧降低。乙烯释放量测定试验和果实贮藏试验结果表明，协同抑制LeACO1番茄完整和受伤叶片以及完整果实内源乙烯释放量相对于野生型番茄大大减少，成熟果实贮藏时间延长。【结论】协同抑制番茄ACO1基因表达的同时，与果实成熟相关基因和病程相关蛋白基因的表达也不同程度地受到抑制，而且其内源乙烯生物合成减少，果实耐贮性增强。     

ACC合成酶和ACC氧化酶基因家族在番茄乙烯过表达突变体Epinastics果实中的差别表达(英文)

利用 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 杂交和核酸保护分析（ＲＰＡ）检测了番茄ＡＣＣ 合成酶（ＡＣＳ）和 ＡＣＣ氧化酶（ＡＣＯ）基因家族在番茄突变体Ｅｐｉｎａｓｔｉｃｓ （Ｅｐｉ）果实中的表达特性,同时测定了Ｅｐｉ果实自动催化乙烯合成系统的特性⒚ＥＰＩ等位基因的突变诱导了ＬＥＡＣＳ２ 和ＬＥＡＣＯ１ 两个基因的过表达,这是Ｅｐｉ果实的乙烯过表达的主要成因⒚ＥＰＩ突变同时显著抑制了ＬＥＡＣＳ４ 和 ＬＥＡＣＯ３ 的表达强度⒚这些结果初步鉴别了这两个基因家族在番茄果实上表达的各个成员的转录调节途径⒚同时表明,番茄单基因乙烯反应突变体是研究ＡＣＳ和ＡＣＯ基因家族各成员转录调节特性的一种有用工具⒚     

干旱和乙烯介导下番茄生长生理反应及NR基因的表达

通过干旱与乙烯介导下的番茄幼苗三重反应、植株的生理变化、幼苗生长表现及NR基因表达的研究,探讨干旱对乙烯信号转导的影响。结果表明:干旱诱导ABA和乙烯的产生,因而表现番茄幼苗三重反应;ABA又强烈地诱导乙烯受体蛋白NR基因的表达,促进了乙烯信号的转导;继而发生一系列与乙烯处理相同的生理、生长反应———细胞膜透性、蒸腾作用、呼吸作用和气孔导度增强,植株叶片黄化、衰老和脱落。干旱造成的危害与ABA诱导的NR基因的表达有密切关系。     

乙酰水杨酸对盐胁迫下番茄蔗糖代谢关键酶活性与基因表达的影响

探讨乙酰水杨酸对盐胁迫条件下苗期番茄体内蔗糖代谢相关酶活性与基因表达的影响,为水杨酸类物质调控设施番茄的耐盐性提供新证据。以栽培番茄“辽园多丽”为材料,用0.05%乙酰水杨酸(ASA),0.16M NaCl,0.16M NaCl 0.05%ASA进行处理,测定并分析了蔗糖代谢相关酶(转化酶、蔗糖合成酶、蔗糖磷酸合成酶)的活性变化,以及转化酶mRNA水平的表达变化。结果表明,乙酰水杨酸在一定程度上可以减弱盐胁迫番茄幼苗生长的抑制。同时乙酰水杨酸可以维持或提高短期(1～3d)盐胁迫条件下番茄幼苗体内转化酶的活性,并使相应的可溶性酸性转化酶mRNA水平很高,而处理后期(5～7d)转化酶活性及可溶性酸性转化酶mRNA水平都下降,但是乙酰水杨酸对盐胁迫条件下番茄幼苗体内蔗糖合成酶、蔗糖磷酸合成酶的影响不大。乙酰水杨酸可通过调节蔗糖代谢相关酶基因的表达引起相应酶活性的变化。     

Effects of Ca2+/CaM Messenger System Inhibitors on Ethylene-Induced Increase in Lycopene Content

The changes of lycopene content during ripening and senescence of tomato fruit and the relationship between ethylene glycol-bis (EGTA, Ca2+ chelator), verapamil (Vp, Ca2+ channel blockers), trifluoperazine (TFP), chloropromaize (CPZ) (CaM antagonism) and ethylene-induced increase in lycopene content in tomato fruit were investigated. Lycopene content accumulated obviously during ripening and senescence of tomato fruit after harvest at pink stage. Low temperature inhibited but ethylene enhanced the lycopene content.Meanwhile, ethylene also promoted calmodulin (CaM) content in tomato fruit, which was related to the concentration of ethylene. When EGTA, Vp, TFP and CPZ with ethylene were used to treat tomato fruit, ethylene-induced increase in lycopene content could be reversed, indicating that blocking Ca2+ channel in plasma membrane or chelating extracellular Ca2+ or inhibiting the activity of CaM could decrease the action of ethylene, and suggesting that Ca2+-CaM messenger system may be involved in lycopene increase inducedby ethylene.     

1-MCP对番茄贮后生理效应的影响

为了探讨1-MCP对番茄采后保鲜时间的影响,对番茄采后保鲜提供依据与技术支撑,以粉红期番茄品种印第安为材料,研究了常温(20℃)条件下0.5、1.0 μL/L 1-MCP处理对番茄贮藏生理特性的影响.结果表明,1-MCP处理可明显抑制贮藏过程中果实乙烯释放,延迟乙烯高峰出现,并有利于番茄果实硬度保持,延缓果实可溶性固形物上升和可滴定酸含量下降,减少果实腐烂,对番茄保鲜效果较好.     

转反义LeEIL2基因番茄果实采后部分生理特性

普通番茄和转反义LeEIL2基因番茄不同成熟度果实研究结果表明,转反义LeEIL2基因番茄有效抑制了LeEIL2基因的表达,其果实和叶片表现出与普通番茄不同的生理特性:采后果实的呼吸强度和乙烯释放量受到抑制,离体叶片的伤乙烯释放量明显降低;果实中ACC合成酶与ACC氧化酶活性以及ACC含量明显下降,从而抑制了乙烯的生物合成途径,延缓了果实的成熟衰老进程。     

The Influence of Co-Suppressing Tomato 1-Aminocyclopropane-1-Carboxylic Acid Oxidase Ⅰ on the Expression of Fruit Ripening-Related and Pathogenesis-Related Protein Genes

The purpose of this study is to explore the influence of co-suppressing tomato ACC oxidase Ⅰ on the expression of fruit ripening-related and pathogenesis-related protein genes, and on the biosynthesis of endogenous ethylene and storage ability of fruits. Specific fragments of several fruit ripening-related and pathogenesis-related protein genes from tomato （Lycopersicon esculentum） were cloned, such as the l-aminocyclopropane-1-carboxylic acid oxidase 1 gene （LeAC01）, 1- aminocyclopropane-l-carboxylic acid oxidase 3 gene （LeAC03）, EIN3-binding F-box 1 gene （LeEBF1）, pathogenesis-related protein 1 gene （LePR1）, pathogenesis-related protein 5 gene （LePR5）, and pathogenesis-related protein osmotin precursor gene （LeNP24） by PCR or RT-PCR. Then these specific DNA fragments were used as probes to hybridize with the total RNAs extracted from the wild type tomato Ailsa Craig （AC＋＋） and the LeAC01 co-suppression tomatoes （V1187 and T4B）, respectively. At the same time, ethylene production measurement and storage experiment of tomato fruits were carded out. The hybridization results indicated that the expression of fruit ripening-related genes such as LeACO3 and LeEBF1, and pathogenesis-related protein genes such as LePR1, LePR5, and LeNP24, were reduced sharply, and the ethylene production in the fruits, wounded leaves decreased and the storage time of ripening fruits was prolonged, when the expression of LeACO1 gene in the transgenic tomato was suppressed. In the co-suppression tomatoes, the expression of fruit ripening-related and pathogenesis-related protein genes were restrained at different degrees, the biosynthesis of endogenous ethylene decreased and the storage ability of tomato fruits increased.