快速冷冻牛体外受精胚胎

本文研究不同类型的防冻剂及其浓度对快速冷冻牛胚胎的效果。试验Ⅰ：７日龄囊胚先分别放入含１０％（Ｖ／Ｖ）甘油或１０％（Ｖ／Ｖ）乙二醇改良的磷酸盐缓冲液（ＰＢＬ）中，室温下平衡１０ｍｉｎ。然后，分别移入１．５ｍｏｌ／Ｌ，２．０ｍｏｌ／Ｌ甘油或２．０ｍｏｌ／Ｌ，３．０ｍｏｌ／Ｌ乙二醇＋０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖ＰＢＬ液中，１０ｍｉｎ后将胚胎放进冰箱的结冰层（约─２３℃），３５ｍｉｎ后直接投入液氮。冻后孵化率最高的处理组为１．５ｍｏｌ／Ｌ甘油＋０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖（８２．４％），其极显著（Ｐ＜０．０１）地高于２．０ｍｏｌ／Ｌ甘油＋０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖（１５．４％），２．０ｍｏｌ／Ｌ乙二醇＋０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖（６３．９％），３．０ｍｏｌ／Ｌ乙二醇＋０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖（３８．７％）。试验Ⅱ：７日龄胚胎先在１０％（Ｖ／Ｖ）甘油中平衡１０ｍｉｎ，而后，分别移入１．５ｍｏｌ／Ｌ甘油＋０，０．２５，０．５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖，停留１０ｍｉｎ后快速冷冻。解冻后，胚胎分别用０．５，０．２５，０ｍｏｌ／Ｌ蔗糖除甘油。结果表明：解冻液中的蔗糖浓度对胚胎的存活力无显著影响。当冷冻处理为１．５ｍｏｌ／Ｌ甘油＋０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖时，胚     

同时测定食品中维生素B_1和维生素B_2的高效液相色谱方法

介绍了高效液相色谱法同时测定维生素Ｂ１和维生素Ｂ２的方法，该方法色谱条件为μＢｏｎｄｐａｋＣ（１８）柱；甲醇／水４０／６０（Ｖ／Ｖ）为流动相，流速为０．８ｍＬ／ｍｉｎ；采用荧光检测器（λ（Ｅｘ）＝３６５ｎｍ，λ（Ｅｍ）＝４２５ｎｍ）．维生素Ｂ１和维生素Ｂ２的平均回收率分别为９５．５０％和９５．８２％，变异系数分别为０．３７％和０．４８％．该方法具有简单、省时、干扰小等优点，并有较高的灵敏度、准确度和宽的应用范围。     

生长因子对卵母细胞体外成熟及早期胚胎体外发育的影响

为了探讨生长因子（ＥＧＦ，ＰＤＧＦ）对牛卵母细胞体外成熟与早期胚胎体外发育的影响，本研究进行了两个实验。实验１：在卵母细胞体外成熟（ＩＶＭ）中，将卵母细胞平均随机的放入表皮生长因子浓度为０，２．５，２５，５０μｇ／Ｌ的成熟培养液和对照组中。实验２：在早期胚胎体外培养（ＩＶＣ）过程中，将受精卵平均随机分配入５个不同培养液的处理组：（１）ＴＣＭ－１９９＋１０％阉公牛血清（ＳＳ）；（２）ＴＣＭ－１９９＋ＥＧＦ＋ＰＤＧＦ；（３）ＴＣＭ－１９９＋ＥＧＦ；（４）ＴＣＭ－１９９＋ＰＤＧＦ；（５）ＴＣＭ－１９９＋无生长因子、其中ＥＧＦ：５０μｇ／Ｌ，ＰＤＧＦ：０．１μｇ／Ｌ。２，３，４，５组有０．１％ＰＶＡ和０．３％ＢＳＡ，并与颗粒细胞单层协同培养。卵母细胞的体外成熟（ＩＶＭ）、体外受精（ＩＶＦ）和早期胚胎体外培养（ＩＶＣ）的方法与Ｌｕ等（１９８７）报道的相同。结果表明：浓度为５０μｇ／Ｌ的处理组分裂率与对照组无差异（８９．０％，９２．４％，Ｐ＞０．０５），而浓度为０，２．５，２５μｇ／Ｌ的处理组分裂率均显著低于对照组（７８．６％，８２．３％，８４．３％，Ｐ＜０．０５），在囊胚率和第７ｄ一级胚胎率上各组均无差异。ＥＧＦ在体     

斑点免疫金银染色技术检测鸡传染性法氏囊病毒的研究

本研究成功建立了检测鸡传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）抗原的斑点—免疫金银染色技术（Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ），并确定了操作流程的最佳试验条件。应用该法对纯化ＩＢＤＶ抗原的最低检出量为０．１９５３ｎｇ／点，其敏感性为Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的８倍。特异性阻断试验和交叉反应试验证明Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ具有较高的特异性。Ｄｏｔ－ＩＧＳＳ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ对５４份自然感染法氏囊样品检测的阳性率为９６．３％和９２．５％（χ２＝３．１１７９，Ｐ＞０．０５），统计学分析两者无显著差异。研究表明本法具有敏感、特异性强、经济、安全等优点，可用于ＩＢＤＶ感染的特异诊断。本研究为免疫金技术应用于畜禽传染病的诊断和研究打下了基础     

无病毒苹果苗试管微繁技术研究

对经脱毒的优良苹果品种北海道９号、皇家嘎拉和长富２号进行了试管微繁技术的研究。结果表明：适合于３个品种试管苗增殖的培养基为ＭＳ＋６—ＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．０５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖３０ｇ／Ｌ,增殖率为２５～３,≥３ｃｍ的试管苗率约为５０％。通用的生根培养基为１／２ＭＳ＋ＩＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ０．１５ｍｇ／Ｌ＋蔗糖２５ｇ／Ｌ－肌醇,平均生根率保持在７５％左右。生根试管苗采用“一步法移栽”,平均成活率在７８％以上。     

粉煤灰的农业利用及其环境放射性污染评价

对北京、内蒙、宁夏、河北、广东和天津等地大型火力发电厂粉煤灰的采样分析表明：粉煤灰中主要放射性成分为２３８ Ｕ 、２３２ Ｔｈ 衰变系和４０ Ｋ ,比活度范围分别为９３２ ～２８３８ Ｂｑ／ｋｇ ,８０３ ～２３８８ Ｂｑ／ｋｇ 和１１５６ ～４４７４ Ｂｑ／ｋｇ 。试样模拟研究表明, 当粉煤灰施用量达６７５ Ｔ／ｈ ｍ ２ 时,土壤中天然放射性核素２２６ Ｒａ 和２２８ Ｒａ 的比活度分别是对照的３５６ 倍和２６０ 倍。土壤中天然放射性核素的比活度和地面１ ｍ 高处空气吸收剂量及地面γ辐射所致人均年有效剂量当量随粉煤灰的施用量增加呈现增加的趋势。土壤中２２８ Ｒａ 的比活度与粉煤灰施用量的相关性可表示为ｙ ＝ ２２０４ｘ ＋ １７２５ ,（ｒ２ ＝ ０９９０９） ;对于２２６ Ｒａ ,ｙ ＝ ２１３８ｘ ＋ ２４５ ,（ｒ２ ＝ ０９９６６） 。地面１ ｍ 高处空气吸收剂量率（ Ｄ） 与粉煤灰施用量的相关性可表示为：ｙ ＝ １８９６ｘ ＋ ３８７５ ,（ｒ２ ＝ ０９８９１ ） 。有效剂量当量（ Ｈ） 的变化与施用粉煤灰的量之间的相关性可表示为：ｙ ＝ ２３２４５ｘ ＋４７５０５ ,（ｒ２ ＝ ０９８９１） 。当粉煤灰施用     

红壤中铝的形态

以改进的连续分级提取方法,用１ｍｏｌ／Ｌ,ＫＣｌ,０．２ｍｏｌ／Ｌ,ＨＣｌ,０．１ｍｏｌ／Ｌ Ｎａ４Ｐ２Ｏ７（ｐＨ８．５）,ＤＣＢ溶液,０．３３ｍｏｌ／Ｌ,柠檬酸钠和０．５ｍｏｌ／Ｌ ＮａＯＨ为提取剂,把红壤中可提取的非晶态铝区分为交换态铝,肿附态无机羟基铝,有机配合态铝,氧化铁结合态铝,层间铝和非晶态铝硅酸盐。     

钾电极连续标准加入半对数纸图解法测定肥料中钾

本文采用题示方法中钾，阐述了方法原理，并研究了参比电极外盐桥对钾测定的影响。选用０．５ｍｏ．／Ｌ ＢｑａＣｌ２溶液作外盐桥，对复合磷肥中钾含一进行测定，其ＳＤ（ｎ＝６）为１．９２％，加标回收率为９８．４％－１０２．４％。     

CaCl2对细颗粒泥沙静水絮凝沉积的影响

细颗粒泥沙的絮凝或分散对土壤渗透性,土壤、可蚀性有重要作用,是水土保持研究的重要内容。在ＣａＣｌ２浓度为０－１．０ｍｍｏｌ／Ｌ,泥沙浓度为１０ｇ／Ｌ时,用吸管法研究了ＣａＣｌ２对细颗粒泥沙絮凝沉降的影响,结果表明：泥沙沉降分２个阶段,分选沉降段和絮凝沉降段;在絮凝沉降段,ＣａＣｌ２浓度越大,絮凝沉降越快。但较高浓度时,细颗粒泥沙平均沉速反而随ＣａＣｌ２Ｉ浓度增大而农渐减小;泥沙浓度随时间呈指数衰减     

一个稀释度间接ELISA法测定IBDV抗体效价的研究

应用样品一个稀释度间接ＥＬＩＳＡ法对产蛋母鸡及其小鸡进行传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）抗体效价测定，同时用病毒中和试验（ＶＮ）作比较检测。结果表明，该ＥＬＩＳＡ法比ＶＮ法敏感、精确、简便，所有样品只测定一个稀释度的Ｐ／Ｎ值，再根据线性回归方程（ｒ１=０．８８９８，Ｐ≤０．０５）计算抗体效价，达到省时省力、节约材料、减少试验误差和一次可进行大批样品检测的目的。２种方法相关性较高（ｒ３=０．８４９２，Ｐ＜０．０１），小鸡母源抗体衰减与日龄呈线性关系（ｒ２=－０．８７５８，Ｐ＜０．０１），ＩＢＤＶ母源抗体半衰期为６．３ｄ。     

离体诱发甘蓝型油菜长角果和矮秆突变体

本试验对ＥＭＳ诱变甘蓝型油菜（Ｂｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓ）小孢子胚状体培养物的有效浓度和适宜时间进行了初步探索。用０．２％和０．２５％ＥＭＳ处理３～５ｈ，９２．Ｂ１０品系出现了长角果和矮秆突变体，Ｄ０８３中产生了窄叶和皱叶不育株。     

受精液中肝素和咖啡因的组合对牛卵母细胞体外受精的影响

采用２种肝素浓度（１０，３０ｍｇ／Ｌ）与３种咖啡因浓度（２．５，５，１０ｍｍｏｌ／Ｌ）的交叉组合，以３０ｍｇ／Ｌ肝素的受精液为对照，探讨肝素和咖啡因对牛卵母细胞体外受精的影响，并确定受精后将卵母细胞移至单层细胞的合适时间。结果表明，当卵母细胞在受精后５ｈ移至单层细胞时，１０ｍｇ／Ｌ肝素加５ｍｍｏｌ／Ｌ咖啡因或３０ｍｇ／Ｌ肝素加２．５ｍｍｏｌ／Ｌ咖啡因的体外受精效果最好，二者的囊胚率和囊胚孵化率分别为５６．９％±７．０，８１．１％±１２．７及５６．９％±７．０，７８．９％±９．８。     

气候因素对土壤有机质组成和性质的影响

云南省哀牢山徐家坝自然保护区不同海拔的土壤有机质组成和性质与气候因素的相关分析结果表明，土壤有机质的组成（Ｈ／Ｆ），胡敏酸的光学特征（Ｅ４／Ｅ６）和ＣａＣｌ２的絮凝极限（ＦＬ值），除ＦＬ和Ｅ４／Ｅ６与年均降雨量不呈显著的相关关系外，其它数值均与年均温，≥１０℃积温和年均降雨量呈著（ｐ＜０．０１，ｎ＝７）的相关关系，并服从一元二方程Ｙ＝Ａ＋ＢＸ＋ＣＸ＾２。由此证明了气候因素对土壤有机质组成和胡敏酸的     

土壤中植物有效锰的形态分级

用４种方法测定土壤有效态锰含量,并加以比较和评价,从而确定出最优的土壤有效锰测定方法。研究结果表明,采用一种顺序浸提的方法能比较准确地反映土壤的供锰状况,锰组分及其相应浸提剂为：易溶态锰（０．０５ｍｌ／ＬＣａ（ＮＯ３）２）提取、弱吸附态锰（ｐＨ８．５,ＣａＤＴＰＡ－Ｂ４Ｏ７）、碳酸盐束缚态锰（石灰性土壤,用１．６ｍｏｌ／ＬＨＮＯ３快速浸提）或专性吸附态锰（非石灰性土壤,用１．６ｍｏｌ／ＬＨＮＯ３快速浸提）或专性吸附态锰（非石灰性土壤,ｐＨ４．４,０．０５ｍｏｌ／ＬＣａ（ＮＯ３）２＋０．０５ｍｏｌ／ＬＣｕ（ＮＯ３）２提取）和氧化锰（ｐＨ２．０,０．１ｍｏｌ／ＬＮＨ２ＯＨ．ＨＣｌ）。由盆栽试验辣椒吸收的锰与土壤锰相关分析结果显示,易溶态锰是植物最易吸收的锰,其回归方程为：Ｙ＝－１４．４０９＋２１．６５８Ｘ,ｒ＝０．     

水泥厂周围桑叶氟积累的岭回归模型

通过对标准回归模型Ｙ＝ＸＢ＋ｅ中的Ｂ进行岭回归估计［Ｂｋ＝（Ｘ＇Ｘ＋ＫＩ）＾－１Ｘ＇Ｙ］，当关系式Ｏ＜Ｋ＜σ／ｍａｘｙｉ＾２成立时，此时岭估计风险双ＯＬＳＥ（Ｋ＝０）的风险要小。根据这一原则，建立了水泥厂周围桑叶氟积累的回归模型。在生产实践中，可以根据当地的气象资料及污染源的类型，选择不同的岭回归模型，来预测预报桑叶氟含量，从而可有效地控制，消除大气氟污染带来的损失。     

苄嘧黄隆及甲黄隆的气相色谱分析方法研究

本文研究了苄嘧黄隆和甲黄隆的气相色谱分析方法。采用（１）５％ＯＶ－１０１／Ｃｈｒｏ－ｍｏｓｏｒｂＧＡＷＤＭＣＳ（０．２５～０．１８ｍｍ）；（２）５％新戊二醇己二酸聚酯／ＣｈｒｏｍｏｓｏｒｂＧＡＷＤＭ－ＣＳ（０．２５～０．１８ｍｍ）的两条色谱柱，邻苯二甲酸二戊酯为内标，氢火焰离子化检测器，标准偏差（ＳＤ）≤０．０６４％，变异系数（ＣＶ）≤２．１％，平均回收率为９６．７％～９８．８％。     

水稻耐低钾基因型筛选方法的研究

本试验用１／４强度的ＫｉｍｕｒａＢ营养液将灿稻、稻和籼型杂交稻各１１份，分别培养到三叶期后，以含有０．２６５μｍｏｌ／ＬＨ２Ｏ２，０．２ｍｍｏｌ／ＬＣａＳＯ４加０．１或０．２或０．３或０．４ｍｍｏｌ／ＬＫ＾＋的营养液为测定介质，在２５±２℃，连续自然光下，运用离子耗竭技术分别测定了各种不同钾浓度下灿稻、粳稻和杂交稻不同基因型的吸钾速率。并于三叶期和五叶期分别测定这三类基因型的生物量和钾素利用效率。     

玻璃化冷冻体外成熟牛卵母细胞的尝试

通过两个试验对体外培养成熟的牛卵母细胞进行玻璃化冷冻。试验１用１０％丙二醇（ＰＧ）加上不同浓度（０％～２０％）的乙二醇（ＥＧ）作为细胞内玻璃化溶液（ＶＳ１），２５％ＰＧ＋２５％ＥＧ作为细胞外玻璃化溶液（ＶＳ２）对卵母细胞进行冷冻。结果卵母细胞的体外受精分裂率（０．９％～２３．４％）均显著低于对照组（７５．０％）。在处理组中，以１０％ＰＧ＋５％ＥＧ和１０％ＰＧ＋１０％ＥＧ作为ＶＳ１的效果较好，分裂率分别为２３．４％和２２．２％，均显著高于其他处理组。试验２以１０％ＰＧ＋５％ＥＧ作为ＶＳ１，２５％ＰＧ＋２５％ＥＧ作为ＶＳ２进行冷冻。解冻后在０．５ｍｏｌ／Ｌ或０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖溶液中１～２步或在含防冻剂的溶液中经２～３步稀释防冻剂。卵母细胞经体外受精后，分裂率在１８．２％～３０．６％之间。在０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖溶液中一步脱防冻剂的卵母细胞经体外受精、体外培养后，２５个早期胚胎中有３个发育成囊胚，其它组均未发现囊胚。这些结果表明玻璃化过程对卵母细胞造成了损伤。引起损伤的原因可能是玻璃化溶液的化学毒性作用及脱防冻剂过程中卵母细胞受到的渗透压损伤。     

牛细胞核移植研究简报

本研究探讨了用体外受精胚胎作供体、体外成熟卵母细胞作受体进行核移植的可能性，比较了两种不同核移植方法的效果。本研究结果在我国首次获得牛核移植的成功。从屠宰场回收的黄牛卵巢中抽取未成熟的卵母细胞，采用以前报道的方法（Ｓｈｉｅｔａｌ，Ｔｈｅｎ－ｏｙｅｎｏｌｏｙ，１９９１，３５；２７１）进行体外成熟（ＩＶＭ）和体外受精（ＩＶＦ），获得ＩＶＭ如母细胞和ＩＶＦ胚胎。体外受精用精液为奶牛精液。在ＩＶＭ２３～２４ｈ＄母细胞去核后用作受体卵，体外发育到８～３２细胞期的ＩＶＦ胚胎用作核供体．去核后的卵母细胞分两组：！．在Ｗ２６ｈ（或３０ｈ）用８０Ｖ／ｍｍ４０μｓ电激活两次，然后注入供体胚胎卵裂球，ＩＶＭ３２ｈ（或３６ｈ）进行电融合；Ⅱ．注卵裂球前不激活，在ＩＶＭ３１ｈ进行电融合。两组融合条件相同（８０Ｖ／ｍｍ４０μｓ×２，间隔１ｓ），融合液为０．３Ｍ甘露醇＋０．０５ｍＭＣａＣｌ２＋０．１ｍＭＭｇＳＯ４＋１０ｍＭ组氨酸。融合印在颗粒细胞单层培养滴内共培养，体外培养２４ｈ后观察卵裂结果。经体外培养５～８ｄ后发育到桑椹和囊胚的核移植胚胎移植到同期发情的受体奶牛子直角内。２个月后直检妊娠情况。本研究结果如下：Ⅰ组操作后存活率（９０．     

无机盐离子对早期牛胚胎在体外发育的影响

本研究系统的探索了培养液中的主要无机盐离子对早期牛胚胎在体外发育的影响。结果表明：培养液中的Ｎａ＋／Ｋ＋比显著影响牛胚胎在体外的发育，提高Ｋ＋浓度有降低囊胚率的作用，最适的Ｎａ＋／Ｋ＋比为１１４／３．２；Ｃａ２＋和Ｍｇ２＋同样为胚胎发育所必需，其最适浓度分别为２ｍｍｏｌ／Ｌ和０．５ｍｍｏｌ／Ｌ；培养液中添加２．８８ｍｇ／Ｌ的Ｚｎ２＋，其囊胚发育率显著高于空白对照组；培养液中添加０．０２５ｍｇ／Ｌ或０．２５ｍｇ／Ｌ的Ｃｕ２＋完全抑制囊胚发育。这表明Ｚｎ２＋对早期牛胚胎在体外发育有显著的促进作用，Ｃｕ２＋对早期牛胚胎在体外发育有强烈的抑制作用。