东北刺人参体细胞胚状体的诱导及体细胞胚胎发生的扫描电镜观察

分别以东北刺人参叶芽和带有叶柄的幼叶为外植体,研究6-BA浓度对东北刺人参体细胞胚状体诱导的影响,并利用扫描电镜对体细胞胚胎发生的形态学进行了观察.结果表明:以带有叶柄的东北刺人参幼叶为外植体,在MS培养基上附加4.0 mg/L 6-BA和0.5 mg/L NAA,可获得健状的胚状体,并且胚状体经过球形胚、心形胚、鱼雷形胚和子叶形胚的胚胎发育时期,最终形成可发育成完整小植株的成熟胚.     

灰枣体细胞胚胎发生与植株再生研究

采用灰枣组培苗叶片、叶柄、茎段为试材．进行了体细胞胚胎发生的研究。结果表明,叶片、叶柄和茎段在MS＋6-BA0．5mg／L＋2,4-D0．5mg／L上的愈伤效果较好;MS＋6～BA0．5mg／L＋2,4-D0．2mg／L＋NAA0．5mg／L比较适合叶柄胚性愈伤组织的形成;在MS＋6-BA1．5mg／L＋IBA0．2mg／L＋GA2．0mg／L,附加蔗糖20g／L．AgNO2．0g／L的培养基上,灰枣体细胞胚胎的发生率最高;MS＋6-BA0．5mg／L＋NAA0．01mg／L培养基上的体胚萌发率较高,并且得到了再生植株。     

花生体细胞胚发生及植株再生

以花生优良品种四粒红成熟种子胚轴为外植体,诱导体细胞胚发生并获得了再生植株。将胚轴切成小段,接种于附加40 mg/L的MS培养基上诱导胚性愈伤组织,愈伤组织转移至2,4-D 20 mg/L的MS培养基上形成体细胞胚。体细胞胚发生率达到66.67%;体细胞胚在BA浓度逐渐降低的MS培养基上培养,发育成完整植株。     

麻城油茶体细胞胚胎发生及植株再生

为建立油茶通过体细胞胚胎发生方式获得再生植株的技术体系,以湖北麻城油茶7月中旬幼胚为试验材料,消毒后切块接种于分别附加了2.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L KT和5.0 mg/L NAA+1.0 mg/L KT的MS培养基,进行愈伤组织诱导培养。1个月后统计出愈率,两种处理的愈伤组织诱导率分别为83.23%和45.34%;挑选状态良好的愈伤组织继代于附加了1.0 mg/L NAA+1.0 mg/L KT的MS培养基,培养2个月后可见明显的胚状体形成,统计胚状体平均发生率为15.25%;随后将胚状体继代于附加了1.0 mg/L NAA+3.0 mg/L 6-BA的MS培养基上进行胚状体发育和植株再生培养,获得具备完整子叶的胚状体后,转移至含有3.0 mg/L 6-BA的1/2MS培养基中进行生根培养,获得完整再生植株后驯化移栽至营养钵中继续生长。本研究建立了麻城油茶6个月内获得体细胞胚胎发生及植株再生的技术体系,为建立油茶农杆菌介导的遗传转化技术体系奠定了基础。     

木薯品种新选048体细胞胚发生及植株再生初步研究

[目的]初步探讨木薯品种新选048体细胞胚发生及植株再生的影响因素,为木薯遗传转化和品种改良奠定基础.[方法]以不同外植体(未完全张开叶、侧芽茎尖、幼嫩叶柄及完全张开叶的顶部、基部、叶缘、中部和全叶)为材料,对木薯体细胞胚发生和愈伤组织生长进行观察,并探讨6-BA(0.01、0.05、0.10、0.50、1.00 mg/L)对体细胞胚植株再生的影响.[结果]不同木薯外植体均能诱导愈伤组织,愈伤组织诱导率为48.30%~100.00%,但产生的愈伤组织生长状况表现不同.在MS+12.0 mg/L毒莠定(picloram)+20.0 g/L蔗糖+6.5 g/L琼脂培养基中,侧芽茎尖诱导获得的初生体细胞胚诱导率最高,达22.22%,平均产胚量为5.85个;而叶柄、未完全张开叶片或全张开叶片不同部位均不利于诱导体细胞胚,其诱导率极低,为0~5.00%.随着MS培养基中6-BA用量的增加,体细胞胚的成熟率不断增加(81.3%~100.0%),而在MS+0.01 mg/L 6-BA+0.02 mg/L NAA培养基中的植株再生率呈先升高后下降的变化趋势;当6-BA用量为0.10 mg/L时,植株再生率最高,为21.8%,且子叶生长正常.在1/3MS+0.02 mg/L NAA生根培养基中,再生植株均能诱导生根;在沙与表土混合基质中生根植株均能正常生长.[结论]新选048可以通过体细胞胚发生途径获得再生植株,但其发生率和再生率较低.     

大白菜游离小孢子胚诱导及植株再生

以15个大白菜[Brassica campestris ssp. Pekinensis (Lour.) Olsson]自交系和杂交种为试材进行游离小孢子培养,研究了影响胚状体发生及植株再生的几个主要因素。结果表明,有12个品种的游离小孢子在NLN-13液体培养基上诱导出胚;各品种间小孢子胚产量差别很大,每个花蕾产胚在0.25~65.4个之间;将成熟的子叶形胚及时转移至再生培养基上,对提高植株获得率至关重要;在NLN-13液体培养基上附加0.2mg.L-1的6-BA对胚状体的发生和发育有促进作用;B5+0.2 mg.L-16-BA+0.02 mg.L-1NAA的培养基有利于小孢子胚发育成植株;1/2 MS+0.1 mg.L-1NAA为小孢子植株生根最适宜的培养基。     

南蛇棒魔芋的组织培养与植株再生研究

以南蛇棒魔芋球茎、叶柄、鳞片、顶芽为外植体进行组培及再生研究,球茎、叶柄、鳞片在MS附加1.5 mg/L BA和1.5 mg/L NAA的培养基中,愈伤组织诱导率达98%;在MS附加1.5 mg/L BA和0.1 mg/L NAA分化培养基中,其分化率达95%以上;纵切顶芽接入分化培养基中,可长出3个丛生芽,芽分化率达80%以上;不定芽在生根培养基MS附加0.1 mg/L BA和0.5～1.0 mg/L NAA上,能100%生根形成完整的植株.     

通过体细胞胚发生快繁优良刺五加植株的技术

以刺五加合子胚及无菌实生幼苗为试验材料,研究通过直接和间接体细胞胚发生方式,快速获得大量再生植株的技术。结果表明:直接诱导体细胞胚的培养基为MS+2,4-D1.0 mg.L-1,以胚根或子叶为外植体诱导胚性愈伤组织的最佳培养基为MS+2,4-D0.5 mg.L-1+BA1.0 mg.L-1,下胚轴为外植体诱导胚性愈伤组织的最佳培养基为MS+2,4-D0.5 mg.L-1+BA2.0 mg.L-1。胚性愈伤组织经悬浮培养可发育成成熟体胚,快速获得刺五加幼苗。     

南蛇棒魔芋的组织培养与植株再生研究

以南蛇棒魔芋球茎、叶柄、鳞片、顶芽为外植体进行组培及再生研究。球茎、叶柄、鳞片在MS附加1．5mg／L,BA和1.5mg／L NAA的培养基中,愈伤组织诱导率迭98％;在MS附加1．5mg／LBA和0．1mg／L NAA分化培养基中．其分化率迭95％以上;纵切顶芽接入分化培养基中。可长出3个丛生芽,芽分化率迭80％以上;不定芽在生根培养基MS附加0．1mg／LBA和0．5～1．0mg／LNAA上,能100％生根形成完整的植株。     

青州蜜桃、冬桃成熟胚子叶再生不定植株的研究

以青州蜜桃、冬桃成熟胚子叶为外植体 ,研究了利用子叶再生不定梢的适宜培养基。两个品种的子叶在 1 / 2MS附加BA 1 0mg/L和NAA 0 .2mg/L的培养基上获得了最高不定梢再生率。青州蜜桃和冬桃子叶的不定梢最高再生率分别是 6 6 .7%和 5 6 .2 %。不定梢在WPM +BA 2mg/L +IBA 0 .0 1mg/L +GA 0 .5mg/L培养基上增殖培养后 ,转移到 1 / 2MS +IBA 0 .5mg/L +蔗糖 2 0g/L诱导生根 ,两个品种的生根率都在 90 %以上     

花生再生体系的建立

取4 d龄花生(鲁花14)的胚轴、小叶和成熟子叶为外植体,对其进行离体组织培养研究。结果表明:在培养1个月后,胚轴在MS+8.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/LNAA培养基上可以诱导产生丛生芽,诱导率达到80%,平均每个外植体可以产生10~20个芽点;小叶在MS+5.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/LNAA培养基上能诱导出胚性愈伤组织,进一步诱导分化形成芽点并伸长;诱导出的丛生芽接种在MS+5mg/L6-BA+1.0 mg/LNAA+50.0 mg/LAD的培养基上可以扩繁和伸长;花生成熟种子的子叶在MS+20 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L KT+1.0mg/LAgNO3培养基上可直接诱导形成颗粒状、表面光滑、干燥的体细胞胚,每个外植体可以诱导出8个左右的体细胞胚。     

球根海棠"金正日"的离体培养研究

通过诱导胚状体建立组织培养再生系统,研究了球根海棠"金正日"的离体培养.结果表明,外植体经HgCl2溶液表面消毒后,接种到MS+6-BA 0.2 mg/L+NAA 1 mg/L培养基上诱导愈伤组织,15 d后转接到1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L +NAA 0.1 mg/L培养基上,诱导胚状体,诱导率90%以上.胚状体在MS+6-BA 0.3 mg/L +NAA 0.03 mg/L培养基上以丛生芽形式增殖,增殖系数达4～8倍.试管苗生根可采用MS+IBA 0.1 mg/L、蔗糖2%培养基.生根率100%.     

紫花苜蓿体细胞胚胎发生及其细胞组织学观察

通过对紫花苜蓿（ Ｍｅｄｉｃａｇｏ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）外植体愈伤组织进行诱导及对体细胞胚胎发生过程的组织学观察,得出以下结果：１）外植体在 Ｍ Ｓ附加１．０ｍ ｇ／ Ｌ６－ Ｂ Ａ 和１０．０ｍ ｇ／ Ｌ Ｉ Ａ Ａ 的培养基上愈伤组织生长良好,而愈伤组织转入 Ｍ Ｓ附加５００ｍ ｇ／ Ｌ水解酪蛋白的培养基中胚状体的分化能力较强。２）紫花苜蓿的体细胞胚大多是由单个具胚状体发生能力的胚性细胞发育而来,发育过程与合子胚的发育过程相似。在早期原胚发育过程中胚体外一直包围有厚壁。原胚时期和子叶胚时期出现两次淀粉积累现象。     

攸县油茶胚状体发生及其组织学观察

[目的]研究以攸县油茶(Camellia yuhsienensis Hu)成熟子叶为外植体的胚状体发生情况。[方法]以子叶为外植体,接种于MS+2.0mg/L2,4-D+1.0mg/LKT培养基上,诱导胚性愈伤组织。胚性愈伤组织块转接至以MS为基本培养基,添加不同浓度6-BA和NAA的激素组合的培养基上诱导产生胚状体。取不同发育阶段的组织块制作石蜡切片,进行组织学观察。[结果]成熟子叶块接种于诱导培养基MS+2.0mg/L2,4-D+1.0mg/LKT,15d左右开始出现胚性愈伤组织。胚性愈伤组织转接至培养基为MS+2.0mg/L6-BA+0.6mg/LNAA时胚状体诱导率最高,为87.78%;无激素培养基也能诱导胚性愈伤组织产生胚状体,但诱导率极低,仅为6.67%。组织学观察表明,胚性细胞由愈伤组织表面及其内部邻近的若干细胞分化而来,经过球形胚、心形胚、子叶形胚等不同发育阶段直至成熟胚状体。[结论]诱导胚性愈伤组织分化为胚状体的最佳培养基为MS+2.0mg/L6-BA+0.6mg/LNAA。     

蝴蝶兰愈伤组织诱导和体细胞胚胎发生的研究

研究了蝴蝶兰愈伤组织的诱导和通过体细胞胚胎发生的植株再生。原球茎在含有蔗糖的VW培养基上形成愈伤组织。结果表明,最有效的诱导愈伤组织的培养基为VW+0.1 mg/L BA+0.1 mg/L 2,4-D+60 g/L蔗糖或者VW+0.3 mg/L BA+0.1 mg/L NAA+40 g/L蔗糖。愈伤组织在被转到不含植物激素的VW培养基上易形成原球茎。组织学观察证实了体细胞胚胎结构的形成,暗示了试验中诱导的愈伤组织即为体细胞胚。     

紫花苜蓿高效遗传转化受体系统的建立

以新疆大叶和新牧一号苜蓿下胚轴和子叶为材料,研究了不同基因型、外植体、培养基及激素配比对其愈伤组织诱导、芽分化和根诱导的影响,建立了适用于这2种苜蓿的再生体系。结果表明,下胚轴是一种较好的外植体材料,其再生能力高于子叶,最高再生率为54.96%;0.2 mg/L KT能辅助2,4-D对愈伤组织的诱导发挥更好的作用;SH培养基相对于MS培养基对愈伤组织的诱导更有效,而MS培养基则有利于愈伤组织的分化;适用于2种苜蓿愈伤组织诱导、分化及生根培养的培养基分别为SH(附加2 mg/L 2,4-D和0.2 mg/L KT),MS(附加1.0 mg/LBAP和0.3 mg/L NAA)和不含激素的1/2 MS(扩繁时附加1 mg/L IBA)。     

两个亚洲百合品种离体再生体系的建立

以亚洲百合‘普瑞头’、‘布耐罗’2个品种的外中层鳞片为外植体,培养基以MS为基础附加不同浓度的6-BA及NAA,成功诱导出了不定芽,得出:‘普瑞头’鳞片再生较适宜的生长调节剂配比为MS＋6-BA 2.0 mg/L＋NAA 0.2 mg/L（单位下同）,‘布耐罗’为MS＋6-BA 0.5＋NAA 1.0.通过对再生苗叶片不同部位的再分化实验,比较得出小鳞茎叶的叶片基部分化能力非常强,而叶片上部基本不分化,鳞茎叶基部是建立高频快速再生体系的首选材料.该文进一步探讨了适宜鳞茎叶基再生的生长调节剂配比,适宜两个品种鳞茎叶基再生的生长调节剂配比为:MS＋6-BA 2.0＋NAA 0.2、MS＋6-BA 1.0＋NAA 1.0、MS＋6-BA 0.5＋NAA 0.5.最后,研究了母株不同继代次数对叶基不定芽再生率的影响,结果表明:母株继代培养5～6代后,叶基的分化能力略微下降,约为80％      

早熟梨新梨7号胚培养直接成苗的影响因素探讨

以早熟梨新梨7号为试验材料,在离体条件下研究了基本培养基种类、激素配比、胚龄大小及低温预处理等因素对早熟梨幼胚离体培养的影响。结果表明:MS培养基诱导新梨7号胚萌发和子叶转绿方面与White培养基相似,而在培养后期促进生根和成苗率方面优于White培养基;适宜培养基激素浓度比例为2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA;以胚龄85 d以后的幼胚培养较易成功。低温预处理对促进65 d和75 d胚龄的幼胚萌发和成苗效果优于85 d以后梨胚,且低温处理对胚萌发、子叶转绿的促进作用大于对生根率和成苗率的促进作用。     

薇甘菊组织培养及体细胞胚胎发生的研究

研究了4种外植体、10种不同浓度激素组合对薇甘菊(Mikania micrantha H.B.K.)离体再生的影响,并对胚性愈伤组织中的体细胞胚发生发育过程进行了组织细胞学观察.结果表明,所用不同浓度激素组合的培养基均能诱导薇甘菊外植体产生愈伤,培养基以MS+6BA 1 mg/L为最宜;不同种类的愈伤组织再分化结果有明显差异,生长良好的胚性愈伤组织转入分化培养基后可诱导体细胞胚的发生.薇甘菊体细胞胚胎发生的形式为单细胞内起源.体细胞胚起源于胚性愈伤组织的胚性细胞,胚性细胞经过一次不均等分裂产生两个细胞,即胚细胞和胚柄细胞.然后依次经过具胚柄的多细胞原胚,再经过球形胚、心形胚、鱼雷胚阶段,发育成具有子叶的成熟胚状体,然后长成为再生植株.