琼脂扩散试验结果影响因素的分析

琼脂扩散试验是临床中病原诊断和抗体效价测定的主要方法之一,该方法简洁、快速,在临床中应用广泛。但是该试验容易受到多种因素的影响而导致试验特异性、敏感性、精确性以及结果判断的不准确。本文就抗原、抗体性质、琼脂板以及反应条件等影响因素对琼脂扩散试验的影响进行了逐一分析。     

三种琼脂扩散沉淀试验诊断成年鸡马立克氏病的比较

关于鸡MD特异性诊断,琼脂扩散沉淀试验具有特异性高、方法简单易行等优点。然而以往的研究多局限于实验感染马立克氏病毒的鸡,而用琼脂扩散试验检查生产鸡群的羽囊抗原和血清抗体的报道较少。为此,     

鸡传染性喉气管炎兔源高免血清的制备及其双向琼脂扩散试验

用不同方法纯化 IL T病毒抗原免疫实验家兔 ,收集免疫血清做双向琼脂扩散试验 ,并进行特异性、敏感性和田间试验。结果用化学法纯化的 IL T病毒抗原免疫家兔可获得高效价 IL T免疫血清 ,以此血清做双向琼脂扩散试验 ,检查 15羽人工感染 IL T发病鸡喉咽部分泌物和 10羽健康鸡分泌物 ,结果发病鸡阳性检出率 10 0 % ,健康鸡阳性检出率为 0 ,临床症状出现 1周内阳性率10 0 % ,自然发病鸡群阳性率 80 .6 %。表明用化学法纯化的 IL T病毒抗原免疫家兔可获得高效价血清 ,以此建立的双向琼脂扩散试验是一种特异性强、灵敏度高的 IL T病毒抗原检测方法     

琼扩试验的应用及注意事项

琼脂扩散试验(Agar diffusion Tost;AD)也称免疫扩散试验,实际上是抗原-抗体在琼脂中的沉淀反应。它的基本原理是抗原-抗体分子在含有电解质的琼脂中向四周自由扩散,通常是从高浓度向低浓度游动,当抗原-抗体分子相遇时,如出现沉淀线(抗原-抗体的特异性结合物)可说明两者对应。因此,本法可以鉴定抗原,也可以鉴定抗体,在实际应用中以后者居多。在试验中,     

应用琼脂免疫扩散试验诊断猪伪狂犬病

应用琼脂免疫扩散试验检测猪血清中伪狂犬病毒抗体,并将这些结果与同一份血清的微量中和试验结果作比较。在753份血清样品的检验中,两种试验方法检出阳性数基本符合。试验结果表明,琼脂扩散试验特异性强、敏感性高、重复性好,是一种简便、准确、快速的方法。     

应用间接ELISA检测鸡痘病毒抗体方法的建立

应用鸡胚成纤维细胞(CEF)扩增鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)并提纯后作为抗原建立了具有较高特异性和灵敏性的间接ELISA方法.通过方阵滴定法来确定抗原最佳包被浓度为2.7μg/孔,待检血清最佳稀释倍数为1:100,其阳性临界值为OD≥0.113.将400份FPV免疫实验鸡血清用本方法进行检测,其阳性检出率为81.25%(325/400).此外,将该方法与琼脂扩散试验进行比较检测血清样品,结果显示本方法的灵敏度比琼脂扩散试验灵敏400～800倍,而且还有特异性强,操作简便、快速等优点.     

猪伪狂犬病琼脂免疫扩散试验研究

应用琼脂免疫扩散试验测猪血清中伪狂犬病毒抗体,并将这些结果与同一份血清的微量中和试验结果怍比较。在753份血清样品的检验中,两种试验方法检出阳性数基本吻合。试验结果表明,琼脂扩散试验特异性强,敏感性高、重复性好。是本病血清学诊断的一种简便、准确、快速的方法。     

应用不同的抗原提取物诊断种公羊布病的三种血清学试验比较

应用三种不同的抗原制剂诊断了由绵羊布氏杆菌引起的种公羊布病,对补体结合试验、琼脂扩散试验和酶联免疫吸附试验的敏感性和特异性进行了比较。在全部试验中用热盐水提取的抗原比用石油醚:氯仿:酚(8:5:2)或冷盐水提取的抗原诊断效果好。酶联免疫吸附试验最为敏感(97.6％),其次是琼扩试验(96.4％)和补体结合试验     

口蹄疫琼脂扩散试验的研究和应用

为建立一种适于野外对无症状口蹄疫病牛的检疫方法,以便应用于对从云南入境的进口偶蹄兽实施检疫,我们用“O”型细胞弱毒和"Asia I”型乳鼠弱毒BHK_(21)细胞适应毒的细胞病毒悬液,以透析方法浓缩提纯,制备口蹄疫琼脂扩散抗原,用入境的受检牛血清样品作试验,部分材料同时进行血清中和试验和查毒试验(Probang test),证明了我们自制的琼脂扩散抗原对病牛可以全部检出,同血清中和试验完全一致,18个月间共检疫入境牛342头,剔除阳性后,均未造成口蹄疫的爆发。 自制的琼扩抗原没有型特异性,可出现两条沉淀线。当经加温灭能后,则仅与相对应的阳性血清出现沉淀线,而与异型血清不出现反应,具有型的特异性。我们建立的琼脂扩散试验不仅可用作检疫,並可用作口蹄疫定型。现将一年多来的试验研究报告如下。     

禽脑脊髓炎病毒琼扩抗原的制备及其在评价鸡群抗体水平中的应用

以标准的禽脑脊髓炎病毒ＶＲ毒株和分离的野毒株分别感染ＳＰＦ鸡胚，取其病料组织制成琼脂扩散抗原。在含２０％ＮａＣｌ和０．５％苯酚的０．８％琼脂凝胶中，用这种抗原以琼脂扩散试验检测ＡＥ抗体，结果稳定，特异性强，方法简使迅速。     

应用O-多糖抗原琼扩反应鉴别布氏杆菌自然感染和菌苗接种反应牛

按J.W.Cherwonogrodzky、.K.H.Nielsen法制备布氏杆菌O-多糖抗原,建立琼脂扩散反应。该法可鉴别布氏杆菌自然感染病牛和菌苗接种反应牛。本文报道了应用该法,在生产条件下进行检测表现出的特异性和敏感性。 材料和方法:牛血清样本采自萨拉托夫州11个农场6655份。其中248份来自布病清净场,961份为2个布病疫情场,另5408份来自7个本病情况不清的农场。采血的牛只,除对照组外均在不同时间内接种过布氏杆菌菌苗。 血清样本按以下方法检测:用O-多糖抗原的琼脂扩散试验;使用凝集、补反通用抗原的凝集反应和补体结合反应。琼扩反应操作用0.8％的俄罗斯产琼脂,融于10％氯化钠液中,然后均匀辅浇在9cm×12cm的玻板上,每板18ml。用打孔器打孔、中间1孔,周围6孔。每板可打72个周围孔和12个中心孔。71个周围孔内滴加待检     

一例鸡马立克氏病与沙门氏菌病混合感染的实验室诊断

为确诊思南县某养殖专业合作社饲养的肉鸡发病死亡原因,采集病鸡羽髓、血样及病死鸡肝脏、脾脏进行细菌分离培养、相关病毒琼脂扩散试验和PCR检测。结果:肝脏组织中分离出沙门氏菌;羽髓琼脂扩散试验检测出马立克氏病抗原,血清琼脂扩散试验检测出马立克氏病抗体;肝脏、脾脏PCR检测出马立克氏病病毒核酸。结论:综合诊断为马立克氏病与沙门氏菌病混合感染。     

旋毛虫肌幼虫排泄/分泌物抗原的研究

为了研究在特定条件下经体外培养的旋毛虫肌幼虫排泄/分泌物(ES)抗原的特性,通过体外培养将所收集到的ES抗原经聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)、琼脂扩散试验进行分析。结果经SDS-PAGE分析出现了比较明显的2条蛋白带,其分子量为45 ku、49 ku;经琼脂扩散试验ES抗原与犬旋毛虫阳性血清出现了明显清晰的沉淀线,而与犬蛔虫阳性血清、犬绦虫阳性血清之间未出现沉淀线,ES抗原具有较强的特异性。表明研究结果为开展ES抗原的分子生物学的研究、分子生物学基因工程苗的研制打下了良好的基础。     

用大肠杆菌K99和F41菌毛抗原检测牛血清抗体的琼脂扩散试验的研究

用含２ｍｏｌ／Ｌ尿素的磷酸盐缓冲液以热处理方法提取的Ｋ９９和Ｆ４１菌毛作为抗原,对琼脂扩散试验方法进行研究。结果表明本试验方法简便,特异性强,敏感性高,可用于血清抗体检测;所制备的抗原稳定、重复性好。     

兔粘液瘤病的血清学诊断

<正>1琼脂(糖)免疫扩散试验该方法既能检测抗原又能检测抗体。由于粘液瘤病毒的抗原成分比较复杂,与相应抗血清进行琼脂扩散试验时可形成多条沉淀线,所以试验应出现三条沉淀线。如果试验血清中含有抗体,三条线中至少有一条弯曲向抗原滤纸条,否则成直线。如果试验血清中含有抗原,则至少有一条弯向标准血清滤纸条。样品采集。被检兔的全血或血清,并制备琼脂板。试验方法。将含标准血清和抗原的滤纸条放置于琼脂表面,含被检血清或全血的滤纸条放置于标     

鸡传染性法氏囊病快速诊断方法的研究

本文报道了一种既可以检测ＩＢＤ囊毒抗原，又可以检测ＩＢＤ抗体的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）双抗体夹心法。用本方法检测ＩＢＤ阳性法氏囊样品１２２份，结果检出阳性１２０份，符合率为９８．４％。检测阴性法氏羹样品８８份，均为阴性。本方法与琼脂扩散试验方法比较，共检测人工感染发病的病死鸡法氏囊９７份，结果琼脂扩散检出阳性法氏囊４９份（５０．５１％），阴性４８份（４９．４８％），而用本方法检测结果，全为阳性，检出阳性率为１００％，比ＡＧＰ法检出率高４９．４８％。检测高免蛋黄液的抗体。１６个样品（以２倍递增进行稀释），结果本方法比琼脂扩散试验高１～２个滴度。试验证明该方法特异、敏感，并且快速简便，试验在室温条件下进行，不需要任何仪器设备，用肉眼观察颜色的变化就可判断试验结果，试验反应时间仅需１０分钟左右。     

旋毛虫肌幼虫排泄／分泌物抗原的研究

为了研究在特定条件下经体外培养的肌旋毛虫幼虫排泄／分泌物（ES）抗原的特性,通过体外培养将所收集到的ES抗原经聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）、琼脂扩散试验进行分析。结果经SDS—PAGE分析出现了比较明显的2条蛋白带,其分子量为45ku、49ku;经琼脂扩散试验ES抗原与犬旋毛虫阳性血清出现了明显清晰的沉淀线,而与犬蛔虫阳性血清、犬绦虫阳性血清之间未出现沉淀线,ES抗原具有较强的特异性。表明研究结果为开展ES抗原的分子生物学的研究、分子生物学基因工程苗的研制打下了良好的基础。     

犬瘟热琼脂扩散试验方法的建立及初步应用

采用犬瘟热鸡胚成纤维细胞弱毒疫苗免疫绵羊制备琼脂扩散抗体，应用犬瘟热病貉肝脏（电镜检查“＋＋”以上）制备琼脂扩散抗原，建立了琼脂扩散试验方法，用于犬瘟热病死动物肝、脾脏器中病毒抗原成分的检出。检测送检病料１０份，与电镜检查结果比较，阳性符合率为８５．７％（６／７），阴性符合率为７５％（３／４），总体符合率为９０％（９／１０）。本方法特异、敏感，操作简便，易于推广应用。     

流行性出血病多克隆抗体C-ELISA检测方法的建立

为能简便、快速地进行流行性出血病病毒(epizootic haemorrhagic disease virus,EHDV)抗体监测,采用纯化的6型EHDV抗原包被ELISA板,以豚鼠抗EHDV-2型多克隆抗体作为竞争抗体,建立了检测EHDV群特异性抗体的竞争ELISA(C-ELISA)方法。结果显示:抗原最佳包被浓度为5.12μg·mL-1(1∶10 000),竞争抗体最佳稀释倍数为1∶10 000;通过对各270份阴性和阳性的牛、羊血清检测,确定该检测方法临界值为50%;特异性试验表明该ELISA方法仅能检测出不同血清型EHDV抗体,具有较好的群特异性;对已知抗体效价的阳性血清检测表明,建立的C-ELISA方法敏感性好于血清中和试验(SNT)和琼脂扩散试验(AGID);分别用C-ELISA、SNT、RTPCR和病毒分离试验对监控动物采集的血清和抗凝血样品进行检测,ELISA结果与其他3种方法检测结果对应一致。结果表明本研究建立的C-ELISA为EHDV抗体的检测提供了一种快速、敏感、稳定的方法。     

琼脂扩散法检测卵黄抗体效价影响因素的分析

抗体琼脂扩散试验是当前卵黄抗体效价测定的主要方法之一,该方法简洁、快速非常适合于临床中应用,但是该方法容易受到多种因素的影响而导致试验结果判断的不准确。本文就琼脂扩散试验中抗原抗体本身性质、反应特点、最适比例、可逆性、总量以及琼脂、水