山羊痘病毒和羊口疮病毒双重PCR检测方法的建立与初步应用

根据GenBank发表的山羊痘病毒（goatpox virus,GPV）和羊口疮病毒（orf virus,ORFV）基因序列,分别合成针对GPV ITR和ORFV H2L基因片段的2对引物,以GPV和ORFV的核酸混合物作为模板,经优化反应条件,成功建立了快速鉴别检测GPV、ORFV的双重PCR方法。特异性试验结果显示,该方法对GPV与ORFV核酸的扩增能获得289和507 bp的特异性目的片段,而对FMDV、FPV、BTV、健康山羊皮肤的核酸扩增均为阴性;敏感性试验结果显示,该方法对GPV核酸的最小检出量为4 pg,对ORFV核酸为0.4 pg;对临床采集的12份病料进行双重PCR扩增,GPV检出率为25%（3/12）,ORFV的检出率为75%（9/12）。结果表明,建立的双重PCR方法具有特异性强、敏感性高、快速简便等特点,可用于GPV或/和ORFV临床感染病例的联合检测与鉴别诊断。     

规模化猪场主要疫病监测及防制

本试验采用酶联免疫吸附试验（ELISA）、正向间接血凝试验（IHA）和乳胶凝集试验（LAT）对曲靖市 16个规模化猪场的2751份血清的8种猪病血清抗体进行了检测。检测结果显示,猪瘟病毒（HCV）、猪O型口蹄疫非结构蛋白（NS）、猪伪狂犬病病毒 gE基因（ADV gE）、猪细小病毒（PPV）、猪日本乙型脑炎病毒（JEV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）、猪圆环病毒2型（PCV 2）和布鲁氏杆菌的血清抗体阳性率分别为0%、0%、22.28%、32.93%、52.99%、29.96%、21.88%和0%;猪瘟（HC）、猪O型口蹄疫（FMD）、猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）免疫血清抗体阳性率分别为59.43%、64.56%、48.55%。结果表明,所检测的规模化猪场未感染猪瘟、O型口蹄疫、布鲁氏杆菌病野毒,但存在不同程度地猪伪狂犬病病毒、猪细小病毒、猪日本乙型脑炎病毒、猪圆环病毒2型、猪繁殖与呼吸综合征病毒感染;猪瘟、O型口蹄疫、猪繁殖与呼吸综合征总体免疫效果不佳。     

西藏林芝地区藏猪源大肠杆菌耐药表型及耐药基因检测

本文采集西藏林芝地区藏猪养殖场和散养藏猪腹泻物,采用细菌学方法分离鉴定藏猪源大肠杆菌后,检测抗菌药物的敏感性及耐药基因。结果显示:林芝地区藏猪源大肠杆菌分离菌株对各种抗生素存在不同程度的耐药性,其中对诺氟沙星、阿奇霉素、复方新诺明极敏感;对氯霉素、头孢唑林、链霉素、丁胺卡那霉素、四环素、庆大霉素、头孢西丁高度敏感;呋喃妥因中度敏感;而对万古霉素、青霉素、红霉素耐药。并检测出P基因,其检出率为100%。根据实验结果,提出了科学用药措施,为西藏林芝地区藏猪养殖业的健康发展提供理论依据。     

禽源致病性沙门氏菌耐药表型与耐药基因的分析

为了解江苏苏中地区禽源沙门氏菌耐药现象及耐药基因的存在情况,采用K-B法对22株沙门氏菌分离株进行12种抗菌药物敏感性试验,并通过PCR方法检测了12种耐药基因的存在情况。结果显示,所有菌株对甲氧胺嘧啶、阿米卡星、庆大霉素、萘啶酮酸、诺氟沙星的耐药率均在72.73%～100%之间;存在着5种耐药表型,每个耐药表型均在4重或4重以上,耐药最多菌株可耐受10种药物;扩增出9种耐药基因,与GenBank中的参考序列同源性均在98%以上;耐药表型与耐药基因的存在基本一致,但无绝对相关性。本研究结果表明苏中地区沙门氏菌耐药现象非常严重,且耐药基因广泛存在。     

黄芩对安普霉素耐药大肠杆菌的耐药消除研究

【目的】探讨黄芩对安普霉素耐药大肠杆菌的耐药消除作用。【方法】制备黄芩醇提物,采用琼脂稀释法检测黄芩醇提物对耐药大肠杆菌的最小抑菌浓度(MIC),通过耐药消除试验和影印法检测耐药消除率。进而采用微量肉汤稀释法和纸片扩散法检测消除前后大肠杆菌耐药性的变化,扫描电镜法观察细菌形态的变化,实时荧光定量PCR法检测耐药相关基因相对表达量的变化。【结果】黄芩醇提物对安普霉素耐药大肠杆菌的MIC为41.25 mg/mL,对耐药大肠杆菌的耐药消除率为11.7%～17.0%。黄芩醇提物处理后,大肠杆菌的MIC值由256μg/mL降至16～32μg/mL;扫描电镜观察发现,黄芩醇提物处理组细菌表面受损,菌体形态异常;实时荧光定量PCR检测结果显示,黄芩醇提物极显著提高了大肠杆菌中ompF、fimA、phnE和fhuF基因mRNA的相对表达量(P<0.01)。【结论】黄芩醇提物能提高ompF、fimA、phnE和fhuF基因的表达水平,破坏细菌表面,提高大肠杆菌敏感性,发挥对安普霉素耐药大肠杆菌的耐药消除作用。     

西藏牦牛源大肠杆菌主要耐药表型及耐药基因检测

对西藏6个不同地、市200株牦牛源大肠杆菌进行了氨基糖苷类、氟苯尼考和磺胺类药物耐药表型和耐药基因的PCR检测。结果显示:牦牛源大肠杆菌对氨基糖苷类药物耐药率分别为阿米卡星96%、链霉素94.59%、新霉素19%、庆大霉素23%、卡那霉素19%,耐药基因只检出rmtB基因,检出率为100%;氟苯尼考类药物耐药率为25%,耐药基因flor基因检出率25%;磺胺类药物耐药率为32%,耐药基因sul1基因检出率7%、sul2基因检出率7%、sul3基因检出率17%;且耐药表型与耐药基因检测结果基本一致,同时显示,西藏不同地区间牦牛大肠杆菌的耐药性存在差异,人口密集和流动较大的拉萨、林芝、日喀则市耐药现象较为严重,而阿里、山南和那曲地区相对较轻。以上耐药表型和耐药基因在西藏不同市、地区均有检出,同时存在多重耐药现象。结果表明,西藏牦牛源大肠杆菌存在耐药性,应引起重视,提示西藏地区要合理用药,减轻耐药性的产生。     

七类常见抗菌药耐药机制及耐药基因国内流行现状

为了解动物源细菌的抗菌耐药情况,加强耐药性的监测与控制,针对常见的七大类抗菌药物,阐述了它们的耐药机制以及耐药基因的国内流行现状。有研究显示:动物源细菌对各类抗菌药均有不同程度的耐药,且耐药基因种类繁多、分布广泛;流行率和检测率较高的耐药基因多数能在质粒、整合子、转座子等移动元件上被检出,并以水平传播的方式扩散;同一质粒上检测出数种耐药基因,这些质粒是细菌产生多重耐药现象的重要原因。本文对监管部门出台相应控制方案提供了理论依据。     

副猪嗜血杆菌病的研究进展

近年来,国内外许多猪场出现了一种以多发性浆膜炎、关节炎及高死亡率为特征,严重危害仔猪和青年猪的传染病,给养猪业带来了巨大的经济损失。经细菌分离培养、生化鉴定和分子生物学试验研究表明,该病主要由副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis, Hps）引起。为了更加全面地认识该病,作者对其病原学、流行病学、致病机理、临床症状、病理变化、诊断及防制作一综述。     

一株鹅Ⅰ型副粘病毒全基因克隆与序列分析

本研究分离了一株鹅I型副粘病毒（ZQ042）,应用RT-PCR技术对其编码的核蛋白（NP）、磷蛋白（P）、基质蛋白（M）、血凝素-神经氨酸酶蛋白（HN）、融合蛋白（F）和巨蛋白（L）6种主要结构蛋白分别进行扩增,然后将其克隆到pMD18-T载体后进行序列测定和拼接;并将克隆到的6个基因片段与国内外已报道的I型副粘病毒基因序列进行比较分析。分析结果表明,鹅副粘病毒分离株ZQ042 F基因与La Sota株同源性最高,同源率为99.1%,与其它各毒株各基因同源性均较低。     

耐药金黄色葡萄球菌gyrA基因突变与中药耐药抑制剂的回复突变研究

探讨金黄色葡萄球菌对氟喹诺酮类的耐药与gyrA基因突变的关系及中药耐药抑制剂对gyrA基因是否具有回复突变作用,以便从分子水平初步探讨复方中药耐药抑制剂的耐药抑制分子机理。用诺氟沙星逐步诱导金黄色葡萄球菌敏感株ATCC29213,建立了MIC值为64μg/mL、128μg/mL和256μg/mL的耐药突变株;PCR扩增标准株、耐药株和中药处理的耐药株gyrA基因,产物回收纯化后送测序公司测序。gyrA基因测序结果用DNAsis软件分析表明,细菌的耐药性程度越高,碱基突变率增加;gyrA基因氨基酸序列突变分析表明,84位亲水性丝氨酸被疏水性缬氨酸取代,与细菌的高水平耐药性密切相关。中药耐药抑制剂对84位和99位氨基酸突变具有回复突变的作用。结论:中药耐药抑制剂对耐药金黄色葡萄球菌gyrA基因具有回复突变作用。     

Resistance

Sir. — Much has been said and written about anthelmintic resistance, but although careful watch is kept, little has emerged on fly resistance to organic phosphorus compounds. Between Christmas 1981 and New Year 1982 I was in communication with a situation in the Wairau Valley in Marlborough (from whence dieldrin resistance was first recorded) that initially looked disturbing.     

致病性沙门菌的耐药表型分析及其耐药基因检测

采用K-B法测定自雏鸡分离的致病性沙门菌对四环素等20种抗生素的耐药情况,并应用PCR方法检测相应的耐药基因tetA、tetB、tetC、tetD、tetE和tetG.结果显示,受试4株菌株全部对四环素、强力霉素高度耐受,在染色体上均有tetA基因存在,其中3株在质粒上还存在tetB基因,耐药表型与耐药基因的检测结果完全相符.表明tetA和tetB基因是决定本试验中临床分离沙门菌株对四环素类抗菌药物耐药的主要原因.     

抗性基因在鸡抗病育种中的研究进展

提高家禽抵抗传染病和产生球虫病防御能力的方法有很多,但提高家禽天然抵抗力是关键,因此加强家禽遗传抗病性研究和应用对保障养禽业的健康发展具有重要意义。     

小熊猫源铜绿假单胞菌耐药性和耐药基因的研究

为了鉴定小熊猫(Ailurus fulgens)肺源致病菌并研究其耐药性和耐药基因,从死亡小熊猫肺部组织中无菌分离培养致病菌,进行革兰氏染色及16S rDNA测序鉴定。采用纸片扩散法(K-B法)进行细菌药敏试验和小鼠致病性试验,应用PCR法检测分离株的28种β-内酰胺酶相关基因、6种氨基糖苷类修饰酶基因(AMEs)、外膜蛋白D2基因(oprD2)、磺胺耐药基因(qacE△1-sul1)、3种整合子基因(intⅠ1、2、3)和主动外排泵调节基因(mexR)等共40种耐药基因。肺组织样品中分离培养的1株菌鉴定为铜绿假单胞菌,革兰氏染色阴性,药敏试验对氯霉素敏感,对β-内酰胺类、头孢类、氨基糖甙类、大环内酯类、硝基咪唑类、喹诺酮类和利福霉素等均具有耐药性,小鼠表现与小熊猫相似的症状而死亡。5种耐药基因TEM、aac(3)-Ⅱ、ant(3″)-Ⅰ、qacE△1-sul1、intⅠ1为阳性,其他35种为阴性。该小熊猫肺源铜绿假单胞菌具有较强的致病性和多药耐药性,其耐药机制与5种耐药基因有关。     

新疆猪源沙门氏菌耐药性及耐药基因检测

为了解新疆某规模化养殖场猪源沙门氏菌对临床上常用抗菌药物的耐药情况,以及β-内酰胺酶、16S rRNA甲基化酶和质粒介导的喹诺酮耐药（plasmid mediated quinolone resistance,PMQR）基因的流行情况,本试验通过琼脂稀释法对分离的菌株进行最小抑菌浓度测定,PCR方法进行β-内酰胺酶bla_TEM、bla_CMY-2、bla_CTX-M、bla_LAP-1、bla_KPC、bla_OXA和bla_SHV基因,16S rRNA甲基化酶基因armA和rmtB及PMQR类基因qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、qepA、oqxA、oqxB和aac（6'）-Ib-cr的检测,确定阳性菌株,分析其携带的基因型与耐药表型之间的关系。分离的猪源沙门氏菌对环丙沙星和安普霉素耐药率最高,均为77.9%（102/131）,耐药菌主要以8耐为主（29.0%,38/131）。从被检基因中检测出11种耐药基因,不同基因共存有24种类型,主要以bla_TEM+bla_OXA+qnrS+aac（6'）-Ib-cr+oqxA+oqxB（27.6%,32/116）;bla_TEM+bla_OXA+qnrS+oqxA+oqxB（24.1%,28/116）;bla_TEM+qnrS（18.0%,21/116）形式共存。该养殖场分离的沙门氏菌耐药现象严重,分离耐药菌株存在β-内酰胺酶、16S rRNA甲基化酶和PMQR类基因共存现象,提示应加强对β-内酰胺酶、16S rRNA甲基化酶和PMQR类因子的监控。     

Detection of Resistance and Resistance Genes of Salmonella from Swine in Xinjiang

The objective of this study was to investigate the resistance of Salmonella and prevalence of resistance genes isolated from a pig farm in Xinjiang, and their coexistence with the major β-lactamases, 16S rRNA methylation enzyme genes and PMQR. The minimum inhibitory concentrations of Salmonella isolated from the pig farms were determined by agar dilution method, PCR was used to detect bla_TEM, bla_CMY-2, bla_CTX-M, bla_LAP-1, bla_KPC, bla_OXA and bla_SHV genes, 16S rRNA methylation enzyme genes armA and rmtB, and PMQR including qnrA, qnrB, qnrC, qnrD, qnrS, qepA, oqxA, oqxB and aac(6')-Ib genes. The positive strains were performed by using DNA sequencing to determine the purpose of the belt. The result showed that resistant rate of Salmonella isolates from swine were highest to ciprofloxacin and apramycin sulfate (77.9%, 102/131). Resistant mainly based on 8 kinds of drug resistance (29.0%, 38/131), 11 kinds of resistance genes were detection, the coexistence of different genotypes had 24 types. The main types were bla_TEM+bla_OXA+qnrS+aac(6')-Ib-cr+oqxA+oqxB (27.6%, 32/116), bla_TEM+bla_OXA+qnrS+oqxA+oqxB (24.1%, 28/116) and bla_TEM+qnrS (18.0%, 21/116). The Salmonella isolated from the farm had phenomenon seriously resistance, it coexisted with the main β-lactamase, 16S rRNA methylation enzyme genes and PMQR factors. The result suggested that it should strengthen monitoring to the β-lactamase enzymes, 16S rRNA methylation enzyme genes and PMQR factors.     

水禽抗病基因与抗病育种研究

为筛选和鉴定水禽杭病基因与分子标记,本文系统研究了水禽免疫水平综合评价标准、抗病基因分子结构和多态性及其与免疫性状相关性、抗应激反应与相关基因以及抗病育种,并提出今后的研究目标,为水禽抗病分子育种研究莫定基础.     

鸡白痢沙门菌分离株的耐药性及磺胺类耐药机制研究

采用药敏纸片法,对33株鸡白痢沙门菌进行了药敏试验,结果显示丁胺卡那、卡那霉素、庆大霉素、环丙沙星、氟苯尼考的抑菌作用较强,所有受试菌株均对其敏感;58%～94%的受试菌株对氯霉素、新霉素、恩诺沙星和羧苄青霉素敏感;61%～88%的受试菌株对四环素、复方磺胺、磺胺异恶唑耐药。33株鸡白痢沙门菌分离株出现了多重耐药性,2耐及以上占85%,3耐及以上占66%,4耐及以上仅占27%。根据发表的序列设计了3对引物,分别扩增磺胺类耐药基因sul1、sul2和Ⅰ类整合子,所选的18个对磺胺及磺胺增效剂均耐药。分离株中94.4%(17/18)的菌株携带sul1基因,没有sul2基因,同时94.4%(17/18)的菌株携带Ⅰ类整合子,大小分别为0.7kb和1.6kb。研究表明这些鸡白痢沙门菌的耐药谱较窄,且Ⅰ类整合子在磺胺类耐药菌株的产生中起到很重要的作用。