猪瘟RT-PCR-步法检测技术的建立及应用

为了建立一种早期猪瘟病原诊断方法,试验采用RT-PCR-步法检测技术,根据猪瘟病毒(CSFV)E2基因序列合成1对特异性引物,通过确定最佳PCR反应条件对其特异性、敏感性进行测定,并对12份可疑猪瘟病毒感染的病料进行了检测.结果表明:RT-PCR-步法检测技术快速、敏感性高、特异性好,可以用于猪瘟病原的早期诊断.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒和链球菌混合感染的诊治

为快速诊断猪繁殖与呼吸综合征和猪链球菌病的病因及其有效防治提供参考,对2010年7月贵州省某猪场送检病猪(5例)进行了流行病学调查、剖检病变观察、细菌学和PCR检测,并进行了致病性和药敏试验.结果表明:经流行病学调查和剖检病变观察,该病例为疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒和细菌感染所致;细菌分离、生化鉴定为链球菌,猪繁殖与呼...     

鸡马立克氏病的诊断与防治

贵州省某鸡场送检发病鸡6只,根据流行病学、剖解病变疑似马立克氏病,经肝脏进行细菌分离培养24 h后观察无细菌生长,琼脂扩散试验为阳性,马立克氏病毒核酸的PCR检测能扩增出目的条带,表明该病为马立克氏病病毒感染所致。     

山羊痘病毒和羊口疮病毒双重PCR检测方法的建立与初步应用

根据GenBank发表的山羊痘病毒（goatpox virus,GPV）和羊口疮病毒（orf virus,ORFV）基因序列,分别合成针对GPV ITR和ORFV H2L基因片段的2对引物,以GPV和ORFV的核酸混合物作为模板,经优化反应条件,成功建立了快速鉴别检测GPV、ORFV的双重PCR方法。特异性试验结果显示,该方法对GPV与ORFV核酸的扩增能获得289和507 bp的特异性目的片段,而对FMDV、FPV、BTV、健康山羊皮肤的核酸扩增均为阴性;敏感性试验结果显示,该方法对GPV核酸的最小检出量为4 pg,对ORFV核酸为0.4 pg;对临床采集的12份病料进行双重PCR扩增,GPV检出率为25%（3/12）,ORFV的检出率为75%（9/12）。结果表明,建立的双重PCR方法具有特异性强、敏感性高、快速简便等特点,可用于GPV或/和ORFV临床感染病例的联合检测与鉴别诊断。     

贵州地区羊口疮病毒B2L基因克隆及原核表达载体构建

用H2L基因特异性引物对羊口疮临床疑似病料进行鉴定,采用PCR扩增出阳性样品羊口疮病毒结构蛋白B2L基因,回收纯化PCR产物,克隆至pMD18-T,测序结果表明插入的片段为目的基因,全长1137 bp。将目的基因定向克隆至pET-32a构建了B2L基因原核表达载体pET-32a-B2L,经PCR鉴定、酶切及进一步测序证明表达载体构建成功,为下一步的表达及基因工程疫苗的研究奠定了良好基础。     

羊口疮病毒贵州株B2L基因的克隆及其分子特征分析

根据已发表的ORFV B2L基因序列设计引物,进行B2L基因的特异性扩增,并将其克隆到pMD18-T载体后进行测序。结果表明,贵州株的B2L基因长为1 137 bp。核苷酸序列比较、分析,结果表明,贵州株与湖北株(GU320351)同源性最高,达99.1%,与2003年北美分离株(AY278208)和2003年美国动物园分离株(AY424971)同源性最低,为97.1%,所推导氨基酸的同源性为96.3%~99.5%。说明贵州株B2L基因与参考毒株之间差异不大。该研究为贵州省羊口疮病毒疫苗选择提供理论基础。     

羊口疮病毒PCR检测方法的建立与应用

根据羊口疮病毒(ORFV)H2L基因序列,设计合成1对引物,通过确定最佳的PCR反应条件,建立了检测羊口疮病毒DNA的PCR检测方法.结果显示,用这1对引物均能扩增出羊口疮病毒507 bp的特异性片段,同时检测口蹄疫病毒和山羊痘病毒,结果均为阴性,最小检出量为5 pg.该方法具有良好的特异性和敏感性,可对临床组织病料中的ORFV进行快速检测.     

猪致病性大肠杆菌的分离鉴定及药敏试验

2010年8月贵阳市某养猪场送检4头疑似大肠杆菌病的病死小猪,从心、肝、肾、淋巴结、脾中无菌操作接种鲜血营养琼脂平板、普通营养琼脂平板、麦康凯琼脂平板,经生化试验、PCR扩增,分离鉴定出1株大肠杆菌,经动物试验其致病性较强,发病率100%(20/20),致死率100%(20/20),表明:此菌为致病性大肠杆菌.药敏试验...