陆川猪与外来猪精液质量及精子黏附蛋白基因家族 mRNA表达的比较

精子黏附蛋白基因家族是公猪精液中精浆蛋白的最主要成分,对精子的活力、获能和与卵子的结合都会起到调控作用。为了研究不同猪种之间繁殖力的差异,试验以陆川猪、长白猪和杜洛克猪为研究对象,以常规方法检测新鲜精液的精子活力、活率及畸形率,并应用半定量RT-PCR技术检测精子黏附蛋白基因家族mRNA的表达,最后采用单因素方差分析法分析数据之间差异的显著性。结果表明,陆川猪的精子活力及活率与长白猪、杜洛克猪差异不显著（P>0.05）,但是精子畸形率极显著低于2种外来猪种（P<0.01）;陆川猪精子黏附蛋白基因家族中仅 AQN1基因 mRNA表达水平显著低于杜洛克猪（P<0.05）,其余与长白猪、杜洛克猪之间无显著差异（P>0.05）;长白猪精液中精子黏附蛋白基因家族的 AQN3、AWN和PSP-II基因 mRNA表达水平显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）高于杜洛克猪。总之,不同猪种精子黏附蛋白基因家族 mRNA表达水平存在明显差异,但与精子活力、活率及畸形率等精液质量指标的高低没有规律性的关联。     

陆川猪与外来猪精液质量及精子黏附蛋白基因家族mRNA表达的比较（英文）

精子黏附蛋白基因家族是公猪精液中精浆蛋白的最主要成分,对精子的活力、获能和与卵子的结合都会起到调控作用。为了研究不同猪种之间繁殖力的差异,试验以陆川猪、长白猪和杜洛克猪为研究对象,以常规方法检测新鲜精液的精子活力、活率及畸形率,并应用半定量RT-PCR技术检测精子黏附蛋白基因家族m RNA的表达,最后采用单因素方差分析法分析数据之间差异的显著性。结果表明,陆川猪的精子活力及活率与长白猪、杜洛克猪差异不显著(P>0.05),但是精子畸形率极显著低于2种外来猪种(P<0.01);陆川猪精子黏附蛋白基因家族中仅AQN1基因m RNA表达水平显著低于杜洛克猪(P<0.05),其余与长白猪、杜洛克猪之间无显著差异(P>0.05);长白猪精液中精子黏附蛋白基因家族的AQN3、AWN和PSP-II基因m RNA表达水平显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)高于杜洛克猪。总之,不同猪种精子黏附蛋白基因家族m RNA表达水平存在明显差异,但与精子活力、活率及畸形率等精液质量指标的高低没有规律性的关联。     

褪黑素对热应激猪精子质量的影响

为研究褪黑素(Melatonin,MLT)对热应激引起的猪精子质量下降的缓解作用及其机制。首先用免疫荧光方法检测MLT受体在猪精子上的存在和分布;然后将稀释后的精子分为对照组(ck)、热应激组(H)、MLT组(M)、热应激+MLT组(H+M)、热应激+MLT受体拮抗剂Luzindole组(H+L)和热应激+MLT受体拮抗剂Luzindole+MLT组(H+L+M)6个组,处理结束后检测各组精子活率、活力、线粒体活性、钙离子水平以及顶体完整率。结果显示:猪精子中存在MLT受体MT1和MT2,且均分布于精子头部;与对照组相比热应激组各项指标显著下降,MLT组精子活率没有显著改变(P0.05),但精子活力、线粒体活性、钙离子水平和顶体完整率显著升高(P0.05)。添加MLT受体拮抗剂Luzindole后精子活力、线粒体活性和钙离子水平显著下降(P0.05),顶体完整率呈一定程度下降,但差异不显著(P0.05)。以上结果表明:热应激会导致猪精子质量显著下降,并且MLT能通过受体途径改善热应激对猪精子质量的影响,但同时也存在非受体介导的作用。     

实时精子分离系统对猪精子冷冻品质的影响

【目的】探索实时精子分离系统对猪精子冷冻品质的影响。【方法】采用实时精子分离系统对精液进行分离优选,液氮冷冻法制作细管冻精,以未分离精液为对照,检测实时精子分离系统对猪精子冷冻品质的影响。【结果】分离优选精子解冻后,精子活率、顶体完整率、质膜完整率、正常染色质率均明显高于对照组(P<0.01);分离组精子的正常形态率也显著高于对照组,且未受冷冻-解冻过程的影响(P>0.01);分离过程对精子密度也未产生显著影响(P>0.01)。【结论】实时精子分离系统可以显著改善猪冷冻精液的品质。     

精浆浓度对17℃保存下猪精子活率和活力的影响

为了解精浆浓度对精子常温保存的影响,对含不同浓度精浆的商业化CXM稀释剂和自制稀释剂的精液于17℃下的保存效果进行比较.结果表明:当稀释剂为CXM时,25％精浆获得了最好的保存效果,含0、5％精浆也有较好的保存效果;而使用自制稀释剂时,含50％、75％精浆获得了较好的保存效果,其次是含25％精浆.说明在常温保存中一定浓度的精浆有利于维持精子的活力和活率,但这与稀释剂组成有关.在实际生产应用中,在稀释剂中约添加25％精浆对维持精子在常温保存中的活力和活率可能有较好效果.     

东方田鼠精子及冷冻复苏精子体外受精的研究

本文采用Nakagata法,对东方田鼠精子及冷冻复苏后的精子进行体外培养、体外受精,结果显示:东方田鼠精子浓度约为106～108个·μL-1,精子活力冷冻前约为20%～80%,冷冻后约为1%～50%,精子经冷冻复苏后的体外受精率为10%～50%,与冷冻前的体外受精率80%～95%相比,差异显著。     

胭脂鱼精子低温保存及其在人工授精中的应用

[目的]研究胭脂鱼精子的低温保存方法,为胭脂鱼的人工繁殖和人工授精提供基础依据。[方法]试验配制了A、B、C、D4种精子保存液,以0．7％的NaCl溶液作为对照,以精子被激活后的活率为指标,对4种精子保存液保存成熟的胭脂鱼精子的效果进行评价。[结果]在低温（0～4℃）条件下,4种精子保存液之间及其与对照溶液之间的差异比较明显。其中保存效果最好的是B液,能在120h内使精子的活率保持为80％;D液次之,能在84h内使精子的活率保持为80％。胭脂鱼在淡水中快速运动时间为（24．0±3．5）s,寿命为（128．0±9．5）s。2007～2008年精子保存B液在胭脂鱼的人工授精中进行应用,受精率为53％～85％。[结论]用精子保存液低温保存胭脂鱼精子的方法是切实可行的。     

酸诱导分离家兔X、Y精子研究

利用X精子在酸性环境条件下的运动活性比Y精子强的原理,通过酸诱导,用王氏管分离法(实时精子分离技术)分离家兔X、Y精子,同时利用体视显微镜评定所分离精子的活率,并用喹吖因染色法进行鉴定。结果表明,在稀释液pH为5．5时分离效果最好,分离后目的精液精子活率平均达(91±1．4)％,较分离前平均精子活率(82±1．3)％提高了9．1％,两者差异极显著(P<0．01);分离后的精液中,X精子的比例为(73．3±1．0)％,Y 精子的比例为(26．7±1．0)％,与分离前精液中X、Y精子各占50％的比例差异均极显著(P<0．01),表明酸诱导条件下的王氏管分离法是X、Y精子分离简单有效的方法。     

中药提取液在大鼠附睾精子冷冻保存中的应用效果

对菟丝子、淫羊藿水提液进行分离纯化,并将水提液加入大鼠精液冷冻保护剂中,对大鼠附睾尾部精子进行冷冻保存,并评估冷冻前后精子活率指数,采用伊红染色评估精子畸形率。结果表明:添加菟丝子、淫羊藿水提液的冷冻保护剂可以提高解冻后精子活率指数。菟丝子、淫羊藿水提液在大鼠精液冷冻保存过程中有一定的保护作用。     

PAF对长白猪精子活率及运动速度影响的研究

在人工采集的长白猪精液中分别加入0,5,10,25,50,100ng mL的血小板活化因子(PAF),于37℃恒温水浴锅中温育5,15,25,35,45,60min。显微镜下检测精子活率,同时用浊度分析法检测快速运动相精子的平均速度(VRM)和含量(FRM)。结果表明:PAF质量浓度为10ng mL的试验组与对照组相比,温育15～60min,精子活率都显著提高(P<0 05);PAF质量浓度为5ng mL的试验组与对照组相比,温育25～45min,精子活率都显著提高(P<0 05);PAF质量浓度为10,25,50,100ng mL的试验组与对照组相比,有显著提高快速运动相精子运动速度的作用(P<0 05);在试验浓度范围内,试验组与对照组相比,精子含量均无显著差异(P>0 05)。认为一定浓度的PAF可提高长白猪精子的活率和快速运动相精子的运动能力。     

pH、盐度及K+、Ca2+和葡萄糖对萨罗罗非鱼精子活力的影响

[目的]确定萨罗罗非鱼精子活力最高时各因子的最佳参数,进一步提高尼罗罗非鱼♀×萨罗罗非鱼♂的受精率.[方法]利用显微镜观察对比不同梯度pH、盐度、离子及葡萄糖溶液中萨罗罗非鱼精子的活力状况,考察指标包括精子快速运动时间、寿命及激活率.[结果]pH 7.5～8.0时,萨罗罗非鱼精子激活率最高,达90％;在pH 7.5的条件下,精子快速运动时间和寿命最长,为66.33±2.25和933.17±25.79 s.在25‰～32‰的盐度范围内,萨罗罗非鱼精子活力较强,其中以30‰的精子活力最高,快速运动时间和寿命分别为63.50±2.35和402.50±7.31 s,激活率达90％.随K+浓度的增加,萨罗罗非鱼精子的快速运动时间、寿命及激活率均呈先升高后降低的变化趋势,其中以75mmol/L的精子活力最高,精子寿命为500.33±8.69 s,激活率为90％.Ca2+对萨罗罗非鱼精子活力有明显抑制作用,其浓度为37.8 mmol/L时精子快速运动时间和寿命最长,分别为38.50±2.43和117.50±3.21 s,精子激活率为80％;而后随Ca2+浓度的增加,精子开始出现聚集现象,活力明显下降,Ca2+浓度增至151.2mmol/L时,精子已完全失活.相对于K+和Ca2+,葡萄糖可适当延长萨罗罗非鱼精子寿命,其浓度为150mmol/L时,精子寿命最长,为281.00±5.90 s,激活率达90％.[结论]针对尼罗罗非鱼♀×萨罗罗非鱼♂人工繁殖中受精率低的问题,生产上除了选择优质尼罗罗非鱼卵细胞、优化孵化环境及人工繁殖技术外,还可通过适宜游动介质参数(pH 7.5～8.0、盐度30‰～32‰、75～100mmol/LK+、37.8 mmol/L Ca2+、100～125mmol/L葡萄糖)激活萨罗罗非鱼精子活力,进而提高其杂交受精率.     

猪精液冷冻与常温保存技术的研究

为研究冷冻保存和常温((17±0.5)℃)保存后猪精子活率、活力和顶体完整率,比较了猪精液冷冻稀释液中2种甘油含量细管法的快速冷冻效果,以及不同解冻温度对冷冻精液的影响,采用细胞计数法、FDA-PI双重染色法与Giemsa染色方法检测精子的活率、活力和顶体完整率。结果显示:3%(体积分数,下同)甘油冷冻解冻后精液的活率、活力(38.54%、52.24%)显著(P<0.05)高于2%甘油组(15.63%、28.22%),但3%甘油组顶体完整率(11.55%)显著(P<0.05)低于2%甘油组(21.71%)。38℃水浴解冻后的精子在39℃培养箱中4 h内活率高于0.3,而50℃水浴解冻后1 h后的活率低于0.3。精液稀释液Anderohep和BTS在常温((17±0.5)℃)保存新鲜猪精子的活率与顶体完整率上效果相似,保存3 d内精子活率达0.6以上,保存6 d内精子活率为0.3以上。结果表明,使用3%甘油冷冻保存及2种常温保存稀释液均可以较好地保存精子。     

克林霉素对雄性小鼠精子功能的影响

[目的]研究克林霉素对雄性小鼠生殖细胞的影响。[方法]取48只健康成年雄性小白鼠,随机分为试验A组、B组、C组和对照组,每组12只小鼠。试验A、B和C组分别注射克林霉素15、30和60 mg/kg.d,对照组腹腔注射生理盐水。29 d后,脱臼处死小鼠,观察小鼠精子的活率、畸形率、精子膜低渗肿胀率。[结果]试验B、C组小鼠精子活率和尾膜肿胀比率低于对照组,而畸形率高于对照组;试验A组小鼠精子活率、畸形率以及尾膜肿胀比率与对照组相比无显著差异。[结论]克林霉素使用剂量等于或超过重度感染使用剂量时会影响雄性小鼠精子的正常功能。     

解冻温度对大额牛(Bos frontalis)精子活率及形态的影响

分别用32、35、38、41和44 ℃水浴解冻大额牛细管冻精,解冻后在常温(平均温度18.06±1.50 ℃,相对湿度46.64±4.52 %)下保存40 h,分别在0、6、12、18、24、30、36、38、39和40 h取样在显微镜下观察记录精子活率和活力;并在解冻后0、6、12、18和24 h用姬姆萨染色,在显微镜下观察记录精子形态,统计分析5个时段的精子畸形率.研究结果:①35 ℃解冻的精子复苏率为68.80 %,极显著高于44 ℃解冻的54.2 %(P<0.01),但与其它3个解冻温度比较差异不显著(P>0.05).②以38～44 ℃解冻的精子存活时间在38～39 h之间,以32 ℃解冻的存活时间最短,仅为36 h.④解冻后0 h的精子活率在42.50 %～50.00 %之间,不同解冻温度间差异不显著(P>0.05);保存6、12和18 h时,分别以35、38和41 ℃显著高于44 ℃(P<0.05);保存24 h后,各解冻温度间差异不显著P>0.05).④解冻后0 h的精子活力以35 ℃极显著高于44 ℃(P<0.01);保存6 h以32～41 ℃显著高于44 ℃(P<0.05);保存18 h,以32和41 ℃高于44 ℃(P<0.05);保存24 h后各解冻温度间差异不显著(P>0.05).⑤用41和44 ℃解冻的总精子畸形率极显著高于38 ℃(P<0.01),显著高于35 ℃(P<0.05),32、35和38 ℃间及32、41和44 ℃间差异不显著(P>0.05),用35和38 ℃解冻对精子形态损伤较小.研究表明:解冻温度越高大额牛冻精的精子活率和活力降低速度越快,精子畸形率也高,且解冻温度对精子头部和尾部形态的影响最大;大额牛细管冻精宜用38±3 ℃水浴10s解冻,解冻后在18 ℃以下常温下保存6h对其精子活力等影响不大.     

不同解冻温度和时间对肉牛细管冻精精子活力的影响

[目的]寻找肉牛精子最佳解冻温度和解冻时间。[方法]将54支利木赞公牛细管冻精在不同温度、不同时间下进行解冻,对解冻后的精液品质进行检测。[结果]解冻后精子活率随解冻温度升高(40～75℃)而升高,而畸形率随解冻温度升高而降低,但高温下(90℃)解冻,精子活率显著低于解冻温度为40～75℃(P<0.05),畸形率显著高于解冻温度75℃(P<0.05);低温(40、75℃)下随着解冻时间延长,精子活率增高,但差异不显著;高温(90℃)下解冻,精子活率与解冻时间长短关系更为明显,时间越长,精子活率越低。精子畸形率、存活时间与解冻时间无显著关系。[结论]在生产实践中根据具体情况选用适合的解冻温度和解冻时间,建议使用75℃/3～5s解冻。     

HSP90蛋白表达量与牛精子抗冻性的关系

【目的】探索热应激蛋白90（HSP90）表达量与牛精液冷冻-解冻后品质的关系。【方法】采用假阴道法采集身体健康、年龄2～4岁的9头荷斯坦奶牛精液（编号1～9）,测定新鲜精液指标（活力、形态、活率和密度）,评定其品质,合格的精液样品经过冷冻解冻后检测其精子活率、质膜完整率和顶体完整率,并根据冻后品质将其分为HFTs(High freezing resistance teams)和LFTs（Low freezing resistance teams) 2组,对精子HSP90蛋白进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）电泳和Western blot检测,分析其表达量与精子抗冻性的关系。【结果】不同牛个体精液冻后品质相差较大。SDS-PAGE电泳结果显示,HFTs组的分子质量约为90 ku的蛋白表达量显著高于LFTs组（P＜0.05）,经Western blot分析,该蛋白为HSP90。HSP90蛋白表达量与冷冻-解冻后的牛精子品质呈明显正相关,其与精子活率、顶体完整率、质膜完整率的相关系数分别为0.364,0.447和0.402。【结论】HSP90蛋白表达量可以作为判断牛精子抗冻性的指标之一。     

高体革鯻精子超低温保存方法研究

[目的]对高体革鯻（Scortum barcoo）精子的超低温保存技术进行研究。[方法]首先,用精子活力为标准确定稀释液中NaCl和KCl的最佳浓度;然后,使用二甲亚砜和甘油分别作为抗冻剂,进行超低温保存试验,测定高体革鯻精子复活率和活力。[结果]稀释液中含0.750%NaCl和0.025%KCl时,效果最佳。当二甲亚砜浓度为10%,葡萄糖为5%时,精子复活率和活力分别达到了68.2%和60.7%,保存效果最佳。[结论]稀释液中NaCl和KCl的浓度,对精子活力有明显影响;使用二甲亚砜作为抗冻剂进行低温保存的效果优于甘油;在抗冻保护剂中加入适量葡萄糖会提高保存效果。     

36h睡眠剥夺对雄性小鼠性行为及精子质量的影响

[目的]研究睡眠剥夺对雄性小鼠性行为及精子活性的影响。[方法]用轻柔刺激法睡眠剥夺昆明雄性小鼠36 h,观察其性行为,通过镜检计算精子活率和精子畸变率。[结果]36 h睡眠剥夺后,捕捉潜伏期极显著升高(P0.01),捕捉次数极显著降低(P0.01)。36 h睡眠剥夺后精子活率显著降低(P0.05),精子畸变率极显著升高(P0.01)。[结论]36 h睡眠剥夺可对雄性小鼠性行为及精子质量产生明显不良影响。     

细鳞斜颌鲴精子活力观察

为了解细鳞斜颌鲴精子的生理特性,采用实验生态-显微观察方法研究了几种因子对细鳞斜颌鲴精子活力的影响.结果表明,精子能激活的pH范围为5.0～10.58,精子活力较好的pH范围为6.0～7.84;pH 6.9时精子激活率达（89.00±1.0）％、运动时间达25.00±2.65 s、寿命达30.67±2.08 s.精子在1.0～7.0 g/L葡萄糖溶液中均有一定比例被激活,在6.0 g/L葡萄糖浓液中激活率达（89.33±0.94）％、运动时间达25.67±1.25 s、寿命达33.67±0.94 s.精子在2～7 g/L NaCl及KCl溶液中均能激活,在5 g/L NaCl及KC1溶液中活力较好;精子在0.2～0.5 g/L MgCl2及CaCl2溶液中激活率较低,在0.1、0.6、0.7 g/L MgCl2及CaCl2溶液中出现凝集现象.精子在低温4℃下保存3h活力与鲜精基本相同.D-19和Saad稀释液能有效抑制精子运动,且重新被淡水激活后活力较好,可考虑作为精子冷冻保存用稀释液.     

pH、盐度及K+、Ca2+和葡萄糖对萨罗罗非鱼精子活力的影响

【目的】确定萨罗罗非鱼精子活力最高时各因子的最佳参数,进一步提高尼罗罗非鱼♀×萨罗罗非鱼♂的受精率。【方法】利用显微镜观察对比不同梯度pH、盐度、离子及葡萄糖溶液中萨罗罗非鱼精子的活力状况,考察指标包括精子快速运动时间、寿命及激活率。【结果】pH 7.5~8.0时,萨罗罗非鱼精子激活率最高,达90%;在pH 7.5的条件下,精子快速运动时间和寿命最长,为66.33±2.25和933.17±25.79 s。在25‰~32‰的盐度范围内,萨罗罗非鱼精子活力较强,其中以30‰的精子活力最高,快速运动时间和寿命分别为63.50±2.35和402.50±7.31 s,激活率达90%。随K+浓度的增加,萨罗罗非鱼精子的快速运动时间、寿命及激活率均呈先升高后降低的变化趋势,其中以75 mmol/L的精子活力最高,精子寿命为500.33±8.69 s,激活率为90%。Ca2+对萨罗罗非鱼精子活力有明显抑制作用,其浓度为37.8 mmol/L时精子快速运动时间和寿命最长,分别为38.50±2.43和117.50±3.21 s,精子激活率为80%;而后随Ca2+浓度的增加,精子开始出现聚集现象,活力明显下降,Ca2+浓度增至151.2 mmol/L时,精子已完全失活。相对于K+和Ca2+,葡萄糖可适当延长萨罗罗非鱼精子寿命,其浓度为150 mmol/L时,精子寿命最长,为281.00±5.90 s,激活率达90%。【结论】针对尼罗罗非鱼♀×萨罗罗非鱼♂人工繁殖中受精率低的问题,生产上除了选择优质尼罗罗非鱼卵细胞、优化孵化环境及人工繁殖技术外,还可通过适宜游动介质参数(pH 7.5~8.0、盐度30‰~32‰、75~100 mmol/L K+、37.8 mmol/L Ca2+、100~125mmol/L葡萄糖)激活萨罗罗非鱼精子活力,进而提高其杂交受精率。