不同稀释液对猪精子活力与保存时间的影响

通过研究不同配方的稀释液在相同的稀释倍数及同一保存条件下,对猪精子活力的影响来选择合适的猪精稀释液。试验选用灌南县家畜改良站内的4头成年公猪的精液作为材料,采用4种稀释液配方,分别进行稀释,观察精子活力和保存时间。结果表明,用葡—柠—乙液稀释的精液,在32h内精子活力平均数显著高于葡萄糖液和葡—柠液,精子存活时间也长于其它稀释液。     

牛磺酸对猪精子负压17℃液态保存效果的影响

为研究猪精子在17℃负压液态保存时牛磺酸对精子质量的影响,通过在Modena基础稀释液中添加不同剂量的牛磺酸,17℃负压环境下进行猪精液的保存,并利用迈朗全自动精子质量检测仪等仪器检测猪精子质量、精液pH值及精液中H2O2浓度,研究不同浓度牛磺酸对猪精液质量的影响。实验共分5个处理组,即基础稀释液中添加0、2.5、5、7.5、10 mmol·L-1牛磺酸,实验重复4次。结果表明,7.5 mmol·L-1的牛磺酸在精子活力,路径速度上都明显优于其他组(P0.05);添加牛磺酸后精液的pH值下降缓慢,且精液中H2O2浓度较对照组有不同程度的下降。由以上实验结果可知,从综合指标上看7.5 mmol·L-1的牛磺酸对在17℃负压环境下进行猪精液的保存是有利的,为猪人工授精生产实践中猪精子的保存提供了实验依据。     

内毒素对17℃环境下猪精子质量的影响

为探究不同浓度内毒素对17℃保存条件下猪精子质量的影响。在Modena基础稀释液中分别添加浓度为10^-7,10^-6,10^-5,10^-4 g/mL的内毒素,检测猪精子在此环境下5 d内的精子活率、活力、直线速度、路径速度和凝集指数。结果表明：10^-7 g/mL组的精子在4～5 d时,直线速度显著降低,而10^-6～10^-4 g/mL各组中的精子,各项质量指标显著降低,但各组精子的凝集指数差异不显著。猪精子对内毒素具有一定抗性,高浓度的内毒素影响精子的保存期;且内毒素不是引起精子大面积凝集的原因。研究为生产实践中猪精液的保存提供了试验依据。     

冷应激对猪精子活力的影响

我国北方建立公猪采精站后,生产上最大的隐患就是精液冷应激对精液质量产生负面影响,虽然冷应激的精液经过1h左右的缓冲是可以恢复原有活力的,但其生命力已大大减弱。对生产上使用冷应激精液配种的数据进行统计、对比、分析后发现,冷应激对精液生产的危害非常大。     

不同pH人工精浆对性逆转金鳟雄鱼精子活力的影响

研究了性逆转金鳟雄鱼（XX,伪雄鱼）精子在不同pH的人工精浆（ artificial seminal plasma,ASP）溶液中的活动情况。结果显示,随着pH的提高精子活力不断增强。伪雄鱼精子在不同ASP—pHs中培养1h后,pH9．5～10．5培养组精子活力超过正常雄鱼精子（XY）活力水平,且正常雄鱼精子与pH8．5～9．5培养组的精子活力不存在显著性差异（P〉0．05）。将金鳟伪雄鱼精液培育在pH8．5～10．5的ASP中,0～180min内,pH10．5中的精子寿命和激活比例都最佳,180min之后的精子寿命超过80s,激活比例在90％以上,显著好于其他pH组（P〈0．05）。在低温储藏12h后,正常雄鱼精子在ASP—pH10．5溶液中寿命时间最长,为（284．05±78．37）S,其次是同等稀释条件下的伪雄鱼精子寿命,其时间为（203．89±43．68）s,正常雄鱼精液原浆精子寿命最短,为（122．19±37．61）s。直接用金鳟伪雄鱼精液受精,发眼率和仔鱼上浮率仅为12．50％和8．77％,而通过pH10．5的ASP培养后,其发眼率和孵化率分别提高到了52％和49．95％。因此,在高pH的ASP中培养金鳟伪雄鱼精子能提高其活力和延长寿命。通过这种处理也能够显著的提高金鳟全雌和全雌三倍不育后代的育苗生产效率。     

不同pH人工精浆对性逆转金鳟雄鱼精子活力的影响

研究了性逆转金鳟雄鱼（XX,伪雄鱼）精子在不同pH的人工精浆（ artificial seminal plasma,ASP）溶液中的活动情况。结果显示,随着pH的提高精子活力不断增强。伪雄鱼精子在不同ASP—pHs中培养1h后,pH9．5～10．5培养组精子活力超过正常雄鱼精子（XY）活力水平,且正常雄鱼精子与pH8．5～9．5培养组的精子活力不存在显著性差异（P〉0．05）。将金鳟伪雄鱼精液培育在pH8．5～10．5的ASP中,0～180min内,pH10．5中的精子寿命和激活比例都最佳,180min之后的精子寿命超过80s,激活比例在90％以上,显著好于其他pH组（P〈0．05）。在低温储藏12h后,正常雄鱼精子在ASP—pH10．5溶液中寿命时间最长,为（284．05±78．37）S,其次是同等稀释条件下的伪雄鱼精子寿命,其时间为（203．89±43．68）s,正常雄鱼精液原浆精子寿命最短,为（122．19±37．61）s。直接用金鳟伪雄鱼精液受精,发眼率和仔鱼上浮率仅为12．50％和8．77％,而通过pH10．5的ASP培养后,其发眼率和孵化率分别提高到了52％和49．95％。因此,在高pH的ASP中培养金鳟伪雄鱼精子能提高其活力和延长寿命。通过这种处理也能够显著的提高金鳟全雌和全雌三倍不育后代的育苗生产效率。     

猪精液稀释液中不同水质对精子活力的影响

通过对猪精液稀释液采用不同水质的试验研究，结果表明：无污染的高山矿泉水和质量好的蒸馏水作稀释用水的精子存活时间最长，而用天然河水作稀释用水的精子存活时间最短。     

PAF对长白猪精子活率及顶体反应率的影响

将人工采集的长白猪精液分为六组,其中一组为空白对照组,其余五组为实验组,分别加入5、10、25、50和100ns/ml的血小板活化因子(plarelet—activating factlr,PAF),于37℃恒温水浴锅中温育5,15,25,35,45,60min。显微镜下检测精子活率,同时作精子涂片,经固定染色后测算顶体反应率(Acrosomcreactloll,AR)。结果表明,(1)、PAF浓度为10ng/ml的实验组与对照组相比,在温育15—60rain期间,精子活率都极显著提高(P<0．01);(2)、PAF浓度为5ng/ml的实验组与对照组相比,在温育25～45min期间,精子活率都极显著提高(P＜0．01);(3)PAF浓度为5、10、25和50ng/ml组的精子在温育60min内顶体反应率均极显著高于对照组(P＜0．01);(4)浓度为100ng/ml的PAF组与对照组相比,顶体反应率差异不显著(P＞0．05),表明一定浓度的PAF可提高长白猪精子的活率及顶体反应率。     

不同稀释液对猪精液4℃保存效果的影响研究

[目的]利用改进的BF-5稀释液（命名为naBF5）,开发一种4℃液态保存猪精子的方法。[方法]把猪精子在LEN、BF5和mBF5这3种稀释液中4℃条件下保存5d,按照保存天数分别检测精子的活力、顶体形态、活率和ATP浓度并进行比较。[结果]在4℃条件下保存的1～2d,精子的活率在3种稀释液中没有显著的差异;但是第3天开始,3种稀释液中的精子活率有显著差异,在mBF5中保存的精子活率显著地高于在LEN和BF5中保存的精子。第1～5天,在mBF5和B巧稀释液中保存的精子正常顶体的百分率高于LEN稀释液中保存的精予;并且,在4℃保存5d后,在mBF5稀释液中保存的精子正常顶体的百分率要高于在BF5中保存的精子。在4℃条件下保存的第1～5天,mBF5稀释液中的精子活力百分率高于LEN和BF5稀释液保存的精子活力。在3种稀释液中,保存的第1～5天,精子活力的百分率都持续地降低。保存的第1～5天,mBF5稀释液中保存的精子ATP浓度比LEN和BF5稀释液中保存的高。保存5d之后3种稀释液中精子ATP浓度都迅速下降。[结论]在4℃条件下保存5d,与LEN和BF5稀释液相比,保存在mBF5稀释液中的精子表现出较高的活力、正常的顶体百分率、活率和ATP浓度。     

钙离子对猪精子蛋白酪氨酸磷酸化及活力影响

研究主要探究钙离子(Ca2+)对猪精子蛋白酪氨酸磷酸化及活力的作用。利用计算机辅助精子活力分析仪(CASA)检测、蛋白免疫印迹测定不同Ca2+浓度对精子活力指标及蛋白酪氨酸磷酸化水平的影响,并对精子样品的酪氨酸磷酸化蛋白的分布情况进行观察。结果显示,当Ca2+浓度≤1.0mmol/L时,精子活力和蛋白酪氨酸磷酸化水平增高;然而,当Ca2+浓度≥3.0mmol/L时,则明显抑制精子活力和蛋白酪氨酸磷酸化水平,尤其分子量约为27和34kDa的高丰度蛋白磷酸化程度明显降低(P0.05)。高浓度Ca2+(4.0mmol/L)明显抑制鞭毛处蛋白酪氨酸磷酸化。因此,细胞外钙离子对猪精子活力和蛋白磷酸化起到重要调节作用,低浓度Ca2+促进精子活力及蛋白酪氨酸磷酸化,高浓度Ca2+(≥3.0mmol/L)抑制精子活力及蛋白酪氨酸磷酸化。本研究初步明确了Ca2+浓度对猪精子蛋白磷酸化及精子活力的影响,为进一步研究精子获能提供参考。     

游离氨基酸对褐鳟和金鳟精子活力的影响

为探究体外储存条件下游离氨基酸(FAA)对鳟鱼精子活力的影响,分析褐鳟(Salmo trutta)和金鳟(Oncorhynchus mykiss)精液中FAA组成,通过向人工精液保存液(ASP)中添加不同种类氨基酸孵育褐鳟和金鳟精子,孵育1、24、48、72和96 h后,研究FAA对精子活力的影响(定义为孵育后可激活活力)。结果表明,褐鳟精浆FAA主要为缬氨酸、亮氨酸、精氨酸、异亮氨酸、赖氨酸、丝氨酸及甲硫氨酸,其精子FAA主要为天冬氨酸、精氨酸、谷氨酸及丝氨酸。金鳟精浆和精子中主要FAA为精氨酸。当精子与精浆孵育48 h后,两种鱼的氨基酸含量与组成模式均发生变化,发生新陈代谢。丝氨酸、异亮氨酸及甲硫氨酸+异亮氨酸对两种鱼的精子活力有积极影响,在一定时间内能够通过添加可FAA延续精子活力,解决鳟鱼雌雄成熟不同步问题,提高受精效果,对鳟鱼苗种繁育及养殖具有重要意义。     

氯化钠浓度对美洲鲥鱼精子活力的影响

观察了不同氯化钠浓度对美洲鲥鱼精子活力的影响,结果表明:氯化钠浓度为0~0.8%时,精子快速运动时间无显著差异。氯化钠浓度为0.9%(生理盐水)时,精子运动时间和寿命最长。氯化钠浓度为1.0%时,精子活力受到抑制,运动能力和寿命下降。氯化钠浓度为1.4%~4.2%时,精子呈不活动状态,并失去运动能力。     

不同稀释液对猪精液常温保存效果的研究

选取杜洛克公猪精液作为试验材料,比较5种稀释液对猪精液的保存效果,结果表明:用葡萄糖—柠檬酸稀释液,所保存精液的pH值、精子活率、精子畸形率等品质指标表现良好,且稀释液的成本低廉,自配简单易行,适于农村养猪户推行;基层常用的葡萄糖稀释液保存3 d时的精子活率性状表现不佳,仅适合于现配现用。BL─液(美国)稀释液的保存效果也比较好,但该稀释液组分复杂,配制较难,成本也较高,可在规模养猪场中推广。     

公鸡精子冷冻保存后活率和顶体破损率的相关关系

用BPSE为稀释液,以终浓度为11%(V/V)的甘油作低温保护剂,冷冻洪山公鸡精液。测定了细管型和颗粒型2种类型的冷冻精液解冻后的精子存活率和顶体破损率,并对冻后存活率和顶体破损率进行了相关和回归处理。测定结果表明,细管型冷冻精液解冻后的精子存活率和顶体破损率分别为0.451±0.056和0.392±0.054(n=20)。颗粒型冷冻精液解冻后的精子存活率和顶体破损率分别为0.339±0.040和0.543±0.052(n=20)。前者解冻后的活率极显著高于后者,而顶体破损率则极显著低于后者。相关分析结果表明,细管型冷冻精液解冻后精子存活率与顶体破损率之间的回归方程为y=0.7293-0.7126x,相关系数r为-0.697(P<0.01),而颗粒型冷冻精液解冻后的精子存活率与顶体破损率之间的相关系数为-0.0625(P>0.05),表明两者之间无显著相关。本研究为输入相等数量的活精子时细管型冷冻精液受精率显著高于颗粒型冷冻精液的试验结果提供了一定的理论解释,也为将保存家畜冷冻精液的方法应用于家禽方面作了有益的探索。     

杜洛克猪精子体外4℃保存过程中活力参数及蛋白修饰变化

为探究体外4℃保存对猪精子活力参数及蛋白修饰的影响,使用猪精液保存稀释液体外4℃保存猪精子7d,利用计算机辅助精子活力分析仪(CASA)分析测定新鲜精液和保存7d后精液的精子活力指标;使用相应试剂盒检测精子中ATP水平及甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)活性;应用蛋白免疫印迹(WB)技术,比较新鲜精液在4℃保存7d后蛋白翻译后修饰水平的变化。结果表明,猪精液体外4℃保存7d后,精子活力参数呈现下降趋势。其中,运动力(MOT)、快速前进性运动速率(PRO)、平均路径速度(VAP)、平均直线运动速率(VSL)与新鲜精液相比分别降低59.99%、37.03%、12.34%、18.97%,且差异显著(P0.05);发现精子中ATP水平和GAPDH酶活性在4℃保存7d后显著降低(P0.05),即随着体外保存时间的延长,精子细胞内的能量供应不足,代谢水平降低;猪精液4℃保存7d后精子蛋白的磷酸化和酰化修饰明显减弱,这一结果与精子活力、代谢酶活性结果的变化趋势一致。研究结果证实,在体外4℃保存条件下,可能因精子细胞内能量代谢受阻而影响了精子活力及蛋白修饰水平。因此,本研究无论对于丰富精子的能量代谢基础理论,还是对于延长猪精液低温保存时间,提高人工授精效率,均具有重要的理论和实践意义。     

稀释液配方和稀释倍数对猪精子活力及运动参数的影响

为研究稀释液配方和稀释倍数对猪精子活力及运动参数的影响,筛选了5个稀释液配方,设计了6个稀释倍数,采用CASA系统检测精子活力、活动率、运动速度及运动方式等参数指标,利用SPSS 19.0软件中GLM程序进行分析表明,5个配方精子活力(PR)或精子活动率(PR+NP)中,F_2最高,F_3次之,但两者间差异不显著,与其他3个配方比较差异极显著;精子速度方面,同样以F_2最快,仍与F_3差异不显著,与其他配方差异显著或极显著;精子运动形式参数方面,WOB指标中,5个配方间差异均不显著;其他指标,F_2和F_3较高。稀释倍数上,就PR、PR+NP而言,两者均随稀释倍数的增大而表现出先上升后下降的趋势。因此,稀释液配方中,经典的猪稀释液配方为最优,确定配方为:葡萄糖5.0 g、柠檬酸钠0.3 g、乙二胺四乙酸二钠(EDTA-2Na);稀释倍数PR、PR+NP中,D_(0.5)最优,但从经济效益来看,D_1为最佳。     

温度和保存时间对猪精子顶体酶活性的影响

分析了发展地方金融对推进安徽跨越式发展的重要意义，总结了当前安徽地方金融发展取得的成效，剖析了安徽地方金融发展中存在的一些问题，提出了制定安徽地方金融业中长期规划、推进合肥区域性金融中心建设、组建地方性金融控股公司、完善农村金融服务体系、大力发展资本市场等对策措施。     

温度和保存时间对猪精子顶体酶活性的影响

为了探讨温度和液相保存时间对猪精子顶体酶活性的影响,采用紫外分光光度计检测猪精子顶体酶活性。结果显示:(1)鲜精、冷休克和热休克每106精子顶体酶活性分别为5.38、5.20和5.16 mIU,差异不显著(P>0.05)。(2)鲜精在4、17、25、30、37和39℃时每106精子顶体酶活性分别为4.29、5.01、5.03、5.17、4.78和4.61 mIU,随着温度的升高精子顶体酶活性逐渐提高,当温度达到30℃时达到最高,且4℃和30℃时差异显著(P<0.05)。(3)液相精液在4℃保存超过1 d时精子顶体蛋白酶活性显著下降(P<0.05);在17、25和39℃保存超过2 d时顶体酶活性显著下降(P<0.05),且在17℃保存效果较好。结论是猪精子顶体蛋白酶活性受温度的影响,在17℃的条件下3 d内保存的猪精子顶体酶活性最佳。