河北保定地区羊多头蚴和犬多头带绦虫的调查与鉴定

为了解河北省山羊多头蚴和犬多头带绦虫的感染情况,本研究对河北省涞源县、阜平县和易县的山羊和犬进行绦蚴虫感染情况调查,并通过PCR技术对多头蚴与多头带绦虫分离株线粒体pnad1基因部分序列进行扩增与分析,确定多头蚴和多头带绦虫之间的种系发育关系。结果显示,调查区域山羊多头蚴与犬多头带绦虫感染率分别为2.38%和15.33%,通过DNAStar软件分析,所获得多头蚴和多头带绦虫分离株分别与四川多头带绦虫分离株的相似性分别为98.9%~99.5%和99.5%~99.8%,确定羊多头蚴为犬多头带绦虫的幼虫。     

多头带绦虫湖南分离株核糖体18S基因系统进化分析

为阐明多头带绦虫湖南分离株核糖体小亚基(18S rRNA)基因序列的遗传变异情况,并用18S序列构建多头带绦虫与其他带科绦虫的种群遗传关系。利用PCR技术扩增多头带绦虫的18S基因,应用Clustal X1.81程序对序列进行比对,再利用Mega4.0程序进行NJ法绘制种系发育树。结果显示:所获得的18S基因序列长度一致,均为1 080 bp,基因序列存在一定的遗传差异。种系发育分析结果显示,所有的多头带绦虫分离株与已知多头带绦虫位于同一分支。多头带绦虫18S基因序列种内相对保守,种间差异较大,可以作为种间遗传变异研究的标记,从而为多头带绦虫的群体遗传研究奠定基础。     

基于线粒体cox1和Cyt b基因对四川地区多头带绦虫的种群遗传多样性研究

为研究四川地区多头带绦虫的种群遗传多样性和系统发生关系,用线粒体cox1基因和Cyt b基因全序列分析了20株四川山羊源多头蚴(11株寄生于脑,9株寄生于肌间)的遗传变异,并构建了系统发育树。结果显示:20株多头蚴cox1和Cyt b基因全序列长度分别为1 623和1 068bp,分别有59个和9个变异位点,其碱基变异率分别为0.1%~2.5%和0.1%~0.7%;分别检测到17个和6个单倍型,总的单倍型多样性分别为0.968±0.033和0.737±0.068,核苷酸多样性分别为0.005 98±0.001 33和0.003 06±0.000 79,平均遗传距离分别为0.006和0.003。构建的系统进化树均显示来源于脑部和肌间的20株四川山羊源多头蚴与多头带绦虫同在一个支系,均为多头带绦虫,且多头带绦虫四川分离株与伊朗、土耳其分离株亲缘关系较近,而与中国甘肃、中国广州、意大利分离株亲缘关系较远。研究结果表明线粒体cox1和Cyt b基因均可作为检测多头带绦虫种群遗传多样性的有效分子标记,且Cyt b基因的多样性水平低于cox1基因。     

山羊脑多头蚴形态学与cox1基因鉴定

为鉴定山羊脑多头蚴,通过对虫体进行形态学观察并采用PCR扩增虫体线粒体细胞色素C氧化酶亚基1(cox1)基因,将有效序列进行NCBI-Blast在线比对,利用MEGA6.0构建遗传系统进化树。结果显示,山羊脑多头蚴cox1序列长度为446 bp,与多头带绦虫同源性达100%,系统进化分析显示分离株与多头带绦虫位于同一分支。结合形态学观察结果表明,山羊所感染的多头蚴属于多头带绦虫幼虫——脑多头蚴,cox1基因可作为鉴定多头带绦虫的有效分子标记,研究结果为山羊脑多头蚴的分子诊断提供参考依据。     

四川省山羊多头蚴线粒体cox2基因序列测定及种系发育分析

应用线粒体细胞色素氧化酶第Ⅱ亚基(cox2)基因作为分子标记,对四川省12个山羊源多头蚴样品的cox2基因部分序列(pcox2)进行PCR扩增,分析其种内变异并重建系统进化树。序列分析结果显示所获得的pcox2序列长度为531 bp,共检测到8个变异位点,变异率为0~1.3%。基于pcox2序列构建的系统进化树显示多头蚴四川分离株与已知多头带绦虫位于同一分支,且脑源和肌间多头蚴聚在一起,均为多头带绦虫。结果表明,多头蚴cox2基因种内存在一定的遗传差异,但种内相对保守,与带属其他绦虫种间差异较大,故可作为多头带绦虫种间遗传变异研究的分子标记。这一研究结果也为山羊多头蚴病的分子诊断奠定了基础。     

多头带绦虫蛋白激酶A催化亚基基因的克隆及原核表达

为鉴定多头带绦虫蛋白激酶A催化亚基（TmPKA-C）基因作为诊断抗原的潜能,本试验以多头带绦虫成虫RNA为模板,利用RT-PCR扩增TmPKA-C基因。将TmPKA-C基因片段连接至pET-30a原核表达载体进行原核表达,然后利用Western blotting和间接ELISA分析该蛋白的反应原性。结果表明,TmPKA-C基因开放阅读框的长度为1 032 bp,可编码343个氨基酸。TmPKA-C基因的表达产物主要以包涵体的形式存在,重组蛋白的分子质量大小约42 ku。Western blotting结果表明,该重组蛋白既能与自然感染脑多头蚴的绵羊血清发生特异性反应,又能与人工感染脑多头蚴不同时间段的绵羊血清发生特异性反应,表明该重组蛋白具有良好的反应原性。间接ELISA分析结果表明,脑多头蚴绵羊血清能与重组蛋白发生特异性反应,进一步证明该重组蛋白的反应原性良好。本研究为筛选脑多头蚴病诊断新抗原奠定了基础。     

多头带绦虫dUTPase基因的原核表达、组织定位及酶学活性分析

探讨多头带绦虫脱氧尿苷三磷酸酶(Tm-dUTPase)的基因特征,并初步分析Tm-dUTPase的酶学活性。通过原核表达,得到重组Tm-dUTPase蛋白,并对其进行Western blot分析、免疫荧光定位及酶学活性分析。序列分析结果显示,Tm-dUTPase基因ORF框为447bp,编码148个氨基酸,预测的蛋白质分子大小为16.39ku,等电点为6.263;与猪囊尾蚴和豆状囊尾蚴dUTPase基因的氨基酸序列相似性分别为97%和91%。原核表达的TmdUTPase为可溶性蛋白,纯化后的蛋白质质量浓度为0.907mg·mL~(-1),Western blot分析显示,该蛋白质能够被山羊脑多头蚴阳性血清所识别,具有较强的反应原性。免疫荧光定位显示Tm-dUTPase主要分布于多头带绦虫成虫的体内实质区,同时广泛分布于多头带绦虫幼虫(脑多头蚴)的头节和包囊囊壁外层。酶学活性试验测得重组Tm-dUTPase的比活力为986.29U·mg~(-1),EDTA能够抑制Tm-dUTPase活性,而金属离子Mg~(2+)、Zn~(2+)、Cu~(2+)能够增强Tm-dUTPase活性。上述结果为进一步研究Tm-dUTPase基因的生物学功能奠定了基础。     

青海牧区藏犬寄生虫病流行病学调查研究

采用剖检法与粪检法进行了犬寄生虫病流行病学调查与药效试验,查明了青海牧区藏犬寄生虫感染现状。结果:被调查犬感染的寄生虫有犬弓首蛔虫、狮弓蛔虫、犬钩虫、狐鞭虫、细粒棘球绦虫、多头带绦虫、泡状带绦虫、豆状带绦虫、犬复殖孔绦虫等9种。依据感染率和感染强度,犬弓首蛔虫、狮弓蛔虫、狐鞭虫、细粒棘球绦虫、泡状带绦虫、多头带绦虫为优势虫种;未检出体外寄生虫。     

羊多头蚴的诊断与治疗

羊多头蚴病是由于多头带绦虫的幼虫即脑多头蚴寄生在羊的脑内,引起神经症状,甚至死亡的一种寄生虫病。1病原脑多头蚴,又称为脑包虫,属于绦虫类,是多头带绦虫的幼虫,呈现囊泡状,有的呈现豌豆粒大小,随着长到鸡蛋大小,囊内可以有一百多个原头蚴,一般有芝麻大小,原头蚴直径2-3mm。寄生在羊的脑内,是羊发生疾病的源头。     

青海牦牛脑多头蚴的线粒体cytb和nad4基因的序列测定及种系发育分析

本研究旨在鉴定牦牛疑似脑多头蚴病的病原,通过PCR分子生物学方法扩增了囊泡状样品的cytb基因和nad4基因序列,并进行分子鉴定与系统发育分析。结果:经分子鉴定,病原确诊为脑多头蚴;克隆的cytb和nad4基因序列分别与GenBank上的多头带绦虫参考序列的同源性达到98.7%和99.2%以上;利用GenBank中其他带属绦虫的cytb和nad4基因序列构建系统发育树,均与已鉴定的多头带绦虫聚在同一支上,但并未形成微小分支,与其它绦虫所属分支相距较远。本研究初步分析了脑多头蚴青海分离株与其他种属之间的系统发育关系,丰富了脑多头蚴的群体遗传学研究资料,为牦牛脑多头蚴病的诊断研究等提供科学参考。     

不同锌水平对1～21日龄肉仔鸡生长性能的影响

选用384只1日龄AA肉用雏,公母各半,按体重随机分成4个处理组,每个处理组设8个重复,每个重复12只鸡,研究在玉米-豆粕型基础日粮中添加锌水平分别为40mg/kg、80mg/kg、120mg/kg和160mg/kg对1~21日龄肉仔鸡生长性能的影响。结果表明:不同锌水平间各个日龄对肉仔鸡体增重、平均日增重、耗料量的影响均差异不显著(P>0.05),只有对仔鸡料重比的影响在7日龄差异极显著(P<0.01),14日龄时差异显著(P<0.05),21日龄时差异不显著(P>0.05);不同性别间对肉仔鸡体增重、平均日增重在7日龄和21日龄时差异极显著(P<0.01),14日龄时差异显著(P<0.05),但对仔鸡耗料量的影响在7日龄时差异不显著(P>0.05),14日龄时差异显著(P<0.05),21日龄时差异极显著(P<0.01);对料重比的影响在7日龄时差异极显著(P<0.01),14日龄和21日龄时差异不显著(P>0.05)。公鸡平均日增重、体增重、耗料重均大于母鸡,只有公鸡的料重比总体小于母鸡。研究结果表明,当锌水平在80~120mg/kg时能更好的促进肉仔鸡的生长发育。     

甘肃省临洮县畜牧业发展现状及对策研究

阐述了甘肃省临洮县畜牧业发展现状,指出其存在的问题,并提出了对策,以期促进临洮县畜牧业的发展。     

基于隶属函数法和GGE双标图的饲草型小黑麦种质适应性评价

为筛选甘肃省不同地区适宜种植的小黑麦品种(系)和甘肃省最适宜种植小黑麦的试验点,以4个小黑麦种质(新品系P₂,新品系P₄,石大1号,中饲1048)为材料,于2014-2015年研究了上述种质在甘肃省不同试验点(临洮,玛曲,夏河,合作,肃南县马蹄乡和肃南县康乐乡)开花期的干草产量、营养价值(粗蛋白含量,中性洗涤纤维含量,酸性洗涤纤维含量)以及干物质消化率,其中临洮点有灌溉条件,其他试点无灌溉条件,为雨养区。利用方差分析、隶属函数法和GGE(基因型和基因与环境互作效应)双标图法,对测定数据进行了分析,得到以下结果: 1)参试的4个小黑麦种质中,品系P₂的干草产量最高(12.94 t·hm^-2),营养评价值最高(0.67),在临洮点和玛曲点具有广阔推广利用前景;品系P₄的干草产量较高(10.90 t·hm^-2),营养评价值较高(0.5);石大1号和中饲1048由于营养评价值低或干草产量低,在甘肃省6个试验点表现均不理想,不适合种植。2)6个试点中,临洮点小黑麦的干草产量(14.13 t·hm^-2)较高(位居第2),营养评价值(0.51)最高;玛曲点小黑麦的干草产量(14.07 t·hm^-2)较高(位居第3),营养评价值(0.50)较高(位居第2),其他4个试点小黑麦的干草产量和营养品质均较差;综合6个试验点小黑麦的干草产量和营养评价值,临洮和玛曲为种植小黑麦最理想的区域。研究将为评价小黑麦种质草产量和营养品质表现及适宜种植区域提供了简便有效的分析手段,可以为小黑麦种质鉴定与推广提供理论依据。     

甘肃省县域特色农业发展探求--关于临洮县花卉产业发展现状及对策的调查

在县域经济发展的过程中,许多地方政府提出了以特色农业带动经济增长的新思路,并取得了良好的效果。西部大开发使甘肃省农业发展面临新的机遇和挑战,甘肃省临洮县针对自身优势,将花卉产业作为自己的一项特色农业大力发展,通过对临洮县发展花卉产业的优势及其发展现状进行分析,并提出了促进临洮花卉特色产业进一步发展的对策及建议。     

四川某奶牛场粪样中寄生虫的调查研究

为了解四川某奶牛场奶牛寄生虫感染情况,进而制订合理有效的防治措施,本调查对该场奶牛粪样做了寄生虫检查。采集了犊牛、育成牛、泌乳牛的新鲜粪样共90份,分别采用饱和盐水漂浮法、离心沉淀法和斯陶尔氏计数法对粪样中虫卵进行定性检查和定量检查。结果显示,在粪样中检出了球虫卵囊、线虫卵、吸虫卵和绦虫卵,其中球虫卵囊的阳性率为14.44%(13/90),线虫卵的阳性率为57.78%(52/90),绦虫卵和吸虫卵只在泌乳牛的粪样中检出,泌乳牛阳性率分别为2%(1/50)、12%(6/50)。该奶牛场混合感染率为33.33%(18/54)。结果表明,该奶牛场寄生虫感染普遍,总感染率为60%(54/90),主要为线虫,其次是球虫和吸虫,混合感染情况普遍。     

林草复合经营试验示范初报

结合在临洮县唐家沟和中南部高寒阴湿贫困山区试验，示范工作的实践，对林草复合经营的具体措施、途径、系统功能进行了总结，并提出相应的对策。     

甘肃省紫花苜蓿地方类型抗旱等级分类的研究

对甘肃省紫花苜蓿地方类型的２１个抗旱性鉴定指标进行了实验测定,根据这些指标值,应用系统聚类的方法进行分级聚类,使其归属于５个抗旱等级。不同抗旱等级分类的结果为：强抗旱性：民勤苜蓿、环县苜蓿、会宁苜蓿、榆中苜蓿、甘谷苜蓿;抗旱性：定西苜蓿;中抗旱性：通渭苜蓿、镇原苜蓿、秦安苜蓿、临洮苜蓿、庆阳苜蓿,宁县苜蓿;弱抗旱性：礼县苜蓿;最弱抗旱性：天水苜蓿。     

牛支原体临洮分离株NOX-1的克隆表达、酶学活性及其亚细胞定位研究

为研究牛支原体(M. bovis)临洮分离株(LT strain)NOX-1基因特征表达产物的酶活性,及其在细胞中的具体存在部位,参照GenBank中M. bovis NOX-1HuBei株NOX-1基因序列(GenBank登录号:NC015725.1)设计引物,应用PCR扩增M.bovis临洮株的NOX-1基因,在完成测序后构建NOX-1基因原核表达载体pET-NOX-1,并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后表达。表达产物纯化后进行酶活测定并免疫新西兰兔,制备多克隆抗体,继而应用Western blot及间接ELISA对NOX-1在M. bovis内的分布进行初步定位。结果显示,M. bovis临洮株NOX-1基因全长1365 bp,重组质粒经IPTG诱导在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,重组蛋白His-NOX-1的分子量约为50 kDa;重组蛋白酶促反应最适酶促温度为30℃、pH为7.5,双倒数法求得重组蛋白Km和Vmax分别为256.41μmol/L、34.25μmol/(L·min);Western blot及间接ELISA结果表明His-NOX-1在M. bovis细胞膜上和细胞浆中均有分布且胞浆含量较高。本研究结果为进一步研究M. bovisNOX-1的生物学功能奠定了一定的基础。     

Prokaryotic Expression of NOX2 of Mycoplasma bovis and Its Adherence Characterization

To explore the biological function of NADH oxidase NOX2 from Mycoplasma bovis (Mb), according to the nox2 gene sequence of Mb strain Hubei (GenBank.CP002513.1), the primers were designed and the nox2 gene of Mb strain Lintao was amplified by PCR. Based on sequencing and gene optimization, the prokaryotic expression vector pET-nox2 was constructed, and was expressed in Escherichia coli Rosetta (DE3). Subsequently, the analysis of the enzymatic activity and the immunogenicity of recombinant proteins rMbNOX2 were completed. And then the subcellular localization of NOX2, complement-dependent bactericidal activity of anti-rMbNOX2 serum, and as well as inhibition effect of anti-rMbNOX2 serum to Mb adhering to host cells was determined. The results showed that the CDS sequence of the nox2 gene of Mb Lintao strain was 1 350 bp, and showed 99.93% homology with nox2 gene of all Mb except Mb JF4278 strain in GenBank. The result of SDS-PAGE displayed the optimized nox2 was successfully expressed in E. coli. The recombinant protein rMbNOX2 was about 67 ku. Enzyme activity analysis showed that the purified rMbNOX2 had good enzymatic activity. The results of ELISA and Western blot showed that the rMbNOX2 has excellent immunogenicity, and the Mb NOX2 distribute both in the cell membrane and cytoplasm, but it's more distributed in the cytoplasm. Complement-dependent mycoplasmacidal assay and adherence inhibition assay confirmed anti-rMbNOX2 serum has distinct complement-dependent mycoplasmacidal activity and can also effectively inhibit the adherence of Mb to host cells. The results of this study lay a foundation for further study on the biological function of Mb NOX2.     

牛支原体NOX2的原核表达及黏附特性

旨在探究牛支原体（Mycoplasma bovis,Mb）NADH氧化酶NOX2的生物学功能,本研究参照GenBank中Mb湖北分离株（Mb Hubei-1 strain）nox2基因序列设计引物,应用PCR扩增获得Mb临洮分离株的nox2基因,在测序及序列优化的基础上,构建原核表达载体pET-nox2,并在大肠杆菌Rosetta（DE3）中诱导表达,进而对表达产物rMbNOX2的酶促活性、免疫原性,NOX2在Mb内的分布,rMbNOX2抗血清的补体介导体外杀菌活性和对Mb黏附宿主细胞的抑制活性进行了分析。结果表明,Mb临洮株nox2基因全长1 350 bp,与GenBank中已知序列的Mb nox2基因序列比较,除Mb JF4278株相似性为97.93%外,其余均为99.93%。SDS-PAGE结果显示,优化的nox2基因在大肠杆菌中成功表达,重组蛋白rMbNOX2相对分子质量约为67 ku,且具有良好的酶促活性;ELISA与Western blot结果显示,rMbNOX2具有良好的免疫原性,且Mb NOX2在细胞浆中的分布多于细胞膜;补体介导的体外杀菌试验及黏附抑制试验证实,rMbNOX2抗血清具有明显的补体介导杀支原体活性,并可有效抑制Mb对宿主细胞的黏附。本研究为深入探讨Mb NOX2生物学功能奠定了基础。