Soleris微生物快速检测系统在巴氏杀菌乳中的应用验证

[目的]为了验证Soleris微生物快速检测系统对巴氏杀菌乳中大肠菌群快速检测的时效性,以提高公司巴氏杀菌乳产品的出货时效。[方法]对Soleris微生物快速检测系统和传统国标平板计数法检验巴氏杀菌乳中的大肠菌群的检测结果进行对比验证。[结果]通过实验得出Soleris微生物快速检测系统只需要13.5 h即可出结果,比传统国标方法检出时间大大缩短。[结论]在适宜的条件下,当产品中含有大肠菌群阳性样时,Soleris微生物快速检测系统均能在较短的时间内检出,产品中大肠菌群含菌量越大,检测时间越短,并且与传统国标平板计数法具有良好的一致性,是一种可行的大肠菌群检测方法。     

Soleris检测技术在生乳细菌总数快速测定中的应用

通过使用Soleris仪器,建立了一种将实时光电微生物检测技术用于细菌总数快速测定的方法。实验得到了生乳细菌总数标准曲线Log CFU=7.634-0.472×DT(R2=-0.93);并用国标平板计数法对标准曲线进行了验证,结果表明Soleris法测得的结果与平板计数结果之间没有显著性差异,P0.05,重复性实验结果RSD值均小于5%。与平板计数法相比,该方法具有检测时间短、操作简单快捷等优点,可使检测时间缩短至少38 h,是一种可行的生乳细菌总数检测方法。     

Soleris微生物实时光电法与平板计数法测定生乳中菌落总数的比较研究

建立Soleris微生物实时光电检测法检测生乳中菌落总数的快速测定方法,并将该方法与国标的平板计数法进行比较。结果表明：Soleris法检测生乳中菌落总数的标准曲线为y=－0.651 5x＋8.263 9（y为菌落总数（lg（CFU/mL））,x为胶体栓变色时间（h））,相关系数R2=－0.939 6,表明标准曲线相关性良好;重复性实验结果的相对标准偏差均小于5%;Soleris法与平板计数法测定结果的比较表明,2 种方法之间没有显著性差异（P＞0.05）。在本研究的实验条件下,Soleris法检测生乳中     

一种快速定量检测氨基酸脱羧酶活力的比色方法及其应用

本试验旨在探究一种快速定量检测氨基酸脱羧酶活力的比色方法。试验采用脱羧酶标准品进行标准曲线的制备,再用待测样品的吸光度值和标准曲线计算样品氨基酸脱羧酶活力。采用本试验建立的检测氨基酸脱羧酶活力的比色方法,对猪结肠微生物和脑组织样品进行氨基酸脱羧酶活力的测定;通过对未知样品的氨基酸脱羧酶活力进行测定,验证该方法的准确性。结果显示:以酪氨酸脱羧酶标准品建立了线性关系较好的氨基酸脱羧酶活力标准曲线:y=0.478 9x+0.112 6,R~2=0.998 0。不同氨基酸脱羧酶活力与构建的酪氨酸脱羧酶活力标准曲线相似度高,说明本方法对多种氨基酸脱羧酶活力有广泛的适用性。采用本试验建立的比色方法快速地测定出了猪结肠微生物和脑组织中氨基酸脱羧酶活力;并且,使用该方法测得的未知样品的氨基酸脱羧酶活力落入已构建的标准曲线范围中,说明本方法的准确性较高。由结果可知,本试验建立的比色方法是检测氨基酸脱羧酶活力的一种快速方法,成本低廉,操作简单,对仪器要求不高,方法可靠,适用于多种样品中氨基酸脱羧酶活力的测定,可为研究动物组织、微生物培养液、细胞培养以及血液样本中的氨基酸脱羧酶活力提供有效的测定方法。     

实时光电微生物检测技术在乳品质控中的应用

对酸奶中的霉菌酵母菌同时采用实时光电微生物检测系统与国标法进行检测,分析比较两种检测方法所得的检测数据.本实验利用实时光电微生物检测系统的霉菌酵母检测试剂瓶对市售酸奶及阳性添加样品采用半定量的检测方法进行快速检测,能快速地检测到目标菌存在,继而给系统提前预警.结果表明,当霉菌酵母菌含量在10～3.5×105CFU/mL时,实时光电微生物检测方法在1.8～33h内预警.当平板计数法的检测结果小于10CFU/mL时,实时光电微生物检测方法的检测时间均大于33h,在仪器设置运行48h内未出现预警现象.实时光电微生物检测技术与国标平板法两种检测方法的检测结果相当吻合.应用实时光电微生物检测技术能快速便捷,对酸奶产品中霉菌酵母菌进行监测,其检测速度和灵敏度均能满足工厂实验室的快速筛选检测,还利于产品的关键控制点的监测.     

玉米皮固态发酵菌体蛋白饲料菌群qPCR检测方法的建立

试验旨在建立玉米皮固态发酵菌体蛋白饲料菌群qPCR检测方法。试验以玉米皮为发酵底物，枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌和产朊假丝酵母菌为发酵菌剂制备玉米皮菌体蛋白饲料，采用qPCR法定量测定固态发酵玉米皮菌体蛋白饲料中的菌群数量变化，并与平板计数法进行比较。结果显示，试验建立的枯草芽孢杆菌、酿酒酵母菌和产朊假丝酵母菌的标准曲线符合SYBR Green qPCR的检测要求，两种方式检测玉米皮固态发酵菌种数量变化趋势相同。将两种方法所得结果的数据进行线性拟合，得出两者间的线性关系y=1.301x-5.139、y=2.257x-8.431和y=2.941x-12.940，任取3批玉米皮菌体蛋白饲料进行验证试验，两者之间相似度达94%以上，表明本方法可以用于玉米皮固态发酵菌体蛋白饲料中菌群的定量检测。研究表明，试验建立的qPCR技术在玉米皮固态发酵菌种数量变化监测应用中，克服了平板计数法时间滞后和两种酵母菌不好区分等缺点。     

对生活饮用水细菌总数、总大肠菌群的检测

为了提高生活饮用水细菌总数检测和总大肠菌群生化鉴别水平,并顺利通过中国国家认证认可监督管理委员会组织的能力验证考核,上海建科检验微生物实验室从人、机、料、法、环、测几个方面着手,制定了相应的检测实施方案。不同的检测员根据考核盲样各自独立操作,并在细菌总数结果统计时进行互相验证计数;在总大肠菌群生化鉴别时,使用两种不同的生化试验来验证。实践证明：采用此方案能够准确检测生活饮用水细菌总数和总大肠菌群,并达到能力验证考核要求。     

荧光定量PCR检测2型猪圆环病毒方法的建立

通过克隆2型猪圆环病毒（PCV2）的开放阅读框2（0RF2）基因编码其核衣壳蛋白（Cap）的一段靶序列,构建重组质粒作为标准阳性模板.根据GenBank中的靶序列设计一对引物和一条TaqMan探针.对PCR反应条件优化后,对构建的标准阳性模板定量,然后1 0＆#215;倍比稀释进行荧光定量PCR（qPCR）扩增并制作标准曲线,初步建立了PCV2检测的qPCR方法.结果表明,该方法检测灵敏度可达1.0＆#215;102拷贝/μ L,线性范围为101 ～ 109,达9个数量级,并且具有很好的特异性.对起始浓度为1.0＆#215;108、1.0＆#215; 106、1.0＆#215;104拷贝/μL的标准品的最终实际测得CT均值分别为12.77、19.72和26.89;变异系数分别为0.25％、0.10％和0.13％,均小于1％,说明此方法具有良好的准确性和重复性.     

鸡肌肉组织中盐霉素残留的微生物法检测研究

建立了鸡肌肉组织中盐霉素残留的微生物检测方法。采用枯草芽孢杆菌作为工作菌摸索条件,制备标准曲线,测定最低检测限以及回收率。结果表明:在磷酸盐缓冲液中制备五组工作曲线,其变异系数为5.1%,相关系数为0.9923,最低检测限为0.25μg/ml;在肌肉组织中制备五组工作曲线,其变异系数为6.0%,说明本方法重现性较好,相关系数为0.9981,说明本实验有良好的线形关系,最低检测限为0.4μg/g,低于国标规定的肌肉组织中盐霉素的最高残留限量0.6μg/g;方法平均回收率为75.9%。研究表明采用枯草芽孢杆菌检测肌肉组织中盐霉素残留,其灵敏度高、可靠、快速、简便、易推广。     

牛乳中未变性乳清蛋白的快速检测方法研究

采用微滤法结合双缩脲比色法测定牛乳中未变性乳清蛋白含量，并测定该方法的准确度，精密度及回收率。标准曲线回归方程：y=0．0146x＋0．0093，R^2=0．9955，检测精密度为1．34％-2．12％，回收率为96．16％-109．15％，平均101．63％。本研究表明用双缩脲法快速测定牛乳中的未变性乳清蛋白操作简便，准确快速，可用于大批量样品的检测。     

凯氏定氮法检测乳制品中蛋白质含量的优化方法

[目的]优化全自动凯氏定氮法检测乳制品中蛋白质含量的检测条件。[方法]采用凯氏定氮法检测乳制品中蛋白质含量,通过对比不同称样量、消化时间及消化后冷却时间对检测结果的影响,选择最佳参数条件,实现对全自动凯氏定氮法检测方法的优化,并提高检测效率。[结果]混合均匀的乳制品,一定范围内称样量对结果的影响不大,精密度符合国标要求,但是灭菌乳、调制乳、饮料称样量增多,精密度对应越好,发酵乳则称样过多后精密度有所下降;在230 ℃消化30 min,420 ℃时消化80 min,可消化完全,精密度可以控制在1%以内;消化后样品及时冷却,48 h内,对检测结果没有显著差异。[结论]通过本试验证明,使用凯氏定氮法检测乳制品中蛋白质含量时,调整称样量、消化时间、冷却时间,对检测结果没有显著影响。     

微生物试管法测定叶酸含量的方法研究

叶酸是鼠李糖乳杆菌生长的必需营养素,微生物法检测叶酸是利用鼠李糖乳杆菌生长速度与叶酸的含量相关性建立的。鉴于微生物法试验周期长,菌种传代保藏比较繁琐,该法是基于《GB 5009.211—2014食品安全国家标准 食品中叶酸的测定》方法,改进了乳酸杆菌接种液的制备方法和叶酸培养液的培养时间。本文通过分析方法的标准曲线的线性、精密度、准确度和方法稳定性来验证优化方法的适用性。该方法标准曲线线性关系良好（R²>0.99）,回收率>90%,精密度和准确度好,操作简便,缩短了试验周期,提高了检测效率,为改进叶酸检测方法提供了依据。     

鸡传染性贫血病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立

为建立鸡传染性贫血病毒(chicken infectious anemia virus,CIAV)的实时荧光定量PCR检测方法,本试验通过CIAV基因组保守区域设计1对扩增片段大小为180bp的特异性引物,构建pGM-T-CIAV重组质粒,制备阳性标准品,建立SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR标准曲线,并进行敏感性试验、特异性试验和重复性试验。结果显示,CIAV的Ct阈值与标准品浓度在5.33×108至5.33×103拷贝/μL间呈良好的线性关系,相关系数R2=0.998,斜率为-3.443,产物Tm值在86℃左右。该方法与网状内皮组织增生病病毒(REV)、禽白血病病毒(ALV)J亚型、马立克氏病病毒(MDV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)基因组均无交叉反应,敏感性为5.33拷贝/μL,比普通PCR高1 000倍,批内和批间重复试验变异系数均小于3%。结果表明,本试验建立的CIAV SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法可实现对鸡传染性贫血病的早期诊断及感染程度的定量分析的检测。     

进出口动物中新霉素ELISA检测方法的建立

应用碳二亚胺法合成人工抗原得到卵清蛋白偶联新霉素,通过方阵试验确定最佳抗原包被浓度与抗体稀释倍数,以新霉素质量浓度对数为横坐标、抗体抑制率为纵坐标绘制标准曲线,建立了进出口食用动物中新霉素ELISA快速检测技术,并对建立的方法进行了回收率和特异性试验。结果表明,建立的检测方法包被人工合成抗原的最适稀释度为1：200,抗体的最佳稀释度为1：2 000,半数抑制浓度（IC₅₀）为6.99 ng/mL;该方法的最低检测限达40 ng/mL,与庆大霉素、卡那霉素、链霉素、托普霉素、阿米卡星、双氢链霉素的交叉反应率均小于0.1%,平均加标回收率83.77%。标准曲线在1.5~40 ng/mL范围内是线性的,相关系数为0.987,标准曲线方程为y=-37.66x+94.592;与常规液相检测方法相比操作简单、快速。本研究建立了一种快速、高效、特异的新霉素ELISA检测方法。     

绵羊肺腺瘤病毒SYBRGreenI实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

根据GenBank登录的绵羊肺腺瘤病毒gag基因序列设计1对特异性引物，经RT—PCR扩增出了276bp的片段。产物经回收与pMD18-TVector连接后转化到基因工程菌DH5a中，提取重组质粒，经PCR及测序鉴定后，作为阳性模板建立SYBRGreenI荧光定量PCR标准曲线，并做敏感性试验、特异性试验、重复性试验和临床检测应用。结果表明，标准曲线循环阈值与模板浓度呈良好的线性关系，产物Tm在82～82．5℃之间，灵敏度为2．22个拷贝／μL，特异性和重复性较好，较常规RT—PCR方法提前1h出检测结果。本试验建立了检测JSRV的SYBR—GreenI荧光定量PCR方法，为该病的早期快速诊断，并定量分析JSRV感染程度奠定了基础。     

鹅源草酸青霉发酵鸡粪工艺的研究

为了利用微生物发酵鸡粪生产高质量的有机肥料,为鸡粪资源的合理利用和减少环境污染提供有效的解决途径。本文以从五龙鹅肠道分离的草酸青霉为发酵菌株,通过对鹅源草酸青霉发酵鸡粪生产生物肥料和减少环境污染的研究,来探讨发酵鸡粪的工艺条件。结果表明：利用草酸青霉为发酵菌株发酵鸡粪,使鸡粪中的氮、无机磷、有机质的含量分别提高12.13%、74.7%、15.6%;粗纤维的含量降低39.15%;氨气浓度降低了55.12%;发酵后的鸡粪大肠杆菌菌值为0.04,明显高于未发酵鸡粪（0.0004）;寄生虫卵死亡率为96%。通过正交优化试验确定的发酵鸡粪的工艺为：氮增幅最大时的发酵时间为60h,料水比为1：2,料层厚度为45cm,发酵温度为32℃;无机磷增幅最大时的发酵时间为60h,料水比为1：2,料层厚度为35cm,发酵温度为32℃;氨气浓度降低幅度最大时的发酵时间为60h,料水比为1：3,料层厚度为35cm,发酵温度为32℃。     

猪伪狂犬病毒与猪圆环病毒2型二重SYBR Green I实时荧光PCR检测方法的建立

参照GenBank登录的相关基因序列,设计了2对引物分别用于扩增伪狂犬病毒（PRV）gH基N与猪圆环病毒2型（PCV2）ORF2基因的部分片段。将测序正确的PRVgH基因与PCV2ORF2基因片段克隆入pGEMTEasy载体,转化大肠杆菌DH5a,经测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBRGreenI荧光定量PCR标准曲线和熔解曲线,并对其灵敏性、特异性和重复性进行验证。结果显示,PCV2与PRv荧光定量PCR的标准曲线的Tm值分别为80．8℃和86．7℃,熔解曲线特异,灵敏度分别可达215拷贝／μL和180拷贝μL,是普通PCR检测方法的100倍。结果表明,建立的PCV2与PRV荧光定量PCR检测方法实现了2种病毒的同时检测,能够对PRV、PCV2混合感染的临床病料进行快速诊断。     

离子色谱法检测乳制品中硫氰酸根离子

通过采用乙腈沉淀乳粉和牛乳中的蛋白质后,移取上清液经过微孔滤膜过滤、LC-C18 SPE柱提纯去除干扰的有机物质后,滤液经离子色谱检测仪检测分析,从而得到样品中硫氰酸根离子含量.淋洗液经过优化后选用1.7 mmol/L碳酸氢钠+ 1.8 mmol/L碳酸钠+10％丙酮水溶液进行洗脱,抑制剂使用0.2％硫酸进行抑制器活化再生.该方法的硫氰酸根离子定量检出限为2.0 mg/kg,标准曲线线性相关系数R2可达到0.99以上,检测范围为0.1～20 mg/kg (mg/L),回收率在93％～97％之间,重复性实验得出相对标准偏差在0.8％～1.34％.对标准乳粉进行准确度检测,准确度可达到98％.该方法操作简便、结果准确,重复性良好,检测限低,适用于乳制品中硫氰酸根离子的检测.