猪源大肠杆菌耐药性质粒的监测研究

在１１５株猪大肠杆菌耐药性监测的基础上,提取耐药类型最普遍的５株耐药菌的质粒进行质粒指纹图谱分析。结果表明：同一来源、耐药类型相同的菌株有相似的质粒图谱,来源不同者,酶切图谱有提示出它们之间的同源性,说明质粒指纹图谱可作为流行病学调查的工具。     

河南省鸡源致病性大肠杆菌耐药性的监测分析

对来源于河南省32个县市的93株鸡源致病性大肠杆菌进行了16种抗生素药物的药敏试验和菌株耐药性与质粒图谱间关系的分析研究。结果表明:93株鸡源致病性大肠杆菌均为多重耐药菌株,耐药种类3～14种,耐药图谱复杂,可以分为58种耐药类型,相同来源的大肠杆菌耐药图谱、质粒图谱相似,但菌株耐药种类与质粒图谱条带的多少无一定的相关性。     

猪致病性大肠杆菌的质粒指纹图谱分析

在系统鉴定和药敏试验的基础上，对７０株致病性大肠杆菌进行了质粒指纹图谱分析。结果，菌株的质粒得率为１００％，可分为３２种质粒谱型。分离菌株在遗传距离０．１４０处聚成４类，在遗传距离０．２２４处聚成一大类。来源相同的菌株具有相同或非常相似的质粒图谱和质粒酶切图谱，来源不同的菌株具有不同的质粒图谱和质粒酶切图谱。来源相同菌株的质粒谱相同，而耐药谱可相同亦可不同，两者之间无明显规律。     

山东地区鸡源性大肠杆菌的耐药性与质粒图谱的监测分析

对来源于山东各地自然发病鸡群的19株鸡源致病性大肠杆菌进行了耐药性和质粒图谱检测,并对菌株耐药性与质粒图谱间关系进行了分析研究.结果表明:19株鸡源致病性大肠杆菌均具有多重耐药性,耐药图谱复杂;除3株菌没有提取到质粒外,其余菌株均提取到质粒条带1～5条;对比分析发现,菌株耐药性与所携带质粒的数量和大小并无直接的相关性.     

鸡源大肠杆菌的质粒及染色体DNA分析

为研究鸡源大肠杆菌分子流行病学规律,选用４０株鸡源大肠杆菌（均含有质粒）,应用指纹法对其质粒及染色体ＤＮＡ进行了分析。对菌株的质粒图谱比较表明,来源相同的菌株,其图谱相同或相似;来源不同的菌株,其图谱一般不同。选取ＨｉｎｄⅢ对质粒ＤＮＡ进行酶切,进一步证实了质粒图谱分析的结果。对菌株质粒型（ｐｌａｓｍｉｄｔｙｐｅ,ＰＴ）进行数值聚类分析,得出ＰＴｓ间的聚类树状图,更直观地反映出菌株间的遗传关系。试验中还发现,多数鸡源大肠杆菌含有大质粒,它们可能含有毒力相关基因。选用ＨｉｎｄⅢ、ＥｃｏＲＩ分别对染色体ＤＮＡ进行酶切,均能够产生较易于识别的酶切图谱,菌株的图谱与其来源也具有一致性     

四川规模化鸡场鸡致病性E.coli血清型、耐药性和质粒图谱的研究

从四川10个规模化鸡场分离的经生化鉴定、动物回归试验获得46株鸡致病性E.coli。对46株鸡致病性E.coli进行了耐药性、血清型鉴定和质粒DNA分析的研究。试验结果表明：鸡致病性大杆菌易产生耐药性，且多为多重耐药；鉴定出36株大肠杆菌的O血清型共16种，占鉴定菌株的78.3%；流行的主要血清为O89、O141、O119、O127和O131，共22株，占定型菌株的61.6%，鸡致病性大肠杆菌血清型多，各地血清型各类差异大；质粒得率为100％，来源相同的菌株有相同或相似的质粒图谱和酶切图谱，来源不同的菌株质粒图谱一般不同，同一血清型可以有不同的质粒图谱。     

鸡源大肠杆菌耐药性分析及中药对大肠杆菌耐药性消除作用的研究

研究鸡源大肠杆菌耐药性及中药对大肠杆菌耐药性消除作用。选择22种抗生素采用Kirby-Bauer法对山西省部分地区分离的20株致病性鸡源大肠杆菌进行耐药性检测,对分离菌株进行质粒分析和耐药质粒转化试验,并分析多种中药对大肠杆菌耐药性的消除作用。结果显示,20株试验菌对测试抗生素均存在不同程度的耐药性,其中5耐及5耐以上的菌株占分离菌株的90%,试验菌对青霉素耐药率最高(90%),其次为恩诺沙星(85%),而对黏杆菌素和呋喃妥因的耐药性最低;分离出12种质粒谱型,同一地区、同一鸡场菌株的质粒图谱相同或相似,不同地区菌株的质粒图谱不同,仅有部分相同或相近的流行质粒共存;对其中5株菌株进行耐药质粒的转化试验,发现同一质粒可编码1个至数个耐药性基因,不同质粒可以携带相同的耐药性基因;中药单剂或合剂对大肠杆菌的耐药性有一定的消除作用,其中黄芩的消除效果最好,中药处理后部分菌株质粒图谱无变化,只有黄连和双黄连造成2条质粒带丢失;对中药提取物作用后的消除子进行药敏试验,结果发现大肠杆菌对环丙沙星等多种抗生素恢复了敏感性。研究结果提示联合使用中药治疗鸡源大肠杆菌病有显著效果。     

四川规模化猪场仔猪黄、白痢的分子流行病学研究

在系统鉴定、药敏试验和血甭型鉴定的基础上,对52株致病性大肠杆菌和4株标准血清型大肠杆菌进行了质粒DNA分析,结果表明,菌株的质粒得率为100%,来源相同的菌株具有相同或相似的质粒图谱,来源不同的菌株具有不同的质粒图谱,质粒DNA分析为四川规模化猪场致病性E.coli的分子流行病学调查提供了科学依据。质粒图谱与血清型及耐药谱之间无明显关系。     

鸡源性多重耐药沙门菌质粒与耐药性相关性分析

为了解鸡源性沙门菌临床分离株多重耐药情况与质粒的携带关系,采用K-B纸片法对13株鸡源沙门菌分离菌株进行10种抗菌药物敏感性试验,通过质粒图谱检测耐药菌株质粒携带情况,分析质粒图谱和耐药谱的关系,采用0.5%SDS和43°C对分离菌进行质粒消除,根据质粒消除前后耐药谱的变化,初步对耐药基因进行定位。13株分离菌均表现为多重耐药,大部分菌株为5重及以上耐药,最主要的多重耐药谱是AMP-CIP-OFL-NOR-SXT-TET,分离菌均检测到了质粒的存在。质粒消除后,耐药谱明显变窄,耐药菌株恢复了对大多数药物的敏感性。结果表明,鸡源性多重耐药沙门菌的耐药性与质粒的携带关系密切,初步推断编码四环素、环丙沙星、氧氟沙星和诺氟沙星的耐药基因主要存在于质粒上。     

鸡源大肠杆菌的耐药性监测及生物学特性研究

从山东省诸城地区6个集约化养鸡场采集50只病死鸡病料,从中分离鉴定得到32株大肠杆菌,对其进行了12种常规药敏试验,发现分离的菌株有不同程度的耐药性。对14株优势血清型菌株进行了质粒DNA提取分析,然后用Hind Ⅲ限制性内切酶对质粒进行了酶切。结果表明,质粒的得率为100%,来源相同的菌株具有相同或相似的质粒图谱,也就是说它们有共同的起源;来源不同的菌株的质粒图谱一般不同,即有不同的起源。将血清型和质粒图谱比较,结果发现,同一血清型可以有不同的质粒图谱,不同血清型可以有相似的质粒图谱,血清型与质粒图谱没有直接的联系。     

云南多重耐药猪源大肠杆菌的分离鉴定及其耐药机制初步研究

从云南省3个规模化猪场仔猪黄白痢病猪病例分离到7株革兰氏阴性小杆菌,用生理生化鉴定、药敏试验和致病性试验对分离菌株进行鉴定,并提取细菌的质粒,分析质粒与细菌耐药性之间的相关性。结果表明:7株分离株经生理生化试验鉴定为仔猪黄白痢大肠杆菌,对小白鼠有强致病性,分离株对15种抗生素表现为多重耐药,其中14耐1株、13耐2株、11耐2株、8和8耐以下2株,头孢类抗生素是治疗仔猪黄白痢的首选药物,表明云南猪大肠杆菌已经呈现出十分严重的耐药性。质粒图谱分析表明,4株分离株均携带分子量约为5000bp的一个质粒,而另外3株不携带任何质粒。质粒转化实验表明,分离株所携带的质粒为非耐药性质粒,与细菌耐药性无直接相关性。     

河南省鸡致病性大肠杆菌耐庆大霉素质粒的检测分析

通过对12株100%耐庆大霉素的多重耐药菌株的质粒提取,电泳检测和转化试验,成功获得了2株由质粒介导的耐庆大霉素的多重耐药菌株。结果表明:同一质粒可编码一个至数个耐药性基因,不同质粒可以携带相同的耐药性基因,并且这些质粒可以传递多种耐药性。证明了菌株对庆大霉素的耐药性是由耐药性质粒介导的,细菌的抗药性与耐药性质粒的转移有很大关系。     

大肠杆菌耐药基因定位及耐药质粒消除

对采集的9株野生型大肠杆菌在药敏试验的基础上,进行了耐药基因定位。结果表明,4个菌株的氨苄青霉素耐药基因位于质粒上,不同畜群来源菌株之间耐氨苄青霉素质粒存在差异。用中草药艾叶的乙醇提取物和蒸馏提取物对大肠杆菌庆大霉素耐药性及耐药质粒进行了消除试验,结果艾叶乙醇提取物的消除率最高可达69.4%。     

猪、鸡致病性大肠菌不同菌株质粒DNA及某些微生物学特性比较

对河南部分地区鸡和猪的5株致病性大肠杆菌进行了血清学试验、药物敏感试验、生化试验,并提取质粒DNA进行琼脂糖凝胶电泳,以比较不同菌株之间的差异.结果表明,耐药性与质粒电泳图谱有一定关系;耐药性强的菌株的提取DNA进行电泳后未见质粒条带,耐药性差的菌株电泳后质粒条带清晰.生化反应相近的菌株其质粒电泳图谱也相似.本研究为细菌的分类及本病的防制方法提供了新思路.     

仔猪源大肠杆菌耐药性分析

为了解河北省仔猪源大肠杆菌耐药现状及耐药质粒的分布情况,运用K-B法对分离自全省10个不同市县的已经过系统鉴定和致病性检验的40株仔猪源大肠杆菌进行了22种常见抗菌药的药敏试验,并提取质粒,进行质粒谱型分析,初步探讨大肠杆菌耐药性与质粒图谱之间的关系。结果显示:40株均为多重耐药菌株,6耐和7耐的居多,占了总数的42.5%,其中对氨苄西林、阿莫西林、四环素、复方新诺明耐药率较高,分别达到了95.0%,87.5%,85.0%和72.5%;对卡那霉素、庆大霉素和强力霉素耐药率也达到了40.0%以上。     

鸡致病性大肠杆菌生物学特性的相关性研究

对来源于河南省新郑地区的14株鸡致病性大肠杆菌进行了致病性试验、血清型鉴定、耐药性试验和质粒图谱检测,并对其相互关系进行了分析研究,结果表明:菌株的血清型与其致病性、耐药性、质粒图谱均无一定的相关性;菌株的致病性与其耐药性、质粒图谱有一定的关系,耐药种类越多的菌株其致病性越强,质粒图谱中含有相对分子量较大的质粒条带的菌株其致病性较强;并且耐药图谱的复杂性与其质粒图谱中的条带数无一定的相关性.     

致病性大肠杆菌耐药性与其质粒相关性研究

对本地临床分离的20株致病性大肠杆菌进行耐药性检测和质粒检测。耐药性检测结果显示,受检20株致病性大肠杆菌对临床常用5种抗菌药物均表现为耐药,大肠杆菌耐药程度及多重耐药现象较为严重。质粒图谱分析结果表明,在大肠杆菌耐药性菌株中,尤其是耐药程度较高且呈多重耐药的菌株中,耐药质粒的检出率较高。实验结果提示:致病性大肠杆菌耐药性与其耐药质粒存在密切相关。     

水禽源大肠杆菌耐药基因和质粒的相关性研究

为了探究水禽源大肠杆菌的耐药性、耐药基因携带情况及其与质粒的相关性，试验用纸片扩散法检测62株水禽源大肠杆菌对14种抗菌药物的耐药性，用PCR方法对13种耐药基因和18种质粒进行扩增，并对质粒检出率较高的阳性菌株进行耐药基因的检测。结果表明：62株水禽源大肠杆菌对阿莫西林、美洛西林和链霉素的耐药性较高，耐药率分别为88.7%、74.2%和51.6%;对丁胺卡那和头孢哌酮耐药性较低，耐药率分别为3.2%和1.6%。aac(6′)-Ib、TEM、qnrD及qnrS基因的检出率较高，分别为66.1%、59.7%、46.8%和29.0%;共检出6种质粒IncFIA、IncFIB、IncY、IncI1、IncHI2、IncN,其中质粒IncFIB的检出率最高，为80.6%。IncFIB阳性菌株的aac(6′)-Ib基因检出率为72.0%,qnrS基因检出率为22.0%。说明水禽源大肠杆菌耐药性高，常见耐药基因以aac(6′)-Ib为主，常见质粒以IncFIB为主，质粒IncFIB介导的aac(6′)-Ib基因传播较为流行。     

猪源携带质粒介导喹诺酮类耐药基因大肠杆菌气源性传播的研究

为了调查养猪场携带质粒介导喹诺酮类耐药基因大肠杆菌的气源性传播情况,本试验分别在5个猪场舍内及舍外上风向和下风向不同距离收集空气样品,并在舍内随机采集粪便样品,分离大肠杆菌。药敏试验检测其对14种抗生素的耐药性。以质粒介导喹诺酮类耐药基因(qnr、aac(6')-Ib-cr、qepA)为指示基因,利用肠杆菌基因间重复一致序列聚合酶链式反应(ERIC-PCR)鉴定技术,分别对5个猪场不同样品中大肠杆菌的遗传相似性进行分析,评估其向舍外空气的传播情况。结果显示,5个猪场中的大肠杆菌对庆大霉素、卡那霉素、四环素、链霉素、萘啶酸、复方新诺明等12种常用抗生素耐药率较高,且呈现多重耐药。ERIC-PCR结果显示,46.34% (19/41)的舍内空气分离株与粪便分离株来源相同,其中73.68% (14/19)的分离株携带的耐药基因也相同;68.42% (26/38)的舍外空气分离株与舍内空气或粪便分离株来源相同,其中65.38% (17/26)的菌株携带相同的耐药基因。结果表明,起源于舍内粪便的携带质粒介导喹诺酮类耐药基因的大肠杆菌能形成气溶胶污染舍内空气,并借助舍内外气体交换,传播到舍外不同距离空气中(≥400 m),对养殖场周围的环境卫生及社区居民的健康形成威胁。     

用质粒DNA指纹图谱法分析猪水肿病大肠杆菌的流行病学特征

从广西各地病死猪器官、组织中分离到17株细菌,经细菌形态、培养特性及生化反应鉴定为大肠杆菌。作本动物回归试验、小白鼠致病性试验和溶血试验结果表明,全部为致病性大肠杆菌。血清定型鉴定结果发现,菌株血清型分布不规律。17株致病性大肠杆菌的质粒指纹图谱显示:来源于不同猪群的菌株GP20-3和GP25-1以及GP18-9和GP8-3分别具有相同的质粒图谱,说明发病猪群传染源的首发菌相同。所有菌株都含有1条大小相同的质粒带,广西流行的猪水肿病主要是由在遗传学上具有高度同源相关性的大肠杆菌的广泛流行传播所引起。菌株GP18-9和GP8-3的质粒指纹图谱相同,但它们的血清型却不一致的现象,可作为自然条件下,同一质粒在不同血清型大肠杆菌中扩散转化的一个生物学依据。