马铃薯茎尖试管苗及微型试管薯繁育的影响因子研究

以广东省引种的荷兰马铃薯费乌瑞它(Favorita)品种为材料,研究了从茎尖脱毒分化到试管微型薯诱导过程中的一些影响因素。结果表明:MS+NAA0.10mg·L-1+6-BA1.0mg·L-1为诱导愈伤组织的合适培养基;愈伤组织分化培养时,GA3的最适浓度为0.1～0.2mg·L-1;壮苗阶段,液体基本培养基MS加矮壮素CCC1.0～1.5mg·L-1的效果较好;弱光照比连续强光照更有利于结薯,弱光处理40d后黑暗处理一周,结薯诱导培养的时间为50d左右,0.1%的活性炭对诱导结薯有重要的促进作用。     

不同基因型马铃薯的花药培养

马铃薯花药培养在马铃薯育种实践中具有重要的意义。现以杂交圃中77份亲本材料为试验材料,对花药高温前处理、培养基和基因型等因素进行了试验。结果表明:马铃薯花药培养对基因型有很大依赖性,不同基因型马铃薯愈伤诱导率范围是0.16%～9.50%,胚状体发生率范围是0.31%～15.63%。克97G8-4、讷16和白俄3的植株再生率范围为12.00%～23.08%,其余全部没有分化出植株。倍性鉴定表明:双单倍体的发生率为93.75%。诱导培养基以MS+0.5 mg·L-1 NAA+1.0 mg·L-12,4-D+1.0 mg·L-1 KT+0.5%活性炭+100 mg·L-1 AgNO3,即③号效果最好,植株分化培养基以MS+4.0 mg·L-1 GA3+2.0 mg·L-1 ZT+30 mg·L-1蔗糖+0.7%琼脂,即②号效果较好。高温预处理对胚状体的发生有利。     

白掌的组织培养和快速繁殖

以白掌的茎尖为外植体,研究了影响其初代、继代及生根培养的主要因素。结果表明：最适初代培养基为MS＋6-BA2mg·L-1＋AD0.2mg·L-1＋NAA0.2mg·L-1;最适增殖培养基为MS＋6-BA2mg·L-1＋NAA0.2mg·L-1;最适生根培养基为1/2MS＋NAA0.2mg·L-1。     

高品质甜叶菊品系“1096”的组培快繁

采用改良DNS等方法筛选出的生长快、糖苷含量高的甜叶菊品系1096为材料,研究了不同外植体、不同激素种类和配比对愈伤组织诱导、不定芽分化和生根的影响。结果表明:以茎尖为外植体愈伤组织和不定芽诱导率均最高;其次是带腋芽茎段;再次为叶片。无腋芽茎段和无菌根均能诱导出愈伤组织,但不能诱导成芽。茎尖不定芽诱导的最佳培养基为MS+6-BA 1.0mg/L;叶片不定芽诱导的最佳培养基为MS+6-BA 1.0mg/L+IAA 1.0mg/L;带腋芽茎段不定芽诱导的最佳培养基为MS+6-BA 1.5mg/L。不定芽继代增殖培养采用MS+6-BA 0.5mg/L+NAA0.05mg/L;在1/4MS+IBA 0.1mg/L+NAA 0.1mg/L+1g/L活性炭的培养基上诱导生根,生根率可达100%,生根苗移栽后成活率达95%。     

对萼猕猴桃无菌离体再生体系研究

[目的]建立对萼猕猴桃的无菌离体再生体系研究。[方法]以单腋芽茎段、叶柄和叶片作为外植体,探讨其在不同激素组合的MS培养基上的诱导效果及生根培养效果。[结果]单腋芽茎段在MS+1.0 mg/L 6-BA+0.05 mg/L NAA+0.7﹪琼脂+3﹪蔗糖的培养基上的诱导效果最佳,叶柄和叶片易诱导出愈伤组织,进一步诱导出不定芽的效果较差。生根培养以1/2MS+0.2 mg/L NAA+0.7﹪琼脂+3﹪蔗糖的效果最好。[结论]对萼猕猴桃的初代及生根培养相对容易,单腋芽茎段为最佳的外植体来源,成活率高,综合诱导率可达90.9%;生根培养中添加NAA的效果优于IBA。     

“神马”菊组织培养技术研究

利用“神马”菊花的茎段作外植体,采用不同的诱导、继代和生根培养基进行菊花组织培养技术研究,结果表明,丛生芽诱导的最佳培养基为MS＋6-BA2mg·L-1,丛生芽继代培养的最佳培养基为MS＋6-BA1.5mg·L-1＋NAA0.05mg·L-1,最佳生根培养基为MS＋NAA0.1mg·L-1。     

剑麻愈伤组织的诱导和再生体系的建立

以剑麻H.11648为材料,研究外植体类型、激素种类及其浓度对剑麻愈伤组织的诱导和植株再生的影响,并且建立剑麻茎尖愈伤组织诱导及高频再生体系.结果表明:MS基本培养基、6-BA/NAA激素组合有利于淡黄绿色愈伤组织的形成,SH基本培养基、6-BA/IBA/NAA激素组合有利于不定芽的分化;最佳愈伤组织诱导和分化培养基分别为MS+3.0 mg/L6-BA+0.2 mg/L NAA,SH+5.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.1 mg/L IBA.在该培养条件下,H.11648麻茎尖愈伤组织的诱导率为86.67％,分化率为(98.33+1.67)％,分化系数为(13.19±0.58).再生植株在不加激素的MS基本培养基上培养4周后的生根率为100％,平均生根数为(5.39±0.70)条,根长为(8.44±0.25)cm,该研究结果为剑麻转基因的研究和种质创新奠定了基础.     

蔗糖和外源激素对马铃薯脱毒试管苗的影响

本试验以马铃薯品种大西洋脱毒试管苗为材料,采用正交试验设计,研究了蔗糖和外源激素(6-BA、B9、NAA)对脱毒试管苗生长状况的影响。研究结果表明,对于试管苗的不同指标,其最优组合不尽相同。有利于株高的组合:3%蔗糖+0.01mg·L-16-BA+20mg·L-1B9+0.1mg·L-1NAA;有利于茎粗的组合:12%蔗糖+1mg·L-16-BA+20mg·L-1B9+0.02mg·L-1NAA;有利于茎节数的组合:3%蔗糖+0.1mg·L-16-BA+35mg·L-1B9+0.1mg·L-1NAA;有利于叶片数的组合:3%蔗糖+0.1mg·L-16-BA+20mg·L-1B9+0.02mg·L-1NAA。     

马铃薯脱毒试管苗的快速繁殖的研究

剥取小于0.3mm的马铃薯茎法进行组织培养。在诱导愈伤组织和愈伤组织分化成芽过程中采用不同的激素条件，诱导培养基为MS＋6－BA2mg/L＋NAA0.1mg/L＋蔗糖3％＋琼脂0.6%，分化培养基为MS＋GA30.5mg/L 蔗糖3％＋琼脂0.6%。这种方法可提高分化成芽率，最后获得马铃薯脱毒苗。     

‘黄天霸’百合花器官愈伤组织诱导及植株再生

以‘黄天霸’百合花器官为外植体,采用正交试验,进行愈伤组织诱导及再分化研究,获得再生植株。结果表明,‘黄天霸’百合花器官的不同部位,其分化能力不同,出愈率由高到低依次是花丝>花柱>子房>花瓣>花药,花丝是较适宜诱导产生愈伤组织的外植体。花丝愈伤组织诱导的适宜培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA+0.3 mg/L 2,4-D,出愈率为69.56％,适宜愈伤组织增殖培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA;适宜芽分化的培养基为MS+0.6 mg/L 6-BA+0.6 mg/L NAA,芽诱导率达100％;最适生根培养基为MS+0.1 mg/L NAA,生根率达100％;试管苗移栽于草炭 ∶ 蛭石 ∶ 珍珠岩 ∶ 园土 ∶ 河沙=2 ∶ 1 ∶ 1 ∶ 1 ∶ 1的基质中,成活率达92％。     

马铃薯优化再生系统的建立

本试验研究了六种培养基系统对马铃薯东农３０３，Ｆａｖｏｒｉｔａ和极早三个品种来源的不同外植体的愈伤组织诱导和植株再生的影响，筛选出了适合植株再生的最佳外植体、最佳外植体大小及最佳培养基系统。适合植株再生的最佳外植体为叶片；最佳外植体大小为叶片０．５ｃｍ２、茎０．５ｃｍ、块茎０．２５ｃｍ２×０．３ｃｍ，适合于茎、块茎及叶的有效培养基系统分别为：①ＭＳ＋３ｍｇ·Ｌ-１ＢＡ＋０．０１ｍｇ·Ｌ-１ＮＡＡ（ｐｈ５．６）４周ＭＳ＋０．３ｍｇ·Ｌ-１ＧＡ３（ｏＨ５．６）；②ＭＳ＋１．７５ｍｇ·Ｌ-１ＺＴ＋０．８７ｍｇ·Ｌ-１ＩＡＡ（ｐＨ５．８）；③ＭＳ＋２．２５ｍｇ·Ｌ-１ＢＡ＋０．１８６ｍｇ·Ｌ-１ＮＡＡ（ｐＨ５．８）２周ＭＳ＋５ｍｇ·Ｌ-１ＧＡ３＋２．２５ｍｇ·Ｌ-１ＢＡ（ｐｈ５．８）。     

滁州白头翁组织培养及再生体系的建立

为建立白头翁再生体系,以白头翁主根的切段和试管苗叶片为外植体,比较2种外植体离体培养差异,探讨不同植物生长调节剂对不定芽和愈伤组织诱导、愈伤增殖和再分化及芽苗生根的影响。结果表明:叶片可以通过愈伤组织再分化和直接产生不定芽2种途径建立再生体系,而根只诱导出了愈伤组织,增殖培养中逐渐褐化死亡;在含6-BA培养基上,叶块死亡,而根只诱导出少量愈伤组织;叶片诱导不定芽的培养基为MS+TDZ 0.3 mg/L+NAA 0.1 mg/L;愈伤组织增殖的培养基为MS+TDZ 0.2 mg/L+2,4-D 0.2 mg/L;再分化时,需要转接到TDZ和NAA组合的培养基上,其中处理组合TDZ 0.3 mg/L+NAA0.1 mg/L的再分化率达100%;生根培养基为1/2MS+NAA 0.2 mg/L+IBA 0.2 mg/L+蔗糖20 g/L。不同外植体离体培养存在差异,叶片较根易培养;TDZ对白头翁叶片培养效果较好,2,4-D对愈伤组织的诱导能力较强,而NAA适合于不定芽分化,NAA与IBA组合使用生根效果较好。     

紫色甘薯的茎尖培养与脱毒

以紫色甘薯品系为试材,研究6-BA和NAA及基因型对紫色甘薯茎尖培养的影响,并采用硝酸纤维素膜—酶联免疫法(NCM-ELISA)和症状法对再生植株进行病毒学检测。结果表明,培养基中6-BA和NAA浓度和配比对紫色甘薯茎尖培养的愈伤组织、不定根和不定芽的诱导有明显影响。6-BA可促进不定芽的诱导,附加1mg/L6-BA的MS培养基为最佳诱芽培养基。基因型对诱芽率也有一定的影响,其中品系B3和B7的诱芽率可达50%。通过病毒学检测,获得12个紫色甘薯品系的脱毒苗,其平均脱毒率为94.7%。     

鱼腥草愈伤组织的诱导技术

以鱼腥草茎秆和叶片为外植体,进行外植体消毒和愈伤组织诱导条件的研究。结果表明：外植体在0.1%升汞中浸泡10 min可达到良好的消毒效果,污染率低于2%;愈伤诱导所用的茎秆和叶片两种器官中,适宜的外植体是茎秆,其诱导率可达31.25%;愈伤诱导时,24 h暗培养比12 h黑暗与12 h光照交替培养诱导率高;在含2,4-D或6-BA的3种培养基中,仅在MS＋2.0 mg.L-16-BA＋6.0 g.L-1琼脂＋30 g.L-1蔗糖的诱导培养基中诱导出了愈伤组织,诱导率最高为28.57%。     

不同处理方法对马铃薯茎尖成苗率的影响

试验以带马铃薯病毒的N88为材料,分别在40℃/25℃(4 h/20 h)的变温环境中,培养2、3、4周处理后茎尖剥离;以N88和D575试管苗为材料,在加入0,20,30 mg·L-1病毒唑的培养基中处理40 d后茎尖剥离。茎尖培养基为MS+0.05 mg·L-1 NAA+0.1 mg·L-1 6-BA+0.1 mg·L-1 GA3+4 g·L-1琼脂粉+30 g·L-1白砂糖的改良固体培养基,30 d后开始调查成苗率,每隔10 d调查1次,直到60 d,统计茎尖成苗率。结果表明:2周变温处理的茎尖成苗率和对照接近,但脱毒率有所提高;4周变温处理剥离茎尖成苗率最低,60 d成苗率仅为15%,脱毒率为100%;病毒唑浓度对不同材料的茎尖成苗率影响不同,其中D575经过20 mg·L-1病毒唑处理,茎尖培养60 d后成苗率最高达到83.3%,PVS脱除率为40%;材料N88在加入20 mg·L-1和30 mg·L-1浓度病毒唑的培养基中培养40 d后茎尖剥离,60 d成苗率分别为40.0%和41.7%,PVY、PLRV的脱毒率为100%。     

魔芋高效再生体系的建立与优化

研究不同激素及浓度配比对魔芋愈伤组织、不定芽和根诱导的影响。结果表明,诱导愈伤组织的最佳激素组合为ＭＳ＋６－ＢＡ０.5 ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ,其诱导率为８２％;诱导不定芽分化的最佳配方为ＭＳ＋６－ＢＡ １．５ ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ,其分化率为４９０％;诱导生根的最佳激素组合配方为ＭＳ＋ＮＡＡ ０．５ ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ １．０ ｍｇ／Ｌ,其生根率为９０％。     

马铃薯脱毒试管苗壮苗培养体系的优化

试验采用正交实验设计法,研究了不同浓度的α-萘乙酸(NAA)、比久(B)9)、6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)和大量元素组合对马铃薯品种费乌瑞它脱毒试管苗壮苗培养的影响,以期为费乌瑞它脱毒试管苗壮苗培养优化培养体系的建立提供理论参考。结果表明:在4个因素中对茎粗、根数、根长和单株干重影响大小依次为:大量元素>B9>NAA>6-BA;而对苗高、有效茎节数、活叶数和单株鲜重影响最大的为大量元素,影响最小的为NAA。新复极差法显著性测定结果显示,除4个处理外,其余处理与对照间有效茎节数、活叶数、茎粗、根长、根数、单株鲜重和干重差异均达到极显著水平。MS(100 mL/L大量元素)+0.03 mg/L NAA+10 mg/L B9+2%白糖+0.6%琼脂培养基除根长外各性状的值均最大,表明它是适合‘费乌瑞它’脱毒试管苗壮苗培养的最佳培养基。     

马铃薯再生体系的建立及其遗传分析

以马铃薯品种中薯2号为试材,筛选不同的培养条件建立了较高效的马铃薯再生体系,并对其再生过程进行了蛋白质检测和RAPD分析。愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA2.25mg.mL-1+NAA0.1￣0.2mg.mL-1,愈伤组织的诱导率达到73.17%～76.01%。自然生长、初代培养和继代培养的马铃薯再生体的水溶性蛋白之间存在着一些差异。利用RAPD标记技术,通过对54个引物的严格筛选,获得了3个扩增产物略有差异的引物。