湟源县寺寨牧场牦牛皮蝇幼虫感染情况调查及防治效果

2005年3月通过触摸牦牛背部皮蝇三期幼虫瘤胞和虫孔的方法,发现湟源寺寨牧场牦牛皮蝇平均感染率达95．18％,感染强度13．47个;居我们调查各地区之首。2005年10月-2007年10月我们用阿力佳（阿维菌素透皮溶液）0．1ml／kg体重背部皮肤浇泼和维力佳（长效阿维菌素片）防治牦牛皮蝇蛆病。经过连续3年的防治,牛皮蝇蛆病在该牧场的感染率逐年下降;2008年3月的防治效果考核中,未发现1例牛皮蝇蛆病,取得了良好的防治效果。该方法勿需抓牛,省时、省力,能有效控制牛皮蝇蛆病的发生。     

阿维菌素透皮溶液防治牦牛皮蝇蛆病及停药后感染回升状况调查

经过连续数年防治,用不同剂量的阿维菌素透皮溶液防治牦牛皮蝇蛆病,试验组1防治牦牛137头,感染0头,感染率为0,驱净率100%;试验组2防治牦牛180头,感染0头,感染率为0,驱净率100%;试验组3牦牛128头,给予安慰剂,自然感染24头,感染率为18.75%,平均感染强度1.71个。应用推荐剂量的1/2和1/4防治牦牛皮蝇蛆病,效果显著。结论:牛皮蝇自然感染回升快,防治工作要长期坚持。     

不同剂量阿维菌素透皮溶液防治牦牛皮蝇蛆病效果观察

为降低防治牛皮蝇蛆病的药物成本,用不同剂量的阿维菌素透皮溶液对牦牛皮蝇蛆病进行了防治试验,试验结果表明:1/2剂量组(285头)的感染率降为0,驱净率100%;1/4剂量组(234头)的感染率亦降为0%,驱净率100%;134头对照组牦牛中感染124头的感染率为92.5%,平均感染强度8.38个.应用推荐剂量(0.1mg/kg)的1/2和1/4防治牦牛皮蝇蛆病,效果显著.     

牦牛牛皮蝇蛆感染情况调查与防治

牦牛皮蝇蛆病是危害高原牦牛的主要寄生虫之一，随着牦牛养殖业的不断发展，牛皮蝇蛆的发病机率也越来越高。根据这一实际情况，近年来笔者对互助县牦牛皮蝇蛆病发病率进行了调查，共调查牦牛1000头，感染率45．8％，平均强度2．33；用阿维菌素对300头牦牛进行了防治，驱净率92．67％。     

刚察县牦牛皮蝇蛆病防治效果观察

2008年10月中旬采用阿维菌素泼背剂对462头牦牛,分为两组进行牛皮蝇蛆病防治试验,并于2009年4月进行了防治效果考核,结果显示:试验组牦牛感染率为零,防治效果达100%;对照组166头牦牛中感染97头,感染率58.43%.平均感染强度6.70个瘤疱.     

倍硫磷浇泼剂驱治牦牛牛皮蝇蛆病的报告

1997～1999年，我们在牦牛牛皮蝇蛆病感染严重的天祝县，采用倍硫磷浇泼剂进行牛皮蝇蛆病驱治效果试验，3年共用倍硫磷浇泼剂驱治牦牛1205头（次），注射剂对照驱治900头（次）。浇泼剂组3年的平均治愈率依次为96.70%、92.90%、97.84%，3年平均为97.03%；注射剂组3年的平均治愈率依次为88.45%、87.00%、90.61%，3年平均为90.09%；浇泼剂组的平均治愈率比注射剂组高6.84个百分点。试验表明，浇泼剂和注射剂对牦牛皮蝇蛆病均有较好的驱治效果，但以浇泼剂的效果更优。同时浇泼剂更为使用方便、安全可靠，毒副作用低，适宜于各地推广应用。     

莱克多巴胺多克隆抗体的制备

采用多元酸酐法活化盐酸莱克多巴胺，用混合酸酐法将活化的莱克多巴胺与载体蛋白（KLH，BSA）偶联，制备了莱克多巴胺免疫原KLH-Rac和包被抗原BSA-Rac。以KLH-Rac免疫新西兰白兔获得了莱克多巴胺多克隆抗体，以BSA-Rac为包被抗原，采用间接ELISA检测抗血清，其效价达到1：6000，间接竞争ELISA测得抗血清的IC50值约为5ng／mL，其与克伦特罗、沙丁胺醇、特布它林的交叉反应性小于0．01％。     

磺胺类药物多克隆抗体的制备与ELISA检测方法的初步研究

模拟磺胺母核结构合成了3种人工免疫原,免疫新西兰白兔,用间接竞争ELISA方法监测免疫效果。选择抑制效果较好的2组多抗血清建立磺胺类药的ELISA检测方法,绘制竞争标准曲线,并进行添加回收试验。结果表明：A组多克隆抗体对6种常用磺胺药SMD、SMM、SMZ、SDM、SDM、SD的IC10分别为0．010、0．046、0．010、0．100、0．067、0．019μg／mL,低于最高残留限量（0．10μg／mL）;C组多克隆抗体对SMD、SMM、SMZ、SDM、SQ、SD、磺胺氯哒嗪、磺胺氯吡嗪的IC10分别为0．0091、0．051、0．058、0．088、0．020、0．010、0．014、0．011μg／mL,亦低于最高残留限量。2组多克隆抗体对磺胺药的回收率为54．5％～111．8％和54．2％～130．3％,变异系数为3．6％～10．9％和3．7％～5．9％。     

门源县青石嘴镇牛皮蝇蛆病的调查报告

对门源县青石嘴镇972头牛只在不同地区、不同寄生部位、不同品种等条件下，感染牛皮蝇蛆病的情况进行了调查。结果表明：山地放牧的牛感染率分别为27．2％；22．0％明显高于舍饲圈养牛的感染率10．7％；11．4％：寄生于背部的高达64．83％，寄生于腰部的次之占30．15％，寄生于臀部的占1．92％，牛皮蝇蛆的对黄牛的感染率较高。     

牦牛牛皮蝇驱避剂

牦牛牛皮蝇驱避剂是一种以气味驱逐牛皮蝇的化学物质.它或是扰乱牛皮蝇的知感器官或是作为一种警戒信息素迫使牛皮蝇不敢靠近,从而阻断牛皮蝇在牛体上产卵,破坏其生活史,达到防治牛皮蝇蝇蛆病的目的.本文介绍一种用牛皮蝇驱避剂SM2H（西南民族学院生命科学与技术学院兽医诊断实验室研制的牦牛用牛皮蝇驱避剂）制成的牛皮蝇驱避剂挂饰-牛项圈.在夏季牛皮蝇产卵季节里,将其佩带在牦牛体上,其药力缓慢释放达2～3个月,以有效的防止牛皮蝇蝇蛆病.     

天峻县牛羊AsiaⅠ-O型口蹄疫免疫抗体检测

为了探讨口蹄疫O型-亚洲Ⅰ型二价灭活苗免疫接种牦牛、藏羊后产生抗体效价,项目对天峻县阳康乡的牦牛、藏羊开展AsiaⅠ-O型口蹄疫疫苗的抗体效价检测,试验结果表明,口蹄疫AsiaⅠ-O型二价灭活疫苗免疫效果依次为成年牦牛、成年藏羊、犊牛、羔羊;免疫后Ⅰ型抗体分析结果与O型免疫抗体的免疫效果一致,免疫合格率在80%以上,免疫牛羊产生的整体抗体水平能够符合国家规定的要求。     

毕赤酵母表达皮蝇素A蛋白

建立了用毕赤酵母表达系统表达皮蝇素A（Hypodermotin A，HA）的技术，并对表达条件进行了优化筛选。将皮蝇素A基因连接到质粒pPIC9k上，构建了重组转移质粒pPIC9k—HA。重组质粒通过电激转化入酵母细胞GS115后，用组氨酸缺陷培养基和G418分别进行筛选。重组酵母细胞在含0．5％甲醇的培养基中诱导产生目的蛋白，培养3d后收取上清，用阴离子交换层析柱分离纯化。经SDS—PAGE检测，所表达的蛋白相对分子质量约为30000。Western—blotting表明，该蛋白能与兔抗HA血清特异性结合。明胶电泳检测显示，该蛋白具有酶活性。单因素改变表达条件的结果表明，甲醇浓度在0．5％～1％、溶氧量在70％以上、诱导2～3d的情况下表达产量最高，达1500mg／L左右。该研究结果对防治牛皮蝇蛆痛疫苗的深入研究及毕赤酵母在寄生虫领域的应用有一定价值。     

Prokaryotic Expression of BPIV3 NP Protein and Its Immunoenhancing Effect on the BPIV3 Inactivated Vaccine

【Objective】 This study was aimed to verify whether the NP protein of Bovine parainfluenza virus type 3 (BPIV3) could enhance the immune effect of BPIV3 inactivated vaccine【Method】 The antigenicity of the protein encoded by NP gene was analyzed by bioinformatics softwares,and the antigenic region was screened.The truncated NP gene sequence of BPIV3 was amplified by PCR and connected to pET-32a(+) plasmid.Then the high-purity BPIV3 NP protein was obtained by E.coli prokaryotic expression system and Ni affinity chromatography.It was confirmed by Western blotting.BPIV3 was inactivated with 0.3% formaldehyde and mixed with Freund's adjuvant 1:1 to prepare inactivated vaccine.Eight New Zealand White rabbits were randomly divided into four groups with two rabbits in each group,including inactivated vaccine group,NP protein group,inactivated vaccine and NP protein mixed group and control group.Blood samples were collected before and every 7 days after immunization.The levels of specific antibodies and neutralizing antibodies in New Zealand White rabbits of the four groups were measured and compared by indirect ELISA and virus neutralization test.【Result】 DNAStar analysis showed that the average antigen index of amino acid region 193-368 of NP protein was 0.4-1.7,and the hydrophilic index was 0-1.5,which proved that this region had strong antigenicity and hydrophilicity.The NP gene was amplified by PCR and the recombinant expression vector was constructed.Gene sequencing showed that the recombinant expression vector was consistent with the expected results.The results of SDS-PAGE showed that NP protein was highly expressed with a molecular weight of 50 ku and expressed in the form of inclusion body.Western blotting showed that the expressed protein had strong reactivity.The results of ELISA showed that 28 days after immunization,the specific antibody titer of the control group was 0,and the specific antibody titers of inactivated vaccine group,NP protein group and inactivated vaccine and NP protein mixed group reached 1:2¹¹,1:2¹⁷ and 1:2¹⁸,respectively.The results of virus neutralization test showed that 28 days after immunization,the neutralizing antibody titer of the control group was 0,and the neutralizing antibody titers of inactivated vaccine group,NP protein group and inactivated vaccine and NP protein mixed group were 1:2^3.32,1:2^4.48 and 1:2^4.98,respectively.【Conclusion】 BPIV3 NP protein could enhance the immune effect of BPIV3 inactivated vaccine.Adding NP protein to the inactivated vaccine could be used as a new vaccination method of BPIV3 inactivated vaccine.     

猪霍乱沙门菌C500运载猪瘟病毒新型基因疫苗在家兔体内的免疫应答

为研究猪霍乱沙门菌C500(S.C500)运载猪瘟病毒(CSFV)新型基因疫苗口服免疫家兔的体内免疫应答特点,采用电转化法将CSFV新型基因疫苗转化到S.C500,构建重组工程菌,口服免疫接种家兔,检测CSFV、S.C500特异性抗体;并用猪瘟兔化弱毒疫苗及猪伤寒沙门菌野毒株依次进行攻毒试验。结果显示,成功构建CSFV新型基因疫苗重组菌S.C500/pCB-ME2-IL-15,S.C500/pCC-ME2-IL-15。口服免疫家兔可以诱导产生抗CSFV和S.C500的特异性ELISA抗体,且S.C500/pCC-ME2-IL-15略显优势。经三免后免疫家兔能够部分抵抗猪瘟兔化弱毒疫苗与猪伤寒沙门菌野毒株的攻击。试验提示以S.C500为CSFV新型基因疫苗运载体的猪用重组活菌苗具有可行性。     

小反刍兽疫活疫苗二次免疫效果评价

为研究已免疫小反刍兽疫(PPR)活疫苗的羊群经二次免疫后PPR抗体水平的变化趋势,对初免21 d羊群进行了第二次免疫,同时监测初免21 d及二免后3 d、7 d、14 d、21 d的血清中和抗体。结果显示,一次免疫羊21 d PPR中和抗体滴度平均可达5.18±2.87,阳性率为84%;二次免疫后3 d、7 d、14 d、21 d,PPR抗体呈上升趋势,平均滴度分别为5.65±2.56、6.95±1.82、7.28±1.18、8.12±1.31,阳性率分别为90%、100%、100%、100%。一免试验组21 d~323 d PPR抗体阳性率为83%,二免试验组在二次免疫7 d PPR抗体阳性率达到100%,并且维持到21 d。试验表明,活疫苗二次免疫增强了免疫效果,对已经有PPR抗体的羊进行二次免疫,可明显提升免疫抗体阳性率。     

小反刍兽疫病毒N蛋白抗体与H蛋白抗体在羊体内代谢消长规律的研究

为研究小反刍兽疫病毒N蛋白抗体与H蛋白抗体在羊体内的代谢消长规律,试验通过建立小反刍兽疫N蛋白双抗原夹心ELISA抗体检测方法、H蛋白阻断ELISA抗体检测方法与血清中和抗体试验方法,分别检测了羊免疫疫苗后体内N蛋白抗体与H蛋白抗体在每个免疫阶段的代谢消长变化。结果表明:羊免疫小反刍兽疫疫苗后,血清内的N蛋白抗体与H蛋白抗体在6~8周时血清抗体效价较高,对应的羊体内中和抗体效价为1∶512,且效价至少可以持续到10周以上,2种抗体具有一定消长代谢规律的相关性。该研究结果也为以N抗原与H抗原为基础建立相应的抗原捕获ELISA方法、竞争ELISA检测方法、间接ELISA检测方法以及双抗原夹心ELISA检测方法奠定了一定的理论依据。     

新城疫疫苗预防鸭副粘病毒病效果

为探讨新城疫疫苗对鸭副粘病毒病的预防效果,应用鸡新城疫活疫苗(I系和Lasota株)免疫2日龄雏番鸭,分别于免疫后7 d攻毒,并采血测定HI抗体。结果显示鸡新城疫I系活疫苗和Lasota疫苗对番鸭均安全,单独或混合应用均能有效抵抗鸭副粘病毒和新城疫标准毒(F48E8)的攻击;同时番鸭免疫后7 d I系疫苗诱导的HI抗体水平显明高于Lasota疫苗,而攻毒后35 d的HI抗体水平则以Lasota疫苗组高于I系疫苗组。上述结果表明新城疫I系和Lasota疫苗均可用于预防鸭副粘病毒病。     

魏氏梭菌类毒素疫苗研制及其免疫家兔抗体消长规律

本研究分别从山东省的莱芜、泰安、潍坊的三个养兔场发生疑似梭菌性下痢的病兔体分离到三株魏氏梭菌，鉴定为A型。利用该分离菌株和A型魏氏梭菌标准株（CVCC37）所产外毒素经甲醛灭活并加入氢氧化铝胶佐剂吸附浓缩后制备了A型魏氏梭菌类毒素疫苗。对该疫苗分别进行了安全性检验、有效免疫剂量试验和接种家兔1～23周血清中抗毒素（Ab）消长规律研究。结果表明，魏氏梭菌外毒素用03％甲醛32h能够彻底灭活，并最大可能地保持其抗原性；制备的魏氏梭菌类毒素疫苗无毒副作用，安全可靠；用野毒株和标准株制备的类毒素疫苗对家兔的有效免疫剂量为2mL／只，免疫保护效果可靠；采用野毒株和标准株制备的类毒素疫苗接种家兔后第二周血清抗毒素效价迅速升高，到第四周达最高峰。分别为6．6一和7．125log2，较高抗体滴度维持约17周后缓慢下降，至23周时血清平均抗毒素滴度仍维持在4．0-和3．4log2以上，所以，该类毒素疫苗的免疫保护期可以设定为6个月。     

新生水貂肠炎病毒母源抗体消长规律及其亚单位疫苗免疫效果研究

本研究旨在探索水貂肠炎病毒（mink enteritis virus,MEV）的母源抗体消长规律及其亚单位疫苗免疫效果。以免疫母貂所生仔貂为研究对象,采集21、30、45、60日龄仔貂血清,测定水貂病毒性肠炎母源抗体HI效价（MEV HI）;选取25只47~52日龄健康水貂接种制备MEV基因工程亚单位疫苗,免疫前后14 d采血测定MEV HI效价;免疫后14 d进行水貂肠炎病毒攻毒临床症状观察,并测定粪便HA效价;攻毒后14 d对濒死和存活水貂安乐死,采集十二指肠、空肠和回肠进行病理组织学观察和免疫组化检测。结果显示,免疫母貂所产仔貂的MEV HI效价随着日龄的增加逐渐降低,在21日龄时较高,45日龄时少部分仔貂MEV HI效价<1：32,60日龄时大部分仔貂HI效价≤ 1：4;使用制备合格疫苗免疫后14 d对照组水貂的MEV HI效价均不高于1：4,免疫组MEV HI效价升高至1：64~1：512;攻毒保护试验表明,免疫组水貂100%抵抗水貂肠炎病毒强毒的攻击,水貂的精神、饮食、粪便等均未见异常,且攻毒后粪便HA效价为1：8~1：16;病理组织学和免疫组化检测结果表明,MEV基因工程亚单位疫苗能够很好地阻止病毒在肠黏膜上皮细胞的复制和对肠黏膜上皮细胞的损伤。因此,免疫母貂所生仔貂21日龄时体内抗体效价最高,制备的疫苗免疫50日龄左右的水貂时能够突破母源抗体干扰并产生高水平的抗体,能够抵抗水貂肠炎病毒强毒株的攻击。     

膜分离法纯化浓缩猪伪狂犬病疫苗毒的效果

本研究使用不同孔径的陶瓷(有机)膜过滤器,对不合格的猪伪狂犬病毒细胞收获液(病毒含量≤104TCID50/mL)滤除杂蛋白、超滤浓缩、除菌处理得到纯化浓缩的猪伪狂犬病疫苗病毒液;然后对纯化浓缩的猪伪狂犬病疫苗病毒液分别进行杂蛋白去除率检验与无菌检验、病毒含量测定、安全检验、效力检验;将检验合格的纯化浓缩的猪伪狂犬病疫苗病毒液添加保护剂冻干,并对纯化浓缩的猪伪狂犬病冻干活疫苗进行以上各项检验,以及进行免疫猪体内抗体消长变化的检测。结果表明:纯化的猪伪狂犬病疫苗杂蛋白去除率平均达到68.3%以上,病毒含量≥105TCID50/mL,效力检验合格;免疫猪体内抗猪伪狂犬病毒抗体增长幅度比同时期未纯化的常规疫苗显著,其中免疫至84 d时中和抗体效价平均高达40.35稀释倍数左右,比常规疫苗中和抗体效价平均高出14.22稀释倍数。此项研究为畜禽疫苗的纯化提供一定的参考。