延后着床对小鼠妊娠的影响

哺乳动物的胚胎植入都存在着一个短暂的植入窗口期,这个窗口期阻碍了辅助生殖技术的应用。通过以小鼠为研究对象,利用胚胎移植技术研究了延后着床对妊娠的影响。结果显示,小鼠的胚胎在延后1d(即第5天)也能着床并能诱导蜕膜化的发生,而延后2d则不能移植。与正常组(第4天移植)相比,延后着床组的胚胎吸收率明显增加、窝产仔数明显减少及妊娠期延长。试验结果表明,小鼠胚胎超出子宫植入窗口期亦可着床,但会导致植入间隙和胎盘发育异常进而影响妊娠结果。     

双酚A对孕鼠子宫、卵巢相关因子的影响及菟丝子黄酮的缓解作用

将60只昆明孕鼠随机分为3组,每组20只。A组为空白对照组,孕鼠妊娠1～14d灌胃玉米油。B组为双酚A(BPA)组,孕鼠妊娠1～7d灌胃玉米油,8～14d灌胃BPA(500mg/kg)。C组为菟丝子黄酮+BPA组,孕鼠妊娠1～7d灌胃1mg/kg菟丝子黄酮,8～14d灌胃BPA(500mg/kg)。母鼠产后21d剖杀,取子宫卵巢检测。组织学观察发现BPA导致子宫或卵巢组织结构损伤,预先给予菟丝子黄酮有一定缓解作用。免疫组化和免疫荧光方法检测均显示,BPA使母鼠AMH、StAR、Bax的表达水平显著升高,CYP11a1、Kitlg、Bcl-2的表达水平显著降低。菟丝子黄酮显著缓解BPA引起上述因子的变化和伤害,起到一定的保护作用。     

附植期孕鼠热应激对胚胎发育及生殖嵴损伤的研究

实验旨在探究附植期热应激对小鼠胚胎发育和生殖嵴损伤的影响。将108只体重为（30±3）g的见栓0.5d(0.5dpc)孕鼠随机分配为对照组（24±1℃室温饲养）、38℃热应激组和40℃热应激组；热应激组于4.5dpc分别以38℃和40℃热应激2h/d，连续7d。记录孕鼠每日体重，于13.5dpc取小鼠胚胎，同时记录胚胎数量、胚胎重量和死亡胚胎数量，统计分析胚胎雌雄比率、含死亡胚胎的子宫比率、胚胎分布异常的子宫占比、胚胎子宫内异常分布比率；采用组织切片及透射电子显微镜观察生殖嵴组织细胞结构的变化。结果显示：与对照组相比，38℃和40℃热应激可降低孕鼠4.5～10.5 dpc和0.5～13.5 dpc体重增长率以及胚胎重量（P<0.05），同时增加胚胎子宫内分布异常比率（P<0.01）;40℃热应激可降低附植胚胎数量及增加胚胎分布异常的子宫占比（P<0.05）;38℃和40℃热应激导致生殖嵴组织细胞间隙明显增大，细胞连接方式多为桥粒连接，粗面内质网及部分线粒体肿胀，溶酶体与自噬泡增多。上述研究结果表明，附植期孕鼠遭受热应激导致胚胎发育迟缓及生殖嵴组织细胞超微结构损伤。     

鹅去氧胆酸调控Nrf2通路缓解热应激小鼠肝脏损伤的研究

为了研究鹅去氧胆酸(CDCA)对热应激小鼠肝脏抗氧化能力的影响,试验选择体重18～22 g C57BL/6清洁级小鼠40只,随机分为4组(空白对照组、热应激组、低剂量组、高剂量组),每组10只。空白对照组、热应激组按照每10 g体重0.1 mL灌胃0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)溶液,低剂量组、高剂量组每千克体重分别灌胃50,100 mg CDCA,每天1次。每天灌胃结束后将热应激组、低剂量组、高剂量组小鼠置于42℃恒温培养箱2 h(12:00—14:00),重复处理7 d,测定肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性与谷胱甘肽(GSH)含量,并以Western-blot方法分析小鼠肝脏中核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶-1(HO-1)与醌氧化还原酶1(NQO1)蛋白表达情况。结果表明:100 mg/kg CDCA可显著增加热应激小鼠肝脏组织中SOD活性及GSH含量(P0.05),并且可极显著增加热应激小鼠肝脏中Nrf2、HO-1与NQO1蛋白表达水平(P0.01)。说明CDCA可缓解热应激小鼠肝脏氧化损伤,具有潜在的临床应用价值。     

Nrf2通路对牛子宫内膜上皮细胞氧化损伤的保护作用研究

为探讨核因子E2相关因子(Nrf2)基因在牛子宫内膜上皮细胞抗氧化应激中的作用,本实验利用激动剂叔丁基对苯二酚(tBHQ)激活Nrf2,研究其对牛子宫内膜上皮细胞中血红素加氧酶-1(HO-1)和醌NADH脱氢酶1(NQO1)表达以及相关抗氧化酶活性的影响。结果显示:300μmol/L终浓度H_2O_2处理细胞4h,牛子宫内膜上皮细胞存活率为70%,活性氧(ROS)水平增加(P0.01)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)酶活性下降(P0.05)、丙二醛(MDA)含量上升(P0.05);用终浓度为30μmol/L的tBHQ预处理2 h可提高细胞中SOD和GSH-Px酶活性、降低ROS及MDA含量(P0.05)。氧化应激时Nrf2和NQO1的mRNA表达量上升(P0.05),HO-1的mRNA表达显著上升,tBHQ预处理可以显著增加HO-1和NQO1的mRNA的表达;在正常和氧化应激状态下,tBHQ均可显著增加牛子宫内膜上皮细胞Nrf2、HO-1及NQO1蛋白表达。综上可知,tBHQ通过激活Nrf2可提高相关抗氧化应激基因的表达,起到抗细胞损伤作用。     

猪胚胎着床时的黄体溶解机制

母猪空怀或配种不孕的原因有很多.调查表明,大约25%～35%的胚胎在妊娠12～18 d(胚胎着床期)发生流产,即隐性流产,给畜牧业带来巨大的损失.胚胎着床是一个复杂的,受很多因素调控的过程,着床窗口开放的时间也很短,此时胚胎发育到具有着床能力的阶段,子宫具有接受性.本文综述了关于猪胚胎着床时与黄体溶解相关的一些研究,主要包括瘦素及前列腺素在着床过程中的作用.     

SerpinB6b在大鼠着床期子宫及蜕膜的表达与调控

SerpinB6b是丝氨酸蛋白酶抑制剂亚家族B成员之一。本实验旨在利用荧光定量PCR、原位杂交、免疫组织化学与蛋白质印迹分析等实验技术,研究SerpinB6b mRNA和蛋白在大鼠早期妊娠1~9 d、人工诱导蜕膜化及体外诱导蜕膜化模型子宫中的表达规律。结果显示:SerpinB6b mRNA和蛋白在大鼠早期妊娠1~5 d腔上皮、腺上皮有微弱表达;在6~9 d,表达主要集中在胚胎和蜕膜区,且随蜕膜化程度增加,表达量逐渐增强,且在第8天达到最高;在大鼠人工诱导蜕膜化模型中,SerpinB6b在蜕膜区的表达均显著高于非蜕膜区;在大鼠子宫内膜基质细胞体外诱导蜕膜化模型中,SerpinB6b随着诱导蜕膜化天数的增加呈上升趋势。以上体内和体外实验结果表明,SerpinB6b在大鼠子宫中的表达具有着床相关特异性,SerpinB6b参与大鼠子宫蜕膜化过程。     

川楝素对昆明小鼠的胚胎毒性研究

取体重18~25 g雌鼠,超数排卵后与公鼠合笼。获得的孕鼠随机分为 6 组,分别用于研究川楝素对孕鼠2 细胞胚、桑椹胚、囊胚3个时期胚胎的毒性。每个时期均设对照组,以小鼠腹腔注射1/30半数致死量(LD50)的川楝素剂量对以上3个时期试验组孕鼠染毒2次,对照组孕鼠用等量PBS注射。研究其着床时期胚胎毒性时不对小鼠进行超数排卵,但试验组孕鼠染毒3次,对照组孕鼠用等量PBS注射。最后计数、观察4个时期孕鼠子宫内的胚胎数量和形态。结果表明:2 细胞胚、桑椹胚、囊胚时期试验组胚胎总数与对照组相比,没有统计学上差异(P>0 05); 2 细胞期试验组正常胚胎、异常胚胎数量与对照组相比,也无统计学上的差异(P> 0 05);桑椹胚、囊胚时期试验组正常胚胎、异常胚胎数量与对照组相比,具有极显著差异(P<0 01)。3 次染毒对着床后的胚胎毒性最大,子宫内胚胎几乎全部溶解,无法计数。母体组织病理切片观察发现川楝素对主要器官心、肝、肺、肾、子宫仅有轻微损害,提示腹腔注射小剂量川楝素对怀孕小鼠具有特定的胚胎毒性。     

PGF2αeCG及hCG 3种生殖激素联用对母犬发情、卵泡发育及胚胎着床的影响

给休情期性成熟母犬肌注 PGF2α(0 .5 m g/ kg) ,2 4 h后肌注 e CG(5 0 IU/ kg) ,再经 12 0 h后肌注 h CG(2 0 U/ kg) ,诱导其发情。将诱导发情的母犬与公犬交配 ,于交配后 16 d,摘取卵巢、子宫 ,观察其卵泡发育和胚胎着床情况。结果表明 ,药物处理可明显促使母犬提前结束休情期而进入发情期 (9/ 10 ) ,促进卵巢内卵泡发育 (P<0 .0 1) ,并使更多的胚胎着床 ,每只母犬子宫胚胎着床点为 (17.4± 2 .2 )个 ,提示 3种生殖激素联合应用可提高母犬繁殖率     

BDNF与TrkB蛋白在小鼠子宫和着床前胚胎中表达规律的研究

为了研究BDNF与TrkB蛋白在小鼠发情周期和妊娠早期子宫、输卵管及着床前胚胎中的表达规律,试验采用免疫组织化学方法检测BDNF与TrkB蛋白在子宫和输卵管中的表达,采用免疫荧光技术检测着床前不同发育阶段胚胎中蛋白的表达,并利用图像分析软件对两种蛋白在着床前胚胎中的表达强度进行定量分析。结果表明:BDNF与TrkB蛋白在发情周期及妊娠3.5天和4天子宫腔上皮、子宫腺上皮和血管内皮细胞中表达,在发情周期子宫内膜固有层基质细胞中不表达,但在妊娠3.5天和4天子宫蜕膜细胞中表达,发情前期、发情期和发情后期BDNF蛋白的表达强度高于发情间期;BDNF与TrkB蛋白在妊娠2天输卵管黏膜上皮和血管内皮细胞中表达;两种蛋白在着床前胚胎各发育阶段都有表达,在囊胚期达到最高水平。说明BDNF和TrkB蛋白通过旁分泌或自分泌途径对子宫、输卵管尤其是着床前胚胎发育发挥调控作用。     

植物性神经对围着床期大鼠子宫中肥大细胞和组织胺含量的影响

本研究旨在以肥大细胞和组织胺为指标探讨大鼠围着床期植物性神经与子宫局部细胞免疫的关系。选择180日龄,体重为300～350g的性成熟Wistar雌性大鼠90只,随机分为对照、假手术处理和手术处理(n=30)3组,手术处理为孕前切除支配子宫的植物性神经(肠系膜后神经节节后纤维和盆神经丛节前纤维),伤口愈合,开始合笼试验。在妊娠4～6d,无菌条件下,取出大鼠子宫和卵巢,观察排卵、胚胎着床情况变化,通过细胞染色和ELISA方法测定肥大细胞数量和组织胺释放量。结果表明:正常大鼠子宫中组织胺自发释放量和总含量在着床(d5)时最低。肥大细胞数量也呈现相似的变化。神经切除后,自发释放组织胺量在妊娠4～6d数值明显下降,且在妊娠4、6d与对照组相比较差异显著(P0.05);可释放组织胺总含量在着床前(d4)极显著降低(P0.01),且胚胎着床数量明显减少或延迟;肥大细胞数量在着床前后与组织胺总含量有相似的变化。这些结果说明,切除神经降低了着床前肥大细胞数量和组织胺水平,改变了子宫局部免疫水平,进而引起了胚胎着床减少或延迟。综上表明,支配子宫的植物性神经可在着床前上调子宫肥大细胞数量和组织胺水平,控制子宫局部免疫水平,在胚胎着床中起重要调控作用。     

细胞外microRNA在胚胎着床中的作用

胚胎着床是指处于活化状态的胚泡和处于接受态的子宫相互作用,最终导致胚胎滋养层与子宫内膜建立紧密联系的过程。胚胎着床过程发生在特定的时期并伴随一系列的细胞变化、细胞间相互作用和信号转导。细胞内的microRNA(miRNA)可以被释放到细胞外环境,这些由细胞释放并在细胞外环境中稳定存在的miRNA被称为细胞外miRNA。细胞外miRNA在胚胎着床过程中发挥重要作用,不仅与胚胎活力有关,也可以调节子宫内膜容受性并参与胚胎-母体相互作用。母体的循环miRNA具有稳定性、非侵入性和易于获取等特点,可以作为妊娠相关疾病的非侵入性生物标志物。文章简述了细胞外miRNA在胚胎着床中的作用,以期为提高哺乳动物妊娠效率提供参考。     

NO在小鼠早期胚胎吸收过程中的作用

给妊娠 7d小鼠尾静脉注射细菌脂多糖 (L PS)诱导早期胚胎吸收。注射 L PS后 12、2 4、36 h,以 EL ISA、比色法检测血清和子宫匀浆中 Th1型细胞因子 IFN- γ、IL- 12与 NO的含量变化 ;免疫组织化学法观察 3种一氧化氮合酶(n NOS,e NOS,i NOS)和 Th2型细胞在小鼠子宫表达的变化。此外 ,还观察了 NO供体硝普钠 (SNP)诱导孕鼠流产效果及氨基胍 (AG)对抗 L PS诱导孕鼠流产的效果。结果显示 ,相对于正常妊娠组 ,L PS处理组孕鼠子宫匀浆 NO含量及 IFN- γ、IL- 12水平极显著升高 (P<0 .0 1) ,血清 NO含量也极显著升高 (P<0 .0 1) ;n NOS、i NOS在 L PS处理组小鼠子宫可见阳性标记 ,而 e NOS未见阳性标记 ;大量 Th2型阳性细胞标记仅在正常妊娠组小鼠子宫内膜基质可见 ,L PS处理组未见阳性细胞。腹腔注射 SNP致使孕鼠早期胚胎吸收 ,然而妊娠 6～ 9d腹腔注射 AG却未能降低 L PS诱导的孕鼠早期胚胎吸收。上述结果提示 ,L PS处理后 ,Th1型免疫反应增强 ;源自升高表达的 i NOS的子宫局部高浓度 NO可能作为一种效应分子介导小鼠早期胚胎吸收。     

交感神经对妊娠早期大鼠子宫内PCNA表达的影响

为研究妊娠早期子宫内交感神经对PCNA的调控效应,选取180~200日龄健康的性成熟Wistar雌性大鼠36只,随机分为对照组和处理组,处理组采用静脉注射6-OHDA损毁交感神经。采用免疫组化法和qRT-PCR法,观察和分析交感神经对妊娠早期大鼠子宫内膜组织学结构以及PCNA分布的影响。结果表明,PCNA阳性物质主要分布在固有层浅层的蜕膜细胞及肌层的外纵肌细胞核内存在。损毁交感神经后,子宫腺较正常的妊娠状态减少,腺上皮变薄,PCNA免疫阳性细胞减少,子宫内膜的蜕膜细胞及平滑肌细胞等的PCNA发生异常表达,特别是着床前的妊娠第4天(处理组)大鼠子宫腺数量减少,但腺上皮内PCNA免疫阳性细胞增强,子宫正常的组织学微环境被打乱,导致囊胚不能与子宫建立联系,出现着床数下降而排卵数基本正常的状况。免疫组化观察和mRNA相对表达量的统计分析均显示损毁支配子宫的交感神经后,导致子宫组织的蜕膜细胞及平滑肌细胞等的PCNA发生异常表达,打破了正常生理状态下子宫内膜发育与胚泡发育的同步性,影响妊娠早期的胚泡着床。     

外源性孕酮对妊娠小鼠着床早期子宫内膜转化生长因子β1表达的影响

应用免疫组织化学 SABC法 ,研究了外源性孕酮对妊娠小鼠着床早期子宫内膜内转化生长因子 β1 (TGFβ1 )表达的影响。结果显示 :试验组皮下注射不同剂量孕酮 (2 mg/只 ,4 mg/只 )后 ,在孕 4 d,上皮内 TGFβ1 阳性着色 ,有的腺导管内具有 TGFβ1 阳性着色 ;且随着孕酮剂量的增大 ,上皮内 TGFβ1 阳性着色由子宫腔面向基面延伸 ,而腺上皮的阳性着色则呈下降趋势 ,基质内 TGFβ1 阳性着色则呈上升趋势。在孕 5 d,上皮内 TGFβ1 阳性着色呈现随孕酮剂量增大而下降的趋势 ,腺上皮和基质的 TGFβ1 动态变化如同孕 4 d。在孕 6 d,上皮、腺上皮及基质 TGFβ1 阳性着色均与孕 5 d的变化趋势相同。由此认为 ,外源性孕酮对小鼠子宫内膜各组织 TGFβ1 蛋白表达有影响。主要表现为 ,外源性孕酮可促进基质中 TGFβ1 的产生 ,对腺上皮 TGFβ1 的表达则具有下调作用     

非编码RNA调控哺乳动物子宫内膜容受性和蜕膜化的研究进展

子宫内膜容受性和蜕膜化作为胚胎附植的重要环节，影响哺乳动物的成功妊娠和繁殖性能，所以探究子宫生理功能的调控机制对提高母畜繁殖率具有重要意义。子宫内膜容受性是指子宫内膜允许囊胚定位、黏附、侵入并最终着床的能力。为了转变为接受状态，子宫内膜需要经历一系列形态和功能重塑，其中子宫内膜基质细胞会增殖分化为蜕膜细胞，发生蜕膜化过程。非编码RNA(ncRNAs)影响多种生理过程，包括对子宫内膜功能的调节，其中lncRNA-miRNA-mRNA和circRNA-miRNA-mRNA的竞争内源性RNA(ceRNA)网络理论是一种重要的分子调控机制。本文就miRNA、lncRNA和circRNA调控子宫内膜容受性和蜕膜化过程作用机制的研究现状进行综述，以期为深入了解ncRNAs在哺乳动物子宫中的调控作用提供理论指导和新思路。     

支配子宫的植物性神经对子宫免疫的影响 Ⅱ.支配子宫的植物性神经对Wistar大鼠着床及子宫肥大细胞的影响

选用成年雌性 Wistar大鼠 ,采用外科手术方法分别在妊娠前和妊娠后切断支配大鼠子宫的植物性神经 ,观察了切断神经对 Wistar大鼠着床的影响 ,并用常规组织学方法观察了子宫肥大细胞 ( MC)数的变化。结果表明 :( 1 )切断神经后再配种的大鼠不易怀孕 ,绝大部分鼠经交配 3次以上仍不怀孕 ,其他鼠推迟着床。对妊娠后大鼠切断神经并不影响妊娠的维持 ;( 2 )切断神经的大鼠子宫 MC总数与对照组相比有所增加 ,经 t检验未见显著差异 ,提示神经影响着床不完全是通过 MC数的改变起作用 ,可能通过改变 MC介质的释放起作用。本试验结果提示 ,支配子宫的植物性神经可能参与大鼠胚胎着床的建立 ,而对胚胎着床后影响并不重要     

产前热应激对仔鼠脑垂体GABAB受体发育的影响

为探讨产前热应激对哺乳动物后代脑垂体GABAB受体发育的影响,选用12只13 d孕龄的母鼠,并随机分组.试验组(热应激组)孕鼠置于42℃±0.31℃、相对湿度36.7%±1.42%的热应激箱中进行热攻击,直至肛温达到41℃,对照组孕鼠置于常温对照箱.所有孕鼠放回笼中分笼饲养,出生后1、3、5、7 d仔鼠的脑各部进行Za...     

甘氨酰tRNA合成酶在小鼠围着床期子宫及蜕膜化过程的时空特异性表达

核编码的甘氨酰-tRNA合成酶(Glycyl-tRNA Synthetase, GlyRS)是细胞质和线粒体蛋白质翻译所必需的,GlyRS除了在蛋白翻译中的作用外,它还参与基因转录、炎症和细胞增殖等其他生物学过程。本研究从mRNA水平和蛋白水平检测了GlyRS在小鼠早期妊娠1～8 d模型、人工诱导蜕膜化模型和体外诱导人子宫内膜基质细胞蜕膜化模型中的表达规律。结果表明:GlyRS mRNA和蛋白在小鼠早期妊娠1～4 d的腔上皮和腺上皮中表达,在小鼠早期妊娠5～8 d主要在胚胎和蜕膜区表达;随着蜕膜化程度增加,表达量逐渐增加;在人工诱导蜕膜化模型中,诱导组GlyRS mRNA和蛋白表达情况类似,表达量均明显高于对照组。在体外诱导的人子宫内膜基质细胞蜕膜化模型中,诱导组GlyRS mRNA表达量随着诱导天数的增加而增加,均显著高于对照组。以上结果表明GlyRS参与小鼠早期妊娠及子宫蜕膜化的过程。     

副交感神经对妊娠早期大鼠子宫组织胺和血清LIF水平的影响

为研究大鼠副交感神经对妊娠早期子宫内组织胺(HA)和血清白血病抑制因子(LIF)的影响,选取180~200日龄健康性成熟Wistar雌性大鼠20只,随机分为对照组和处理组,处理组采用腹腔注射阿托品阻断副交感神经,对照组腹腔注射0.9%生理盐水。结果表明:阿托品处理后妊娠5d子宫囊胚数量明显减少、囊胚发育延迟;妊娠6d虽然囊胚数量接近正常对照组数量,但胚胎凸起仍小于正常妊娠6d状态。子宫肥大细胞(MC)释放HA结果显示,阻断副交感神经激发MC释放的HA量显著高于正常状态,且与MC自发释放的HA变化趋势不同;正常对照组血清LIF含量的变化趋势是随着妊娠时间的增加而减少,而处理组出现相反的趋势。试验结果提示,在着床窗口期副交感神经通过对MC释放HA等介质调控子宫的生理功能,HA和LIF分泌规律紊乱对胚胎着床的影响更为显著,导致囊胚发育延迟,甚至丢失。