小鼠-猪种间核移植胚胎玻璃化冷冻保存

以小鼠卵丘细胞为供核细胞,猪体外成熟去核卵母细胞为受体,构建小鼠-猪种间体细胞核移植(iSCNT)胚胎,并以猪体细胞核移植(pSCNT)胚胎为对照,采用开放式拉长细管(OPS)法对所获iSCNT胚胎进行冷冻保存,研究不同冷冻保护液(ES、EFS和EDFS)及胚胎不同发育阶段(2-、4-、8-细胞)对冷冻效果的影响。结果显示:小鼠-猪iSCNT胚胎卵裂率与猪pSCNT胚胎相比无显著差异(P>0.05),但其8-细胞发育率则明显较低(28.1%对56.8%,P<0.05)。采用ES液作为冷冻保护液,iSCNT胚胎冻后存活率与EDFS组相似,但显著高于EFS组(28.6%和22.7%对9.5%,P<0.05);与其他发育阶段相比,2-细胞期小鼠-猪iSCNT胚胎可获得最高的冻后存活率;小鼠-猪iSCNT各期胚胎的冻后存活率均低于pSCNT组,但无统计学差异(P>0.05)。结果表明,以ES液为冷冻保护液,选择2-细胞期小鼠-猪iSCNT胚胎进行OPS法冷冻保存,可获得相对较高的冻后存活率,但iSCNT胚胎的冻后存活率和体外发育能力均较pSCNT胚胎低。     

小鼠胚胎冷冻保存条件研究

为探索在实验室条件下最佳的小鼠胚胎冷冻保存条件.对不同发育阶段小鼠胚胎按照同一个冷冻程序进行冷冻;两个不同的冷冻程序对同一个发育阶段的小鼠胚胎进行冷冻.结果表明,-7℃平衡10 min,然后以0.3℃/min的速率迅速降至-35℃,-35℃平衡5min后投入液氮中,此冷冻程序比较适合小鼠胚胎冷冻;冷冻保存对16细胞以上的小鼠胚胎影响较小.     

影响猪卵母细胞冷冻效果的主要因素及其研究进展

卵母细胞冷冻保存技术的发展为体外受精和核移植以及转基因动物生产等胚胎工程技术提供了极大的灵活性,同时为家畜保种及珍稀濒危动物的保护提供了新的技术途径.本文综述了以猪为主的家畜卵母细胞的冷冻保存的原理并对影响卵母细胞冷冻保存的各种因素进行分析,以期为猪卵母细胞的冷冻保存研究提供一定的理论参考,从而提高猪卵母细胞冷冻后的成活率和体外受精生产效率.     

猪卵母细胞冷冻损伤的研究进展

卵母细胞冷冻保存技术的发展为体外受精、核移植以及转基因动物生产等胚胎工程技术提供了极大的灵活性,同时为家畜保种及珍稀濒危动物的保护提供了新的技术途径。在此,综述了以猪为主的家畜卵母细胞的冷冻保存的原理及冷冻保存对卵母细胞超微结构和发育潜力的影响,以期为猪卵母细胞的冷冻保存研究提供一定的理论参考,从而提高猪卵母细胞冷冻后的成活率和体外受精生产效率。     

奶牛胚胎冷冻保存技术的研究

<正> 自从Whittngham发现经超低温冷冻保存的小鼠胚胎可以成活后,超低温冷冻保存哺乳动物胚胎的方法取得很大进展。目前许多国家都在对不同的胚胎冷冻保护技术进行探讨,如加入冷冻保护剂的种类和浓度、冷冻程序的选择、脱除保护剂的方法等,试图寻找一个胚胎冷冻和解冻的最佳方案。我们从87年开始从事这方面的研究,其目的是探索胚胎冷冻的方法和步骤、寻找适宜于基层生产单位应用的解冻和脱除冷冻保护剂的简易方法。为今后胚胎移植的推广应用打下基础。     

哺乳动物胚胎冷冻保存研究进展

[目的]介绍哺乳动物胚胎冷冻保存技术的最新研究进展。[方法]从冷冻原理、防冻剂种类、冷冻方法、解冻方法等方面综述了哺乳动物胚胎冷冻保存技术的最新研究进展。[结果]胚胎冷冻保存的原理是阻止冷冻、解冻过程中细胞内形成致死冰晶;防冻剂的种类大致分为低分子量渗透性防冻剂、低分子量非渗透性防冻剂、大分子物质、生物活性物质;胚胎冷冻方法主要有常规慢速冷冻法、玻璃化冷冻法和快速冷冻法;解冻方法主要介绍了快速解冻。[结论]胚胎冷冻保存技术的应用愈加广泛,将对胚胎生物工程和其他生物技术产生推动作用。     

“哺乳动物胚胎玻璃化冷冻保存技术研究与应用”取得突破性成果

动物科技学院动物繁殖教研室的自选研究课题“哺乳动物胚胎玻璃化冷冻保存技术的研究与应用”于１９９９年１２月１８日通过鉴定。专家委员会认为:该项目在系统研究哺乳动物胚胎对几种常见抗冻剂的耐受性和细胞膜通透性的基础上,结合抗冻剂的化学特点,研制出在常温下高效、低毒的冷冻保护液ＥＦＳ和ＧＦＳ,并建立了简易、快速、稳定的胚胎玻璃化冷冻技术方法。运用这种技术方法已成功地对小鼠、家兔、绵羊和牛的体内、外受精胚胎及显微操作胚胎进行了玻璃化冷冻保存。冷冻胚胎解冻后的体内、外继续发育率高于国内同类研究水平,达到或超过本…     

猪精液冷冻技术的研究进展

文章综述了猪精液冷冻技术的国内外研究概况,简要阐述了精液冷冻保存机理,并从冷冻保存稀释液、冷冻保护剂、冷冻、解冻和保存等方面阐述了影响猪精液冷冻的因素,指出了目前在猪精液冷冻理论和实践中存在的问题,针对这些问题提出了解决方法,并对猪精液冷冻技术的研究前景做了展望。     

洲际间猪鲜胚引种技术的改进

洲际或地区间进行胚胎运输引种,对现代化畜牧业的发展,有着重要的作用和深远影响。因为它不仅节约大量因运输话畜所消耗的人力、物力、财力和时间,同时可大大减少疾病的传播。牛、羊胚胎冷冻成功,为引种提供了更加便利的条件。猪虽已产生冷冻胚胎移植的后代(-196℃),但冷冻保存技术仍处于实验阶段。所     

动物胚胎冷冻保存技术的研究进展

分析了动物胚胎冷冻保存的机理,综述了几种常见的动物胚胎冷冻保存方法的研究进展,并对动物胚胎玻璃化冷冻保存技术的发展前景进行了展望。     

胚胎冷冻技术及其在转基因小鼠中的应用

随着生物工程技术的发展,出现了许多生物工程小鼠品系,促使胚胎冷冻技术得到了广泛应用。胚胎冷冻技术不仅为转基因动物提供可用胚胎,还使胚胎移植不受时间、地域限制,简化引种过程,防止疾病传播,为建立优良动物的胚胎库提供了条件。综述了几种常用的胚胎冷冻方法及其在转基因小鼠中的应用研究,指出了胚胎冷冻方法存在的主要问题,并展望了其发展前景。     

Research Progress on Technique of Frozen Embryo Transfer in Sheep

The paper introduced the research progress on the technique of frozen embryo transfer in sheep,illustrated selection of donors and receptors,superovulation,synchronization of estrus,embryo cryopreservation and embryo transplantation. Frozen embryo transfer in sheep is another breakthrough in the high-quality sheep raising,and this technique in China is in its infancy recommendation stage,but it will be comprehensively popularized in the future.     

奶牛一步细管法冷冻胚胎移植试验

以PBS+20%FCS+1.5 mol/L乙二醇(EG)+0.1 mol/L蔗糖(SU)液作为冷冻液,对122枚奶牛胚胎进行一步细管法冷冻,管内解冻,然后移植给122头受体黄牛,结果有49头供体牛妊娠,受胎率为40.09%,产犊率38.52%.结果表明一步细管法是一种可行性良好的便于在农牧区奶牛胚胎移植中推广的方法.     

羊胚胎生物技术研究进展及应用

阐述了胚胎移植、胚胎冷冻、胚胎分割、胚胎性别控制及体外受精等胚胎生物技术在养羊业的研究进展及应用现状。     

猪卵母细胞冷冻保存研究

【目的】本研究试图通过比较猪卵母细胞超低温冷冻保存方法、冷冻承载工具、冷冻卵母细胞的类型，从而有效地保存猪卵母细胞;【方法】利用屠宰场卵巢采集的卵母细胞，以台盼蓝染色、二乙酸荧光素（FDA）染色鉴定卵母细胞冷冻后的成活率，以体外成熟和体外受精鉴定卵母细胞冷冻后的发育能力，研究了不同冷冻方法和不同冷冻保护剂对猪卵母细胞的冷冻效果。【结果】（1）程序化法冷冻保存中，9%乙二醇（EG），10%二甲基亚砜（DMSO），10%甘油（Gly）均对猪MII期卵母细胞有冷冻保护作用，极显著高于对照组（FDA染色成活率33.8%，25.8%，23.5% vs 2.5%，P <0.01），且以9%EG的效果最好，显著高于另外两组（ 33.8% vs 25.8%，23.5%, P <0.05）。（2）玻璃微细管（GMP）法是猪卵母细胞超低温冷冻的较好方法，以普通的麦管（Straw）法进行的程序化冷冻为对照组，GMP管法显著提高猪卵母细胞的冷冻成活率（分别为63.3%和34.5%，P<0.05）。（3）在玻璃化冷冻方法中，不同的冷冻液载体对猪卵母细胞冷冻成活率有影响。以EFS40为冷冻液，Straw和GMP管作冷冻液载体，卵母细胞的成活率分别为45.0%和65.9%，二者差异显著（P <0.05）。（4）用Straw的程序化冷冻法和用GMP管的玻璃化冷冻法对猪GV期卵母细胞冷冻均有效，但二者差异显著（成活率分别为30.0%和59.7%，P<0.05）。冷冻后继续培养，分别有2.8%和6.3%的卵母细胞周围颗粒层发生扩散。（5）冷冻对MII期卵母细胞的发育潜能影响较大，用新鲜精液使其受精，仅有4.9%的受精卵分裂，极显著低于对照组的49.5%（P<0.01）；发育至4-细胞期的比例为1.7%，但未能发育至8-细胞期以上胚胎。【结论】选用MⅡ期卵母细胞、以GMP管为冷冻承载工具、应用玻璃化冷冻方法能够较好地保存猪卵母细胞，为进一步完善猪卵母细胞超低温冷冻保存技术体系提供了参考依据。     

小鼠母体糖尿病(DM)对胚胎早期发育的影响

通过腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立小鼠糖尿病模型后,运用体外受精技术研究母体高血糖对早期胚胎发育的影响。选取6～8周龄ICR母鼠2次腹腔注射小剂量STZ构建小鼠糖尿病模型,并设实验对照组。成功造模后对实验小鼠眼底静脉丛采血并测定14项血生化指标。通过孕马血清促性腺激素(PMSG)配合人绒毛膜促性腺激素(hCG)对实验母鼠进行超数排卵,所得卵子与正常ICR公鼠的精子体外受精并培养24h后,观察胚胎的发育情况并进行比较。结果表明实验组小鼠的空腹血糖明显升高(P<0.001),空腹血糖值≥9.5mmol/L的小鼠比例为76.6%。14项血生化指标中,实验组的谷丙转氨酶、肌酐、低密度脂蛋白、胆碱酯酶和糖化血红蛋白均较对照组显著升高(P<0.01)。高血糖模型小鼠卵子与正常精子体外受精后的受精率较正常小鼠低,且有血糖越高比例越低的趋势,说明体外受精技术虽可以改善糖尿病母鼠胚胎的受精率,但母体高血糖仍影响早期胚胎的发育。