PCR技术鉴定中国株和西德株兔出血症病毒核酸

ＰＣＲ技术鉴定中国株和西德株兔出血症病毒核酸作者在先行构建兔出血症病毒（ＲＨＤＶ）中国分离ＮＪ株ｃＤＮＡ克隆的研究基础上，采用酶切鉴定和地高辛标记ＮＪ株病毒核酸探针杂交鉴定，从已获得的ｃＤＮＡ克隆中筛选一克隆ＰＧＤ－１２．把其中插入片段亚克隆Ｍ１３噬...     

应用高效液相色谱分析兔出血症病毒核酸

本试验应用聚乙二醇(PEG)沉淀、有机溶剂抽提和差速离心等方法,提取和纯化兔出血症病毒。用核酸酶降解病毒子表面污染的核酸后,再抽提,得到病毒核酸,并经琼脂搪凝胶电泳-电洗纯化,得到高纯度的病毒核酸。应用高效液相色谱对提纯的病毒核酸分析结果表明,兔出血症病毒的核酸为ssDNA.它的碱基组成为:C23.7,G20.5,T31.9,A 24.0。它的G+Cmol％为44.2。     

兔出血症病毒核酸的电镜图

病毒性出血症病兔肝悬液离心去杂后其上清用聚乙二醇浓缩,又经正丁醇-异戊醇除去杂蛋白,然后以差速离心和蔗糖梯度离心,提取兔出血症病毒(RHDV)。提纯的病毒用核酸酶降解污染的细胞核酸后,加入8mol/L尿素,使核酸从病毒粒子中释放出来,经水相法展开,附于有碳膜的铜网上。检样经醋酸铀染色和铂旋转喷涂投影,于透射电镜下观察。RHDV核酸呈线状,平均长度为1.92μm。经公式推算出分子量为2.30×10~6道尔顿(Dalton)。     

基于便携式荧光定量PCR仪的兔病毒性出血症病毒现场检测方法的建立及应用

为建立兔病毒性出血症病毒免疫荧光PCR检测方法,参照GenBank中兔病毒性出血症病毒基因组序列,设计特异引物和TaqMan探针,通过优化反应条件,建立了能检测兔病毒性出血症病毒的荧光PCR方法,并验证该方法的特异性、敏感性、重复性。结果表明,该方法检测兔病毒性出血症病毒灵敏度可达1.38LD_(50)·100μL~(-1),该法对兔巴氏杆菌、兔大肠杆菌、兔沙门氏菌、兔水疱性口炎病毒(RVSTV)和兔轮状病毒(RRV)的检测结果均为阴性。试验建立的TaqMan荧光定量PCR检测方法可对兔病毒性出血症进行现场快速鉴别诊断,为兔病毒性出血症的诊断及防控工作奠定了基础。     

兔病毒性出血症病毒分离和鉴定

从疑似感染兔病毒性出血症病毒的病兔体内分离到1株病毒,病兔表现体温升高、呼吸困难、全身实质脏器出血等典型病变。取病兔肝脏做血凝和血凝抑制试验,分离毒株可以凝集1.0%人"O"型红细胞,可以被兔病毒性出血症病毒阳性血清中和,对家兔的LD50为10-6.75/ml,是一株对家兔具有高致病力的强毒株,对分离毒株进行RT-PCR检测为阳性,说明该病兔感染了兔病毒性出血症病毒,本病毒的成功分离和鉴定为发病兔场找到了致病原,为兔瘟疾病的诊断和防制提供了参考。     

兔病毒性出血症的诊治

1病因兔病毒性出血症俗称兔瘟,或称兔出血症。本病是由兔病毒性出血症病毒引起的兔的一种急性、高度接触性传染病。病征是突然发病,体温升高,呼吸急促,死前发出尖叫声,口鼻流血。剖检可见支气管和肺部充血、     

兔出血症病毒衣壳蛋白VP60主要抗原域基因的克隆

从人工感染兔出血症病毒(Rabbithemorrhagicdiseasevirus, RHDV)致死的兔肝脏组织中粗提病毒,采用SDS 蛋白酶K法提取RHDVRNA作为扩增摸板,根据Genbank已发表的RHDV的核酸序列,自行设计了 1对引物,进行RT PCR扩增,获得RHDVVP60的主要抗原域片段。经琼脂糖凝胶电泳分析其大小约为1 393bp,将扩增产物提纯后克隆至PET 32α( )载体质粒中,经转化和进一步筛选,酶切鉴定证实获得了RHDVVP60主要抗原域基因的克隆,从而为该基因的表达和基因工程疫苗的研制奠定了基础。     

兔病毒性出血病流行特点及防治

兔病毒性出血症又称兔瘟,是由兔出血症病毒引起的呼吸系统出血及实质器官水肿、瘀血和出血为特征的一种急性、高度接触性传染病.     

兔病毒性出血症的诊治

<正>1病因兔病毒性出血症俗称兔瘟,或称兔出血症。本病是由兔病毒性出血症病毒引起的兔的一种急性、高度接触性传染病。病征是突然发病,体温升高,呼吸急促,死前发出尖叫声,口鼻流血。剖检可见     

浅谈家兔病毒性出血症的防治

兔病毒性出血症又称兔瘟、兔病毒性败血症、兔出血性肺炎。它是由病毒引起兔的一种急性、致死性、高度接触性传染病。其特征是突然发热,呼吸急促,出血性败血症病变和猝死。发病率及死亡率都很高。1病原病原是兔出血症病毒,呈球形,无囊膜,20面立体对称,直径25~     

兔出血症的研究

从呼和浩特市郊区分离1株兔出血症病毒,命名NM株,对其进行了病毒理化、生物学特性检测,并研究了应用SPA协同凝集试验诊断兔出血症的方法。结果表明,病毒在兔体连续传6代,均出现典型症状及病理变化,是1株毒力稳定的强毒株,病毒粒子在电镜下呈球形,直径30.3nm,无囊膜,边缘有均匀排列的齿状突起,有实芯(占40.6％)和空芯(占59.4％)2种病毒粒子。还有少量形态不一、大小不等的类似病毒的粒子。用冷酚法提取的病毒核酸,经二苯胺显色及紫外扫描,证明为DNA。病毒的蔗糖浮密度为1.192g/ml,对氯仿、乙醚及胰蛋白酶不敏感,耐酸(pH5、pH3)耐热(50℃、56℃、60min)。病毒对人的各型红细胞有高度凝集性。经氯仿、乙醚、酸(pHs、pH3),热(50℃、56℃ 60min)处理后血凝价不降或稍降,经胰蛋白酶处理后血凝价明显降低(降5个滴度)。37℃放置4h,4℃冰箱放置48h血凝价不降,4℃放置4～13d降低一个滴度,15d降2个滴度。兔体血清HI抗体滴度与保护力呈正相关,1∶40以上可以完全抵抗强毒攻击。用内蒙古生物制药厂生产的兔出血症组织灭活苗免疫兔,可以抵抗强毒的攻击。采用原代乳兔肾细胞、Vero及BHK_(21)传代细胞,培养病毒均未成功。应用SPA协同凝集试验诊断兔出血症,特异性和可靠性均好,可作为本病的1种快速诊断方法。     

兔病毒性出血症

兔病毒性出血症俗称兔瘟,是由兔出血症病毒引起的急性、高度致死性传染病,主要病理变化为呼吸系统出血,实质器官淤血、肿大、出血,肝脏坏死。一、病原本病毒属于嵌杯状病毒科,无囊膜,具有凝集人的红细胞的能力。能     

兔病毒性出血症的防治

兔病毒性出血症俗称兔瘟,是由兔病毒性出血症病毒引起的兔的一种急性、高度接触性传染病。以呼吸系统出血、肝坏死、实质脏器水肿、淤血及出血性变化为特征。本病常呈爆发性流行,发病率和病死率极高,是     

科学养獭兔讲座(6) 兔病防治

1.病毒性出血症(兔瘟)由兔出血症病毒引起的一种急性、烈性、毁灭性传染病,死亡率95%～100%。病兔、隐性感染兔和康复兔是主要传染源。主要是接触传染,也可通过呼吸道、消化道、伤口和黏膜传染。     

绩溪县浩寨兔病毒性出血症的诊断

对绩溪浩寨发生的兔病进行流行病学调查、临床症状、剖检变化、血凝与血凝抑制试验及攻毒试验，确诊是由兔病毒性出血症病毒引起的兔病毒性出血症。     

兔出血症病毒1、2型双重TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立和应用

兔出血症(rabbit hemorrhagic disease, RHD)是由兔出血症病毒(rabbit hemorrhagic disease virus, RHDV)引起的欧洲兔(Oryctolagus cuniculus)的急性致死性传染性疾病。RHDV属于杯状病毒科(Calicivirus)兔病毒属(Lagovirus)。目前兔出血症病毒1型(GI.1)和兔出血症病毒2型(GI.2)2种基因型均有在我国流行。为了更好地进行流行病学调查、实时监测兔出血症发展趋势和临床诊断，建立了一种检测RHDV1型和RHDV2型病原的快速、简单、特异且敏感的TaqMan实时PCR。结果显示，稀释度为1×10⁸～1×10⁴ copies/μL标准品建立的标准曲线有良好的线性关系，决定系数r²为0.999;该方法对RHDV1型和RHDV2型具有高度特异性，与兔多杀性巴氏杆菌、兔支气管败血波氏菌等其他病原没有任何交叉反应；检测灵敏度为100～1 000 copies/μL;组内和组间变异系数在0.01%～1.61%之间。用该方法对60份...     

兔病毒性出血症的诊断及防治措施

兔病毒性出血症,俗称“兔瘟”,是由兔出血症病毒引起的一种急性、败血性和毁灭性的传染病。因本病发病急,传播快,发病率极高,致死率100％,常呈暴发性流行,给养兔业造成极严重的经济损失,已成为危害养兔业的最严重的一种疾病。     

兔病毒性出血症关键在于预防

<正>随着人们生活水平的发展以及饮食结构的多样化,兔的养殖也在不断增加,随着养殖量和密度的加大,各种兔病的出现给养兔业带来了巨大的危害,尤其是兔病毒性出血症危害最为严重,给广大养殖场户造成了极大的经济损失。1流行特点兔病毒性出血症又称兔出血性肺炎、兔出血症或兔瘟,其病原是兔出血症病毒(RHDV),是一种急性、败血性、高度接触传染性、致死性和以全身实质器官出血为主要特征的传染病。病原主要存在于病死兔、隐性感染兔和     

应用协同凝集试验检测兔出血症

以兔出血症阳性血清制备5％协同凝集诊断液,并用于检测人工感染兔和健康对照兔的血浆,结果表明病毒人工感染兔濒死期血浆阳性检出率为100％(5/5),而体温升高1～2℃的疾病明显期血浆和对照兔血浆为阴性。提示用葡萄球菌 A 蛋白协同凝集试验检测濒死期血浆是诊断兔出血症的一种实用方法。     

一例兔瘟病的防治体会

兔瘟又称兔病毒性出血症,是由兔出血症病毒引起的一种急性、烈性、接触性传染病,临床以呼吸急促、呼吸系统出血、实质器官瘀血肿大和点状出血为主要表现,最急性的不表现任何症状突然倒地抽搐死亡。兔瘟发病有明显的季节性,主要见于冬季和早春,其他季节极少发生。近年来,