传染性法氏囊病病毒(IBDV)快速检测与分型技术

根据已发表的传染性法氏囊病病毒 (IBDV)核苷酸序列 ,在病毒结构蛋白 VP2编码基因的高变区两端外侧的保守序列内设计合成了 2条寡核苷酸引物 ,对各种不同致病性的 12株参考毒株进行了 RT- PCR检测。结果 :12个参考毒株均能扩增出约 6 79bp的目的片段 ,而对照的 5种鸡源性病原体 NDV、IBV、CAIV、E.coli、PM均未扩增到相应片段 ;对疑似 IBD的 34份临床病料进行检测 ,并同时在其扩增的片段内设计另 1对引物进行 Nested- PCR检测 ,结果基础 RT- PCR检测到 11份阳性 ,Nested- PCR检测到 2 3份阳性 ,后者的检出率大大提高。结果表明 ,建立的 RT- PCR诊断技术具有特异、快捷、敏感的特点。取限制性内切酶 Sac 和 Ssp 以及设计的 2条 vv IBDV(超强毒株 )特异性引物 ,分别应用 v VP2片段 PCR扩增产物的限制性内切酶分析和型特异性引物的 PCR扩增 2种方法 ,对 7个 IBDV分离参考毒株和 2 4个临床样品进行致病性分型。结果 ,确定 2 1株属于 c IBDV(经典毒株 ) ,8株属于 vv IBDV,2株未能确定 ;2种分型方法的结果基本一致 ,均可用于 IBDV的快速分型 ,型特异性引物的 PCR扩增方法更为简便和快捷     

菜粉蝶颗粒体病毒DNA限制性内切酶图谱分析

采用“酶-SDS-酚”法提取的菜粉蝶(Pieris rapae)颗粒体病毒京农801株(PrGV-JN801)DNA,A260/A280=1.85,经琼脂糖凝胶电泳呈现一条带。三种限制性内切酶消化PrGV-JN 801 DNA,其结果分别为:Hind Ⅱ,12个片段;EcoR Ⅰ,15个片段;Bam HI,12个片段。三种酶切所得限制性片段累加分子量的平均值75.04×10~6道尔顿为PrGV-JN 801DNA的分子量。     

鸡毒支原体DNA限制性内切酶分析

应用限制性内切酶ＢａｍＨＩ,ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ消化鸡毒支原体ＤＮＡ,其电泳图谱能区别鸡毒支原体各株,比十二烷基磺酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）更敏感,表明限制性内切酶分析为鉴别鸡毒支原体毒株,进行分子流行病学调查及确定在商品代鸡中是否疫苗株代替了ＭＧ野毒株提供了非常有用的工具。     

Polymorphism in Mitochondrial DNA of Six Fowl Breeds Revealed by Restriction Endonuclease

The patterns of cleavage of mtDNA by restriction endonucleases was analysed for six fowl breeds and of .Hyline White,Hyline Brown,ISA Brown,Hisex Brown,Lohmann White,Abor Acres and mtDNA polymorphisms were detected in the restriction patterns with the following eight enzymes,Ava Ⅰ,AvaⅡ,EcoRⅠ,HindⅢ,BamHI,PvuⅡ,PstⅠ,HincⅡ.The restriction cieavage patterns were identical among these breeds.Hyline White,Hyline Brown,ISA Brown,Hisex Brown,Lohmann White-A type.The patterns of Abor Acres were Btype.Based on their mtDNA restriction types,all the breeds were classified into two groups.Genetic distances among these groups were calculated in roder to define their phylogenetic relationships.The relationship among five egg line breeds is close,while Abor Acres(Broiler fow)is relatively far from them.The results suggest that the difference of mtDNA could result from the different origins.The polymorphic sites in mtDNA of Hyline White bas been located on a restriction map.     

四种限制性内切酶对美国白蛾核型多角体病毒DNA酶解分析

从HcNPV中直接分离提纯的DNA证明具有典型的紫外吸收光谱。经琼脂糖电泳后是一条带谱。用限制性内切酶EcoRⅠ、PstⅠ、BglⅡ、PVUⅡ酶解,经琼脂糖平板电泳分别产生19、22、18、22条核酸片段。以λDNA-EcoRⅠ和λDNA-HindⅢ片段作参考,计算出各片段分子量大小,积加得平均值为94.0445×10~8。     

云南出口新鲜松茸产地属性DNA指纹图谱构建

收集19个出口松茸主产地的97个样本,使用逆转录因子的DNA分子标签对样本基因组进行PCR扩增;为尽可能区分原产地,对某些产地的样本增加先使用限制性内切酶处理基因组DNA,再次使用逆转录分子标签的步骤。采用全自动DNA分析系统获得一系列DNA指纹图谱。通过比较分析找到同一地理居群共有的DNA指纹图谱特征以及酶切前后的图谱差异。这些指纹图谱特征与松茸原产地间存在显著相关性。     

CRISPR-Cas 基因组改造技术研究进展

CRISPRs-Cas 系统是一种细菌获得性免疫系统,为一段规律成簇间隔短回文重复,保护细菌和古生菌 免遭病毒、质粒等的入侵。这种免疫系统是由一种小RNA 和多结构域蛋白质/蛋白复合物构成, 其作用机理可能与真 核生物的RNA 干扰过程类似。这个系统已发展为一种高效、特异、操作简单易行的基因修饰工具,与TALEN、ZFN 相 比,CRISPR-Cas 系统的出现使得基因编辑变得更加有效和简易,具有更大的潜力。CRISPR/Cas 系统已成功应用到细 胞、干细胞、小鼠、斑马鱼及植物等多种生物,显示了其强大的基因编辑优点。综述了CRISPR-Cas 系统的技术原理及 其在生物学研究中的应用最新研究进展并探讨了该技术的发展前景。     

黄鳝线粒体DNA的提取及其酶切分析

用碱裂解法从黄鳝肝脏组织中提取线粒体DNA,并对提取的线粒体DNA纯度、完整性进行了检测.结果表明,其紫外吸收比值为OD26/280在1.72～1.96之间,纯度较高,琼脂糖凝胶电泳表明提取线粒体的完整性好;用EcoR Ⅰ和HindⅢ对黄鳝线粒体DNA进行酶切,用琼脂糖凝胶电泳检测,均能检测出两套不同的酶切片段,证明黄鳝线粒体DNA存在多态性.     

六种限制性内切酶产生的二花脸大约克夏猪的DNA指纹图谱

用噬菌体Ｍ１３ｍｐ１８单链ＤＮＡ作探针，对二花脸和大约克夏猪进行了ＤＮＡ指纹的研究。采用六种限制性内切酶获得了高分辨率的、具有个体特异性的ＤＮＡ指纹图谱。这六种限制性内切酶是：ＨｉｎｆⅠ，ＨａｅⅢ，ＥｃｏＲⅠ，ＢａｎⅠ，ＴａｑⅠ和ＰｓｔⅠ。不同酶消化产生的图谱带数有差异，并有品种特征带趋向。     

程序性翻译后修饰对FEN1功能调控的研究进展

瓣状核酸内切酶(FEN1)是结构特异性5'核酸酶超家族成员,以参与冈崎片段成熟、DNA重组、细胞凋亡DNA片段化和长片段碱基切除修复(LP-BER)而闻名,在生物体的多种代谢途径中发挥作用,对维持不同物种基因组的稳定性发挥着十分重要的作用。FEN1的功能或表达异常会导致生物体内的多个生命过程发生紊乱,如突变率增加、微卫星序列不稳定、DNA降解等,对生物体造成严重危害。因此,FEN1在生物体内的表达必须受到严格、精确、及时的调控。研究表明,翻译后修饰对FEN1蛋白的活性强弱、细胞定位及功能稳定性发挥着重要的调控作用。本文对关于FEN1翻译后修饰调控的相关研究进展进行总结,系统归纳翻译后修饰对FEN1功能的调控和影响,为后续开展FEN1程序性调控研究提供了参考。