中国大菱鲆虹彩病毒(TRBIV)PCR检测方法的建立及其应用

大菱鲆红体病虹彩病毒(turbot reddish body iridovirus,TRBIV)是中国工厂化养殖大菱鲆的主要病毒性病原之一.本研究提取了该病毒DNA,依据其主要衣壳蛋白基因序列设计了PCR引物,优化了PCR反应参数,建立了TRBIV的PCR检测方法,测试了该方法的特异性和灵敏度,并应用该方法开展了TRBIV的流行情况调查及研究了大菱鲆的外观症状(红体)与TRBIV感染的关系.结果显示,本研究建立的TRBIV PCR检测方法可以从相当于100ng病鱼组织中或103数量级的病毒粒子中检出TRBIV,也可以在不杀死被测鱼的情况下,仅从鱼体中抽取少量血液即可在1天的时间内完成大量样品的TRBIV检测,但不能从健康大菱鲆脾组织和患淋巴囊肿牙鲆的囊肿组织中扩增出任何产物,说明该方法具有很高的灵敏性和特异性;在所调查的山东半岛5家大菱鲆养殖场的19尾大菱鲆中,7尾为TRBIV阳性或弱阳性;具有"红体"症状的大菱鲆应当划分为"病毒性红体病"、"细菌性红体病"和"非病原性红体症"3种不同的类型.本研究为TRBIV的流行情况和传播途径调查、疾病的快速诊断和控制提供了技术手段;调查结果显示TRBIV已遍布山东半岛沿海地区的大菱鲆主产区,在地域上相距较远的多个大菱鲆养殖场流行,今后需要密切关注该病毒的传播和流行.     

东北林蛙种蛙蛙病毒LAMP快速检测

由于环境、气候的恶化以及疾病的侵害,全球两栖动物种群数量呈现出整体衰退的趋势,其中虹彩病毒属蛙病毒科的蛙病毒是不可忽略的原因之一.环介导等温扩增技术（loop-mediated-isothermal-amplification,LAMP）是一种新型的核酸扩增技术,具有特异性强、快速、简便等特点,本研究利用LAMP技术,开发了针对中国东北林蛙种蛙蛙病毒的快速检测方法,针对蛙病毒MCP基因设计出能特异识别靶序列上6个位点的4条特异性引物,在链置换聚合酶（Bst酶）的作用下,62℃扩增30 min.通过对实验参数的优化,扩增后病毒的最低检出数可达到102个拷贝.该方法可用于东北林蛙养殖厂种蛙蛙病毒的临床快速检测,保证种蛙的存活质量和数量.     

水生动物虹彩病毒的分子生物学及研究进展

在水生动物病毒病害中，虹彩病毒引起的系统性疾病占有很重要的地位，而且虹彩病毒能感染鱼类、两栖类及爬行类动物，给全世界水产业带来了重大经济损失。本文拟就虹彩病毒各方面的特性作一叙述。     

原位杂交技术用于虹彩病毒对美国青蛙侵染的诊断

蛙虹彩病毒（Rana grylio virus,RGV)能引起鱼类、两栖类和爬行类水生动物严重的系统性疾病，RGV是从我国患病蛙中分离到一种虹彩病毒。体外扩增的RGV经人工方法感染幼龄美国青蛙（Rana grylio)，运用原位杂交技术，分别对感染1-3d后的蛙心、肺、肾、肠、脾、肝等6种组织进行RGV分子定位和检测，结果显示，在幼蛙的肺和肠中有较强的阳性信号，在其他组织中也检测到RGV的存在。本试验探讨了RGV感染早期在宿主体内的增殖及在不同组织中的分布状况，建立了一种彩虹病毒的早期诊断方法，并为揭示RGV的致病机制奠定了基础。     

罗源湾养殖大黄鱼虹彩病毒的PCR检测

2012年7月至10月间对从福建罗源湾患“白鳃病”的网箱养殖大黄鱼的鳃丝、肝脏、脾脏、肾脏及性腺等器官组织提取的总DNA进行虹彩病毒PCR检测,经序列分析,从患鱼肝脏、脾脏、肾脏获得的两条病毒DNA基因片段ly1、ly2分别与已报道的大黄鱼虹彩病毒(AY779031)和真鲷虹彩病毒(AB104413)高度相似,患鱼病毒阳性率为10%~65%.由此判断,罗源湾发生“白鳃病”并出现陆续死亡情况的养殖大黄鱼可能与感染虹彩病毒有直接关系.     

加强出口鰤鱼鱼苗检疫工作探讨

鰤鱼(俗称:章雄鱼),分布于日本海及台湾以南海域,生长适温为20℃-30℃,春、夏季自南向北洄游,秋、冬季由北往南洄游,鰤鱼的网箱养殖最早起源于日本。自上世纪八十年代以来,每年中秋节过后,海南渔民即开始捕捞野生鰤鱼鱼苗进行网     

Pb胁迫条件下旱柳扦插苗生长过程生理生化响应机制研究

为研究旱柳对铅的耐受机制,以2年生旱柳(Salix matsudana)扦插苗为材料,进行盆栽实验,分析研究生长6个月后的扦插苗在铅浓度为0、200、600、1000、1200 mg/kg时的生理生化响应机制。结果表明：随着土壤铅浓度的增加,植株长势、根茎叶中的SOD、POD、CAT活性、可溶性蛋白含量以及叶中的叶绿素含量均呈先升后降的变化趋势,MDA含量呈上升趋势。各项生理指标：根＞茎＞叶。该实验表明：旱柳根系为重金属铅的主要累积部位,只有少量的铅转移到地上部分且600 mg/kg铅胁迫下旱柳幼苗有最佳耐性机制。     

大鲵虹彩病毒流行株的分离及其主衣壳蛋白编码基因序列比较分析

大鲵虹彩病毒(giant salamander iridovirus, GSIV)是近年中国大陆新发现的引起人工养殖大鲵(Andrias davidianus)大规模死亡的病毒病原。为了揭示大鲵虹彩病毒流行株的基因型差异, 本研究对2010–2012年采集自全国不同大鲵养殖区域的患虹彩病毒病的大鲵样本进行了分子检测、病毒分离培养以及病毒主衣壳蛋白(major capsid protein, MCP)基因测序与比对分析。结果显示, 采自陕西、湖北、湖南、浙江、江西、福建等省的10个样本检测为阳性, 通过细胞培养获得10株病毒流行株。对该10株流行株MCP基因的测序与比对分析发现, 核苷酸序列相似性达到99.7%~100%, 其推测的氨基酸序列无明显差异, 证实中国大鲵虹彩病毒流行株属同一基因型。系统进化树分析结果表明, 所选大鲵虹彩病毒与蛙病毒分别聚为一枝, 但其亲缘关系较近。本研究结果旨为大鲵虹彩病毒病的疫苗研制及其免疫防控技术研究奠定基础。

     

大鲵感染虹彩病毒的诊断和治疗

2013年7月,陕西省汉中某大鲵养殖场发生以大鲵体表和四肢多处溃烂并伴有出血为特征的疾病,染病大鲵大量死亡。经临床观察、病理解剖及实验室检测,最后确诊病原为大鲵虹彩病毒。通过采取综合防治措施,养殖场大鲵疫情得到有效控制。