川芎嗪抗肿瘤作用研究进展

<正>据美国癌症协会统计,2013年北美新增肿瘤病例176 620例,死亡人数达到64 880例。我国每年新增肿瘤患者达160万,病死率仅次于心脑血管疾病。目前,在肿瘤的临床治疗中,手术、放化疗是主要治疗手段,但大多数患者发现时已是中晚期,失去了手术的最佳时期,而放化疗毒副作用较大,许多患者并非死于肿瘤本身而是死于放化疗引起的严重不良反应。因此,研发新型、高效、毒副作用低的抗肿瘤药物     

分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

采用单克隆抗体制备技术,建立了分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株,液氮保存4年后复苏,细胞在HAT选择培养基中生长旺盛,分泌抗体稳定,分别命名为YNF1,YNF2,YNF3,YNF4,杂交瘤细胞染色体数介于96~115条。细胞培养上清和腹水的单抗间接ELISA效价分别为1∶80~1∶160和1∶5 000~1∶10 000。在间接ELISA和夹心ELISA检测中单抗与猪瘟病毒呈特异性反应,与正常的猪、兔肾组织提取液及其血清Ig无交叉。抗体蛋白属IgG类,亚类及轻链分别为IgG1/λ,IgG2a/κ,IgG2a/λ,IgG1/λ。结果表明,4株杂交瘤是分泌抗猪瘟病毒单克隆抗体的细胞株,可长期传代无限分泌单抗,是进一步研究猪瘟病毒和开发敏感、特异、快速诊断猪瘟试剂盒和试纸探针的免疫学特异性试剂来源。     

奶牛孕酮单克隆抗体的制备与初步鉴定

试验应用淋巴细胞杂交瘤技术,以制备的P4免疫抗原免疫Balb/c小鼠为试验动物,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA方法进行筛选,采用有限稀释法进行细胞克隆,经过3次克隆筛选,最终获得2株能稳定分泌P4单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为8G6、11A11.杂交瘤细胞培养上清液和小鼠腹水中2株单抗ELISA效价分别为1∶512 000,1∶216 000.单克隆抗体与检测抗原和对照均不发生交叉反应,显示出良好的特异性,灵敏度高,且8G6的亲和力优于11A11.奶牛孕酮单克隆抗体的获得为P4检测试剂盒的研制奠定了基础.     

3Rs在免疫制品的生产与质量控制中的应用

在生物医学研究中对实验动物使用的关注促进了替代方法的发展。一种替代可被定义为(1)采用非动物方法来替代动物模型;(2)减少用于特定目的实验动物的数量;或(3)优化操作程序的任何方法或策略。替代、减少和优化的3Rs原则从上世纪70年代开始引入到生物医学研究中,目前已经成为欧洲乃至全球实验动物法规都共同遵守的原则。免疫制品是由活的生物得到或生产的产品,其活性与抗原抗体的相互作用有关。与动物福利最相关的制品是多抗、单抗和疫苗。提到替代,多数人想到的是毒理学,其实,这些     

稳定表达猪skMLCK基因的小鼠成肌细胞株构建及鉴定

为了获得稳定表达猪skMLCK基因的小鼠成肌细胞C2C12细胞株,将猪skMLCK基因cDNA序列T-A克隆至pMD-18T载体;重组质粒经双酶切后,定向克隆至真核表达载体,获得表达重组质粒pEGFP-N1-skMLCK;经脂质体介导,重组质粒稳定转染入C2C12细胞中;通过实时定量PCR方法检测skMLCK基因的表达水平,以及其他相关基因的表达情况。结果:获得了稳定表达猪skMLCK基因的C2C12细胞株;连续培养30d后,用实时定量PCR方法检测到skMLCK基因高表达,同时发现CFL2b和MEF2C基因表达下调。试验表明稳定表达猪skMLCK基因的小鼠成肌细胞系构建成功,为猪skMLCK基因功能的进一步研究提供了前期工作基础。     

特布他林杂交瘤细胞株的建立及其单克隆抗体制备与鉴定

分别通过1,4丁二醚法和EDC法将特布他林偶联于载体蛋白BSA和OVA上,用BSA-TBL免疫BALB/c小鼠,经过3次免疫后,OVA-TBL包被后用间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠,选择高效价、高敏感性和高特异性的小鼠进行抗原进行冲击免疫;无菌手术取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合建立分泌TBL单克隆抗体的杂交瘤细胞株;采用体内诱生腹水法制备TBL mAb,并对TBL mAb的效价、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定。结果显示,免疫的6只小鼠血清抗体效价均达到10-4;融合后筛选出4C08-G5和3H3-A02共2株敏感特异的杂交瘤细胞,其细胞培养上清液效价分别为1∶800和1∶1600,腹水效价分别为1∶2.56×105和1∶1.02×106;4C08-G5株分泌的抗体对TBL的IC50为5.25ng/ml,与瘦肉精、莱克多巴胺等其他β2激动剂交叉反应性小于3%。本试验获得了抗TBL mAb,为TBL残留免疫检测方法的建立奠定了坚实的基础。     

“无饲养细胞”杂交瘤制备技术

在３７℃温度下，用４５％ＰＥＧ（ｐＨ７．４）对ＮＳ０瘤细胞和免疫Ｂａｌｂ／ｃ鼠脾脏细胞做１ｍｉｎ融合。细胞融合后，加入１６４０／ＨＡＴ培养基，在不加饲养细胞和预加饲养细胞的两种环境中培养。结果发现融合细胞培养中不加小鼠腹腔巨噬细胞，杂交瘤克隆孔形成的量较预加小鼠腹腔巨噬细胞的多。     

鱼类细胞培养的研究与应用

21世纪是生命科学的世纪,也是海洋科学的世纪。随着生命科学理论和技术的飞速发展,细胞培养技术的地位和作用也越来越突出了,哺乳动物细胞培养的研究起步较早,目前已经取得了丰硕的成果,而水生动物特别是鱼类细胞培养的研究起步较晚,相对来说是比较滞后的,但是其发展也是非常迅猛的,并且有着广阔的应用前景。本文针对鱼类细胞培养的发展与现状、方法与技术及其在科学研究中的应用等方面进行了综述,并对鱼类细胞培养的发展前景作了展望。     

转染βG基因HHCC细胞的裸鼠转移模型的复制

将人肝癌细胞株（ＨＨＣＣ）细胞和转染β－葡萄糖苷酸酶（βＧ）基因的ＨＨＣＣ细胞体外培养，观察细胞形态结构，用流式细胞仪测定细胞周期，要用裸鼠脾种植法研究转βＧ基因ＨＨＣＣ细胞的转移特性，接种后６０ｄ收集转移灶，常规制片，ＨＥ染色镜检。结果，转染βＧ基因ＨＨＣＣ细胞内多见颗粒性物质，微绒毛及突起增多，溶酶体增多，内质网及核糖体丰富，糖元颗粒堆积，某些细胞出现变性、坏死。转染βＧ基因ＨＨＣＣ和ＨＨＣＣ