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2.
鸡减蛋综合征(EDS76)病毒的研究:Ⅱ.GC^2株蛋白性质的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
GC2株提纯后经SDS-PAGE分析得到13条多肽,分子量范围从112000 ̄18000道尔顿,GC2株抗原与标准株比较为同一抗原性。 相似文献
3.
生长抑素(SS)与硫氧还原蛋白(Thioredoxin)相融合生成的2种基因工程化融合蛋白SS-N/X和SS-N/S的表达特性 总被引:1,自引:0,他引:1
对基因工程化生长抑素(somatostatin,SS)-硫氧还原蛋白(Thioredoxin)融合蛋白SS-N/X和SS-N/S的表达产量、水溶性、Triton X-100对SS融合蛋白水溶性的影响、包涵体的溶解和复性特点以及SS的抗原性与免疫原性等特性进行了研究。结果显示,在30℃的低温下用IPTG诱导表达,SS-N/X融合蛋白主要以可溶性形式存在,占75.8%,色涵体仅占24.2%;而SS-N/S融合蛋白则主要以包涵体的形式存在,占81.1%,可溶性蛋白仅占18.9%;32C载体(pEG-32C)蛋白则居二者之间,可溶性蛋白与包涵体大约等比例出现。SS-N/S在低温下诱导可超量表达SS融合蛋白,其表达量约占菌体总蛋白的40.94%。0.5% Triton X-100对融合蛋白的不溶性有非常显著的影响,几乎可使所有的SS-N/X融合蛋白和大部分SS-N/S融合蛋白及32C硫氧还原蛋白变成水溶性的。32C硫氧还原蛋白包涵体在尿素中的溶解度明显高于SS-N/S包涵体,2mol/L尿素可使近一半的32C硫氧还原蛋白包涵体溶解,而SS-N/S包涵体只有27.5%溶解;但在5mol/L尿素时,两者均可基本全部变为可溶性的。在SS融合蛋白包涵体溶解时加入还原剂二硫苏糖醇,可明显降低SS的抗原性。SS融合蛋白(水溶性融合蛋白和复性后的包涵体)具有良好的SS抗原性和免疫原性。由SS融合蛋白与弗氏不完全佐剂制成试验用疫苗,免疫BALB/c小鼠、仔猪和羔羊等动物,可显著提高免疫动物的增重。 相似文献
4.
禽大肠杆菌病是由大肠杆菌所引起的局部或全身性感染的疾病,其病原抗原性复杂,血清型多样,临床症状和病理变化多变,且多与病毒性疾病和其他细菌性疾病并发,给养禽业生产带来重大损失. 相似文献
5.
α-银环蛇毒素融合基因表达载体的构建及原核表达 总被引:1,自引:0,他引:1
设计并人工合成2条引物,对作者构建的重组质粒pMD-α-BGT进行PCR扩增获得α-BGT基因。将目的基因连接至pUCm-T载体构建克隆质粒pUCm-α-BGT。克隆质粒经BamHⅠ、NotⅠ双酶切后连接至融合蛋白表达载体pGEX-4T-1中,成功构建融合基因表达载体pGEX-α-BGT,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达。表达产物经15%SDS-PAGE分析,在约34ku处可见明显的外源蛋白质表达带,与预计的分子量大小一致,其表达量约占细菌总蛋白的32.6%。Westernblotting和间接ELISA检测结果表明,α-BGT的融合表达蛋白与天然α-BGT标准品具有相似的抗原性。 相似文献
6.
根据GenBank中已发表的传染性喉气管炎病毒全基因组序列(NC006233)设计引物,以传染性喉气管炎病毒WG株基因组为模板,PCR扩增糖蛋白gJ基因,并对其进行序列分析。用DNAStar软件分析酣蛋白的抗原性,选择抗原性强的140aa-483aa片段,克隆并连接到原核表达载体pET-32a(+)中,转化BL21(DE3)菌株。经IPTG诱导后,获得大小为65.2ku的重组蛋白,命名为卜出,表达量占菌体蛋白总量的60.8%;Westernblot分析表明r-gJ具有较强的抗原性。 相似文献
7.
根据Genebank中伪狂犬病毒Min-A株gE基因序列,设计了一对引物,PCR扩增长度为557bp的gE基因去信号肽后的主要抗原区域(157-714bp),将其克隆进测序载体PGEM-Teasy中,成功构建质粒PGEMTeasy-gE。用BamhI和HindIII将gE基因主要抗原区域从PGEM-Teasy中切出,然后与同样酶处理的原核表达载体PET32A连接,命名为PET-gE。在IPTG的诱导后,经SDS-PAGE电泳发现43ku处出现特异性蛋白条带。经过Western blot分析,表达产物具有很好的免疫原性。该研究成功表达出具有抗原性的目的蛋白,为血清学鉴别诊断方法gE-ELISA的建立打下很好的基础,同时gE-ELISA也能对野毒和疫苗毒进行鉴别。 相似文献
8.
《中国兽医学报》2019,(2)
对已知的产气荚膜梭菌CPA编码基因进行优化设计,同时引入包括第56和130位的天冬氨酸(D)突变为甘氨酸(G),及第275位的酪氨酸(Y)和第336位的天冬氨酸(D)突变为天冬酰胺(N)的4个氨基酸突变,经人工合成获得基因片段Gcpam4。将Gcpam4克隆至原核表达载体pET-30a(+)中进行表达与纯化,获得重组蛋白rCPAm4。利用Western blot方法检测rCPAm4与产气荚膜梭菌A型毒素抗血清的反应性,并采用小鼠检测纯化蛋白的毒力。随后,将rCPAm4与Montanide ISA 201佐剂以1∶1的比例混合乳化制备疫苗,免疫家兔,按照《中华人民共和国兽药典》(2015年版)规定的方法检测兔血清的中和抗体效价。二免后21d,对家兔通过耳缘静脉注射1个家兔MLD剂量的A型产气荚膜梭菌毒素,以检测rCPAm4对家兔的免疫保护效果。结果表明,rCPAm4主要以包涵体的形式表达,且能与产气荚膜梭菌A型毒素抗血清反应;小鼠安全性试验显示,5.5mg/kg剂量的rCPAm4对小鼠仍无致死性;免疫rCPAm4后,每毫升的一免抗血清可中和10~20个小鼠MLD、二免抗血清可中和30~50个小鼠MLD的A型产气荚膜梭菌毒素;1个家兔MLD的A型产气荚膜梭菌毒素攻毒后,对照组家兔100%死亡,免疫组家兔得到了100%的保护。以上结果表明,rCPAm4具有良好的安全性和免疫原性,从而为A型产气荚膜梭菌基因工程亚单位疫苗的研制提供了重要的试验数据。 相似文献
9.
鸡减蛋综合征是由鸡减蛋综合征病毒(EDSV)引起的以产薄壳或无壳蛋,产生率严重下降为主要特征的传染病。自1976年荷兰科学家、fin Eck等首次报道此病以来,许多国家及地区都报道了此病的流行。我国于20世纪80年代末在肉用种鸡群中发现减蛋综合征以来,许多地区均分离出该病毒?EDSV具有独特的抗原性和生物学特性,各国学者对EDSV的分子生物学研究越来越重视。 相似文献
10.
天津地区鸡大肠杆菌病病原分离及病原特性 总被引:1,自引:0,他引:1
从天津地区10个区县、23个养鸡场的241只疑似大肠杆菌病病例中,分离出病原菌92株,所得菌株符合大肠杆菌的微生物学特性。致病性在各菌株间略有差异。分离菌对氟哌酸、庆大霉毒、氯霉素最为敏感。抗“O”血清型鉴定,结果表明,分离菌株分属25个血清型,并以O111、O89、O86、O30、O78为主。从优势血清型中选取的菌株,均具有良好的抗原性。 相似文献