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双向电泳(2-DE)技术是研究蛋白组学的有效途径和重要手段,而在双向电泳第一向中使用不同pH梯度的IPG胶条,是对双向电泳技术研究的深入。利用改良的TCA/丙酮与Tris-饱和酚提取法,提取纯度更高的绿竹叶片全蛋白,并在双向电泳中使用不同pH梯度的IPG胶条,检测其对绿竹叶片双向电泳图谱的影响。结果表明,蛋白样品上样量为20μg时,在7 cm的pH3-10L、pH3-10NL、pH5-8L 3种胶条中,pH5-8L的胶条在双向电泳的凝胶图谱上显现的蛋白点数目最多,约有400个,而且蛋白点的分布较其他2个胶条的结果更为均匀,清晰度更高;pH3-10NL的胶条的图谱上显现的蛋白点要比同一跨度的pH3-10L的胶条更多;通过3种胶条的对比可以使绿竹叶片双向电泳的分辨率显著提高。对于在pH5-8L显现出来的4个蛋白点进行MALDI-TOF-MS质谱分析,成功鉴定出4个蛋白点,其中3个蛋白点在pH3-10L胶条的双向电泳中是没有显现出来的,这些蛋白对于植物生物功能的发挥具有意义。试验表明了对于一些低丰度蛋白及小分子量蛋白的检测和鉴定,可以利用pH梯度较小的固化胶条进行双向电泳试验。 相似文献
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双向电泳技术研究进展 总被引:14,自引:0,他引:14
双向电泳是蛋白质组学研究中最常用的技术,具有简便、快速、高分辨率和重复性等优点。本文重点介绍了双向电泳的基本原理、样品制备、胶条水合、等电聚焦、聚焦后胶条平衡、第二相SDS—PAGE和分离蛋白质的检测与匹配分析。同时对当前双向电泳技术面临的挑战和发展前景进行了讨论。 相似文献
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研究双向电泳中IPG胶条对甜瓜叶片中的蛋白质在2 DE图谱上的影响,以及双向电泳后凝胶的最适染色方法。结果表明:当上样量为300 μg时,在pH 3~10 L(pH为3~10,线性)、pH 3~10 NL(pH为3~10,非线性)和pH 4~7 L(pH为4~7,线性)3种IPG胶条中,pH 4~7 L的IPG胶条在2 DE胶上出现的蛋白点数最多,大约为648个,且分布均匀,清晰度较高;pH 3~10 NL的IPG胶条在图谱上出现的蛋白点数要稍多于pH 3~10 L的IPG胶条。凝胶染色结果说明,银染 考马斯亮蓝复合染色法效果最好,可明显提高蛋白质凝胶电泳的分辨率。 相似文献
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