硫酸卡那霉素注射液含量测定的不确定度分析

为研究微生物检定法(管碟法)测定硫酸卡那霉素注射液生物效价试验中各因素对结果的影响,采用不确定度分析,将影响因素归纳为称量、稀释、加样、测定、平行试验,量化各不确定度分量,评估各因素的影响因子。结果表明,牛津杯加样体积对测定结果影响最大,提示试验中应尽可能精确控制加样体积。     

杨树转化受体系统再生初步研究及卡那霉素敏感性测定

以欧关杨108为试材，对组培苗叶片、茎段进行初步的转化受体系统研究和对选择性抗生素卡那霉素的敏感性测定，为杨树的基因、转化及转化选择提供基础。通过实验认为，以叶片与茎段为转化受体材料，虽然茎段诱导率高于叶片，但叶片长势上要好于茎段，叶片诱导率能达到转化的要求；叶背不宜为受体材料，叶片伤口不宜过大；腋芽的存在与否，在诱导率上没差别，都可达100％，但腋芽有利茎段分化和分化芽的生长。从多个角度来分析用于筛选转化苗的卡那霉素下限浓度，以叶片为转化受体时，为30mg／L；以茎段为转化受体时，为50mg／L；生根阶段，下限为30mg／L。     

利用卡那霉素筛选野罂粟转基因植株的技术研究

待供试转基因和非转基因野罂粟植株长至5～7片叶时,用微型喷雾器将不同浓度的卡那霉素溶液均匀喷施于叶片上,结果显示浓度为6.5g/L的处理表现效果最好。对于大田筛选转基因野罂粟,在苗期对叶片喷施6.5g/L卡那霉素溶液喷雾,并对产生黄斑的野罂粟植株进行剔除后,拔节期用7.5g/L卡那霉素溶液连续5d涂抹后,对产生黄斑的植株进行再次剔除,最终得到30株未见黄斑的野罂粟植株,经PCR进行检测后,最终得到8株野罂粟转基因植株。     

一株猪源大肠埃希氏菌卡那霉素耐药基因的研究

提取一株猪源大肠埃希氏菌卡那霉素耐药菌株E.coliBJ96147的质粒DNA进行转化，转化子能稳定表达其全部抗生素抗性，表明E.coliBJ96147对卡那霉素（K）、庆大霉（GM）、链霉素（S）、氯霉素（C）、四环素（Tc)、复方新诺明等六种抗生素的抗性由耐药性R质粒介导；根据已发表的编码卡那霉素抗性的磷酸转移酶[APH（3′）-Ⅱ]钝化酶基因的核苷酸序列，设计合成了一对引物P1和P2，用PVR技术检测其钝化酶基因，结果该引物扩增出了预期的578bp大小的PCR产物，淫限制性内切酶HindⅢ进行酶切分析，发现产物被切成二条带，与预出现的389bp及189bp二条带相符，说明PCR可用于检测猪源大肠埃希氏菌卡霉那素磷酸转移酶[APH（3′）-Ⅱ]钝化酶基因。     

金鱼草基因转化中卡那霉素筛选压力的确定

在以抗生素为筛选标记的基因转化中,确定适宜的筛选压力是提高基因转化率的前提。本研究以卡那霉素为筛选标记,在10、20、30、50和100mg／L的筛选压力下,根据金鱼草下胚轴外植体的生长表现、愈伤组织和芽的分化率确定适宜的筛选浓度。结果表明,适宜卡那霉素的筛选浓度为50mg／L。以此浓度为筛选压力进行遗传转化所获得的部分再生苗经Southernblot鉴定,均为转化株。     

杂种小叶杨叶片外植体离体再生体系的建立

为了开发新的小叶杨基因保存技术并提高其抗病虫害能力,本研究以杂种小叶杨(Populus simonii Carr.× P. deltoides cv. ‘Shanhaiguanensis’)无性系的叶片作为外植体,研究了杂种无性系的的离体培养及叶片再生体系,探讨了不同激素组合对杂种无性系不定芽的诱导、分化以及生根的影响。结果表明：最适于杂种小叶杨叶片分化的培养基是MS+0.1 mg/L 6-BA+0.04 mg/L NAA+0.005 mg/L TDZ,不定芽分化率和平均分化芽芽数分别达到最高的90%和6.8,芽长为2.14 cm;最佳生根培养基为1/2 MS+0.1mg/L IBA,生根率达90%。最后将这些再生植株成功驯化并移栽到温室。10 mg/L的卡那霉素可以抑制杂种小叶杨的诱导分化,20 mg/L的卡那霉素可以抑制杂种小叶杨不定芽的生根。本研究结果将有助于小叶杨抗病虫害等方面的遗传转化及相关研究,同时也将为小叶杨基因库的保存提供重要技术支撑。     

Somatic embryogenesis and Agrobacterium-mediated transformation of Japanese apricot (Prunus mume) using immature cotyledons

This study describes a successful method of somatic embryogenesis and genetic transformation using immature cotyledons of Prunus mume. Immature cotyledons from four different developmental stages of eight different P. mume cultivars were used for the experiments to optimize somatic embryogenesis and genetic transformation protocols. Somatic embryogenesis was induced when the explants were cultured on somatic embryo inducing medium consisting of MS basic medium supplemented with 1 μM 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (2,4-D) and 1 μM 6-benzyladenine (BA). They were cultured for 30 days and then transferred to somatic embryo propagation medium containing 0.1 μM α-naphthaleneacetic acid (NAA) and 5 μM BA. It appeared that the developmental stage of the immature cotyledons used as explants was the most important factor for somatic embryogenesis; higher frequencies of somatic embryogenesis were observed when the immature cotyledons were less than 5 mm in length regardless of cultivars. For genetic transformation, the immature cotyledons were inoculated with Agrobacterium tumefaciens EHA101 harbouring a binary plasmid vector with neomycin phosphotransferase II and an intron-interrupted β-glucuronidase gene under the control of cauliflower mosaic virus 35S promoter, and three transgenic plant lines were obtained from inoculated “Sirakaga” immature cotyledons. Transgenic somatic embryos and shoots were selected using 25 mg l⁻¹ kanamycin. Integration of transgenes in the genome of GUS-positive putative transgenic shoots was confirmed by PCR and Southern blot analyses.     

柑橘转基因胚性愈伤组织的筛选与再生

转化子的高效筛选与再生是获得转基因植株的关键。为快速有效地筛选出转化子,并尽可能在较短时间内获得纯合的转基因植株,开展了柑橘胚性愈伤组织的转化研究。以椪柑、冰糖橙、默科特橘橙等胚性愈伤组织为外植体,采用根癌农杆菌介导法进行转化试验,根据愈伤组织再生过程中不同发育阶段的组织对抗生素的敏感程度及在不同筛选压下抗性组织的生长情况,提出了＂5步筛选再生法＂,获得了大量的再生细胞系,并经GUS检测证实为转化子。     

In vitro selection of tomato transformants at the immature embryo stage

Summary A method is described for selecting resistant transformed tomato genotypes in vitro at the stage of immature embryos. The utilization of HLH nutrient medium with the selective agent kanamycin is proposed. Normal development of seedlings from immature embryos, which do not form callus, is a good and true indicator for isolation of resistant genotypes. The immature embryos do not germinate and develop on MS selective medium.     

条斑紫菜壳孢子的抗生素敏感性研究

以往研究紫菜细胞对抗生素的敏感性时,常以叶状体的酶解单离体细胞为材料,但由于来自同一个叶状体的体细胞处于不同的分化阶段,离体培养时,体细胞的成活、再生和发育途径均不相同,从而无法准确地判断抗生素对紫菜离体细胞的生长和发育影响。以成活、萌发和发育途径等几乎一致的条斑紫菜壳孢子为研究材料,较系统地观察了3种抗生素对壳孢子的成活、生长和发育的影响。结果表明：卡那霉素能促进条斑紫菜壳孢子的萌发、生长和发育。加卡那霉素培养7 d,26%的壳孢子萌发体,其细胞数多于20个,比对照组多2倍,培养11 d和18 d,萌发体的平均长度分别为对照组的1.6倍和2.1倍。氨苄青霉素能显著地抑制条斑紫菜的壳孢子萌发、生长和发育,造成细胞的分裂速度减缓、叶状体发育异常。加氨苄青霉素培养7 d,80%的壳孢子萌发体的细胞数少于15个,培养11 d和18 d,各试验组的壳孢子萌发体的平均长度均显著低于对照组,并且随着氨苄青霉素浓度的提高,萌发体的平均长度下降。氯霉素对条斑紫菜的壳孢子具有强烈的致死作用。加氯霉素培养7 d,浓度大于100 μg/mL的各试验组的壳孢子萌发体全部死亡;培养11 d,低浓度组（50 μg/mL）的萌发体也全部死亡,90%以上的萌发体的细胞数小于5个。由此得出,氯霉素是开展条斑紫菜基因工程的理想抗性选择压力。