3种检测方法在脱毒马铃薯种薯病毒检测中的应用及检测效果比较

为进一步明确适用于脱毒马铃薯种薯的病毒检测方法,为脱毒马铃薯生产提供更为有效和准确的病毒检测技术指导。应用反转录聚合酶联式反应(RT-PCR)、双抗体夹心-酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)以及胶体金免疫层析技术(GICA)3种方法,对脱毒马铃薯生产中的马铃薯X病毒(PVX)、S病毒(PVS)进行检测,在不同品种及不同繁育等级的种薯中分别比较3种方法的检测效果。结果表明,RT-PCR对马铃薯原原种中的2种病毒检测效果显著优于其他2种方法;3种方法对一级种的2种病毒检测效果无显著差异。RTPCR非常适用于原原种病毒的检测;ELISA方法对原种及一级种大样本抽检更为适用,而GICA因成本高,更适宜一级种小样本的快速抽检。     

金免疫层析法检测囊虫循环抗原试验研究

应用胶体金和免疫层析技术进行了检测金免疫层析法(GICA)囊虫循环抗原(CA)试验研究。5株抗囊虫McAb和一株多抗用于最佳配对的筛选,一株用于标记胶体金,另一株包被NC膜。以双抗体夹心ELISA为对照,GICA用于CA检测,观察其敏感性、特异性和稳定性。结果显示,以McAb 1A5和1B6配对的结果最佳,1A5最适标记量为10μg／mL,186最佳包被浓度为1 g／L;用GICA和ELISA两种方法检测囊虫CA,痈猪血清和囊液的符合率达100％,病人血清和脑脊液的符合率达80％;CA最低检测量为10 ng,检测正常猪、人及其他疾病血清,均呈阴性;检测时间5-15 min,整个实验仅一步操作;GICA试纸条分别在4℃和室温下保存105 d以及在37℃保存45 d,检测结果均未发现改变。以上结果表明,快速检测囊虫循环抗原的金免疫层析法具有简便、快速、敏感、特异和稳定的特点,适合基层使用。     

胶体金免疫层析法测定动物组织中氯霉素残留

应用胶体金免疫层析法对动物组织中的氯霉素残留进行检测,研究该方法的灵敏度、假阳性率、假阴性率及特异性。结果表明,用胶体金免疫层析法测定猪肉、鸡肉、鱼、虾中的氯霉素,检测限均为0.3g/kg,假阳性率和假阴性率皆为0%;方法的特异性较好,对其他抗生素无交叉反应;检测加标样本的结果与液相色谱-串联质谱法基本一致。可见,该方法简便、快速、准确、稳定,可作为动物组织中氯霉素残留现场快速检测的一种有效手段。     

An adhesion molecule-based colloidal gold immunochromatography assay strip for rapidly and specifically detecting chicken antibodies against Mycoplasma gallisepticum

The fragment of the VlhA1.2 gene was cloned from a Mycoplasma gallisepticum (MG) DNA library by serial PCRs after the same-sense mutagenesis of three TGA codons encoding tryptophan (Trp). Following transforming the generated plasmid of pKG-VlhA1.2, the recombinant VlhA1.2-GST fusion protein of 92 kDa was induced and recognized by anti-MG sera. After GST-affinity chromatographic purification, the VlhA-based colloidal gold immunochromatography assay (GICA) strips were generated. The GICA strips specifically detected anti-MG antibodies, but not antibodies against Mycoplasma synoviae and other positive sera against non-MG pathogens tested. The GICA strips were 128-fold more sensitive to detect anti-MG antibodies, as compared with traditional serological methods and were stored at 4 °C for 15 months without loss of their sensitivity and specificity. Analysis of sample revealed that, the GICA strips were highly sensitive, specific and stable for the on-site surveillance of MG infections by unskilled users.     

利用多肽抗原建立同时检测 CSFV 和PRRSV 抗体的胶体金免疫层析方法

利用合成多肽作为抗原,建立一种同时检测猪瘟病毒（CSFV）和猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）抗体的胶体金免疫层析方法。用人工筛选合成的 CSFV 多肽和 PRRSV 多肽葡聚糖偶联物作为包被抗原,以多肽-Biotin-链霉亲和素作为胶体金标记物,羊抗猪 IgG 包被硝酸纤维膜作为质控带,建立了同时检测CSFV 和 PRRSV 抗体的胶体金免疫层析方法（GICA）。结果表明,多肽与葡聚糖和生物素的偶联效率较高,分别为84．65％和91．37％;链霉亲和素与胶体金结合最佳 pH 和最佳标记量分别为8．2μg／mL 和30μg／mL。试纸卡灵敏度试验表明,血清1∶80稀释仍可检出,与 Idexx ELISA 试剂盒检出结果基本一致,特异性良好,不与伪狂犬病病毒、口蹄疫病毒、猪圆环病毒和细小病毒的阳性血清发生交叉反应。与 Idexx ELISA 试剂盒平行检测结果表明,CSFV 抗体总体符合率为86．36％;PRRSV 抗体总体符合率为83．33％。说明利用偶联多肽制备的试纸卡灵敏度高,特异性好,能够同时检测两种病毒抗体,适于基层养殖场使用。     

小鼠肝炎病毒金标快速检测方法的建立

本试验旨在探讨一种能够快速、简便及特异检测MHV病毒的金标检测方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗小鼠肝炎病毒(MHV)抗体,选择优化层析条件,建立双抗体夹心模式的免疫层析法试纸条对MHV进行检测。20 nm左右的胶体金颗粒、5.05 μg为最低稳定抗体量(稳定0.5 mL胶体金)、M135层析材料、3%BSA是最佳封闭液。640 μg/mL抗体蛋白为最适检测线包被浓度,而800 μg/mL抗体蛋白为质控线最适包被浓度。此试纸条能10 min快速特异地检测出MHV抗原,阳性时检测线和质控线均显示红色,阴性时则只有质控线显示红色。结果表明,胶体金免疫层析方法能快速、特异、稳定地检测MHV抗原。     

胶体金免疫层析法快速检测水产品中呋喃妥因代谢物残留

采用胶体金免疫层析技术(GICA)测定水产品中的呋喃妥因代谢物残留,并用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)对实验结果进行确证。结果显示,胶体金免疫层析法的检测限为1.0μg/kg,假阳性率不大于5%,假阴性率为0;对实际样本的检测结果与LC-MS/MS法一致。研究表明,胶体金试纸条法操作简便、快速,成本低,为水产品中呋喃妥因代谢物的残留检测提供了快速筛选方法,而LC-MS/MS法灵敏度高,结果准确,适用于阳性样本的确证和精确定量。     

胶体金免疫层析技术在动物疾病诊断中的应用进展

胶体金免疫层析技术是新发展出来的一种临床快速诊断技术,因具有操作简便、快捷、操作人员无需技术培训等特点而备受各领域关注。近些年来,随着该技术的日臻成熟,在病原诊断和小分子物质检测等方面得到了越来越广泛的研究与应用。本文主要对胶体金免疫层析技术的基本原理以及该项技术最近几年内在兽医临床诊断方面的研究与应用情况进行综述。     

猪流行性腹泻胶体金抗体检测技术的建立及其应用

摘 要：目的：建立一种高效、经济、简便适用于基层防疫检疫人员使用的猪流行性腹泻(PED)疾病的检测方法。方法：参考已知的胶体金免疫层析法(GICA)工作原理基础之上,将葡萄球菌蛋白A(SPA)进胶体金标记作为指示介质,将基因工程表达PEDV M蛋白抗原和自制的抗SPA多抗血清包被硝酸纤维素膜(NCM) 分别作为检测线和质控线,由此制成一种检测PEDV血清抗体的快速诊断试纸。其特异性、敏感性试验与ELISA进行比较。结果：该GICA与参考检测方法ELISA具有相近的灵敏度,在二者检测的75份临床样本中有65份共同检测为阳性结果,7份共同检测为阴性结果,其符合率达96％。结论：该GICA检测技术的建立为检测PEDV抗体提供了一种快速简便的方法。     

ELISA和GICA快速检测水产品中氯霉素残留的比较

比较了水产品中氯霉素残留的ELISA和GICA检测方法.经测定,GICA检测限为1.000μg/kg.GICA 对ELISA的阴性符合率为94.7%,阳性符合率为92.3%,总符合率为92.5%.结果表明:GICA方法操作简单、快速、特异性强、重复性好,适合水产品中氯霉素残留的现场筛选.