中华鳖对温和气单胞菌口服微球缓释疫苗的免疫应答

以中华鳖温和气单胞菌 (Aeromonas sobria,As) Z- 1株灭活全菌液 ,采用生物降解性高分子材料制成缓释微球疫苗 ,口服免疫中华鳖 ,测定血清中凝集抗体、血液中白细胞杀菌率以及对活菌攻击的免疫保护率。结果表明 ,中华鳖口服微球疫苗 ,其血清中凝集抗体效价和血液中白细胞杀菌百分率均可达到灭活菌液注射组相当的水平 (P>0 .0 5 ) ,显著高于对照组 (P<0 .0 1) ;微球疫苗口服组和灭活菌液注射组的免疫保护率分别为 94 .7%和 89.5 % ,两者差异不显著 (P>0 .0 5 ) ,而对照组小鼠 95 %死亡。采用可生物降解微球作为中华鳖气单胞菌口服疫苗的载体系统是可行的。     

斑点叉尾鮰对3种致病菌灭活菌苗的免疫应答

将经福尔马林灭活的柱状嗜纤维菌(Cytophaga columnaris)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophi-la)和叉尾鮰爱德华菌(Edwardsiella ictaluri)作为免疫原,分别接种斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatusRafinsque)后,通过测定受免鱼的交叉凝集抗体效价、头肾和血液中吞噬细胞的吞噬活性及用A.hydrophila活菌攻毒的方法,探讨了斑点叉尾鮰对3种灭活菌苗的免疫应答状况。试验结果表明,对斑点叉尾鮰经腹腔注射接种3种灭活菌苗能刺激受免鱼产生较强的免疫应答,受免鱼产生了对3种致病菌的特异性凝集抗体和交叉凝集抗体,与未接种菌苗的对照鱼相比,受免鱼头肾和血液中吞噬细胞的吞噬活性明显上升,活菌攻毒的结果也证明了受免斑点叉尾鮰对C.columnaris,A.hydrophila和E.ictaluri产生了不同程度的相对免疫保护率(RPS)。     

Host factors associated with the detection of Aeromonas salmonicida and Yersinia ruckeri in Ontario, Canada government fish hatcheries

This paper presents an epidemiological investigation of Ontario Ministry of Natural Resources Fish Health Laboratory data from 1981 to 1997, to determine whether fish species and age were associated with lot-level detection of Aeromonas salmonicida and Yersinia ruckeri in hatchery fish. In stepwise logistic regression, the species brook trout and back-cross (lake trout crossed with the hybrid “splake”) were more likely to test A. salmonicida-positive compared to all other species reared in the hatcheries. Similarly, the species brook trout was significantly more likely to test Y. ruckeri-positive compared to all other species. For both pathogens, the 1–5-month age group was associated significantly with detection. These findings suggest that purposive sampling of higher-risk fish lots could increase the likelihood of detecting both study pathogens.     

两株气单胞菌的分离与鉴定

从福建省某牛蛙养殖场病死牛蛙和某鸭场病死鸭体内分离到两株细菌，检验结果表明，两株分离菌均为有运动力的革兰氏阴性杆菌。根据其临床症状、细菌培养特性、生化特性、动物回归试验以及溶血试验等一系列试验，研究证明牛蛙感染的病原为嗜水气单胞菌，鸭感染的病原为温和气单胞菌。     

用发酵罐制备嗜水气单胞菌疫苗用菌液培养条件的优化

本试验探讨了用发酵罐培养嗜水气单胞菌灭活疫苗生产菌株Ｊ－１株菌液的最佳条件。分别以发酵罐和摇床在不同的培养条件下培养Ｊ－１株制备菌液,前者１２个批次,后者６个批次。比较不同的培养条件对细菌菌体数量及ＨＥＣ毒素产量的影响。结果表明：发酵罐培养优于摇床培养,以产毒素培养基于２８℃发酵罐通气培养Ｊ－１株,培养２８小时效果最佳,培养菌液含菌量达２．９×１０１０ｃｆｕ／ｍｌ,培养液上清的溶血价达２７,发酵液中残糖为０．１２ｇ／Ｌ,符合发酵工艺要求。     

嗜水气单胞菌J-1株OmpA融合蛋白的高效表达及免疫原性分析

以嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）J-1株基因组为模板，根据GenBank已发表的嗜水气单胞菌外膜蛋白的基因序列设计1对引物，扩增去除信号肽序列的成熟外膜蛋白OmpA的基因片段，定向克隆至表达质粒pET32a（＋）中，重组质粒经限制性酶切鉴定后测序。结果表明，插入片段长度为948bp，与NCBI上登录的几个相关序列相比，同源性在93．1％-95％之间，缺失4个氨基酸。将重组原核表达质粒pET32a-OmpA转化至大肠杆菌BL21（DE3），经诱导可表达分子量约57．4kD的蛋白，凝胶薄层扫描显示OmpA在转化菌中表达量占全菌蛋白的50％以上。用兔抗J-1株总外膜蛋白血清进行Western blot，在57．4kD处有明显反应条带。融合蛋白经Ni-NTA树脂柱亲和层析纯化后免疫新西兰兔制备抗血清，ELISA效价达1：12800以上。Western blot检测结果显示，该血清与9株具有代表性的气单胞菌的分子量约35kD的外膜蛋白均有较强反应，说明所表达的融合蛋白不仅保持原有外膜蛋白的免疫原性，而且提示OmpA可能是嗜水气单胞菌的共同保护性抗原。[中国水产科学，2008，15（2）：301—306]     

南方鲇源豚鼠气单胞菌胞外产物活性与致病性研究

采用琼脂扩散法测定了南方鲇源豚鼠气单胞菌胞外产物酶活性和溶血活性,同时对胞外产物的细胞毒性和其致病性进行了研究。结果显示:南方鲇源豚鼠气单胞菌胞外产物具有蛋白酶、脂酶、明胶酶和脲酶活性,但不具有淀粉酶和卵磷脂酶活性,具有很强的溶血活性和细胞毒性。肌肉注射感染发现,其对南方鲇有强致病性,其LD50为每千克鱼体重0.802 mg;注射后的南方鲇肌肉、心、肝、肾、脾、肠和胃等组织发生了严重组织病理变化,骨骼肌和心肌坏死断裂,炎症细胞浸润;肝脏严重空泡变性;肾小管上皮细胞变性、坏死、间质内大量炎症细胞浸润;脾充血、出血,淋巴细胞减少,胃肠黏膜上皮细胞变性、坏死、脱落。     

环丙沙星对水产动物气单胞菌的药效学研究

环丙沙星为第三代步诺酮类药，是一种安全。高效的抗菌剂。该药对临床分离的几株致病性气单胞菌的最小抑制浓度（MIC）为0.0098μg/ml。人工感染治疗试验表明，该药以1mg/（kg.d）剂量灌服，连用5天，能有效控制鲫鱼败血症的暴发。     

嗜水气单胞菌UDP-乙酰葡萄糖胺-4-差向异构酶基因的克隆表达及酶的性质

通过水生动物源性嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila，Ah）强毒株J-1株与弱毒株MR-1株抑制差减杂交得到gneJ差减片段，该片段与创伤弧菌（Vibrio vulnificus）和人源嗜水气单胞菌的UDP-乙酰葡萄糖胺-4差向异构酶基因有较高的同源性。扩增完整的gneJ基因，进行分布检测并将其克隆至质粒pET32a（＋），在大肠杆菌（Escherichia coli）BL21中进行异源表达，SDS-PAGE结果显示，重组表达蛋白的分子量约59．7kD，与理论推测值基本相同。酶活性分析表明，该重组蛋白可将UDP-乙酰葡萄糖胺转化为UDP-乙酰半乳糖胺，确证gneJ基因编码蛋白为UDP-乙酰葡萄糖胺-4-差向异构酶。Western Blot分析显示，嗜水气单胞菌J-1株胞外产物的兔抗血清可识别该重组蛋白，表明该蛋白与天然蛋白有相同的抗原性。以重组蛋白为免疫原，对小鼠进行动物保护实验，结果显示，该重组蛋白对小鼠有60％的保护率，证明UDP-乙酰葡萄糖胺-4差向异构酶可作为亚单位疫苗的侯选成分。     

草鱼三元病原菌融合子的构建及生物学特性

采用细胞融合技术首次将肠型点状产气单胞菌菌株和鱼害粘球菌菌株融合，构建二元融合菌株AM-1，再将AM-1与荧光假单胞菌菌株融合，构建三元融合菌株AM-2。对AM-1和AM-2菌株的形态结构、生理生化特性、致病性、抗原性、抗体效价进行分析。结果表明，AM-1活菌椭圆形，无鞭毛，死菌短杆状，AM-2菌株短杆状，有鞭毛，它们的生理生化性状介于3原始亲本菌株之间；用AM-2菌株对当年健康草鱼种进行人工感染攻毒，被攻毒草鱼种具有烂鳃病、赤皮病及肠炎病的部分症状；AM-2菌株抗原的受免草鱼种对荧光假单胞菌、鱼害粘球菌和肠型点状产气单胞菌菌株的免疫保护率分别达64.90％、68.00％、67.00%，抗体效价最高达1∶256、1∶256、1∶512。测定了AM-1和AM-2菌株及亲本DNA含量并进行了琼脂糖凝胶电泳分析，AM-1和AM-2菌株DNA含量明显高于任一原始亲本。图4表6参23