奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌临床分离株生化特性与菌体蛋白免疫原性分析

摘要：病原学调查发现金黄色葡萄球菌是奶牛乳腺炎的最主要致病菌之一。从53株金黄色葡萄球菌乳样分离株中挑选了培养和形态典型的六株进行生化试验和传代稳定性试验，进一步研究这六株菌的凝固酶、溶血素等致病性因子和耐药性。对菌体裂解产物进行蛋白电泳图谱分析发现菌体蛋白条带具有很高的相似性,TQ-1株电泳蛋白条带密度较其它几株高。用其中四株生化典型、传代稳定、致病因子较多的菌株免疫兔，制备高免血清，分析全菌抗原的蛋白转印图谱，发现XG-2株在52KD处有特殊保护性抗原条带。综合本文各试验结果，确定以TQ-1和XG-2株为疫苗候选株。     

猪链球菌病诊断技术研究进展

长期以来,虽然猪链球菌病广泛存在于各猪场,但由于该病流行的血清型多表现温和,对养猪业的影响似乎不大。然而,2005年暴发于四川省部分地区的猪链球菌病2型却彻底改变了人们的这种印象,引起了极大恐慌。现正值夏季,是猪链球菌病容易发生的季节,大家要提高警惕,严防猪链球菌病的暴发流行。     

生长育肥猪群经济损耗性疾病的防控

自2006年以来,以多种病毒、细菌混合感染而发生的猪呼吸道疾病综合征造成猪群高死亡、高淘汰,经济损失重大,养猪市场也随之巨幅振荡。2010年冬天以来的病毒性腹泻也给众多规模化猪场＂当头一棒＂。因而,很多同行认为：＂我国养猪行业当前的首要问题是提高猪群的成活率＂。     

嗜水气单胞菌UDP-乙酰葡萄糖胺-4-差向异构酶基因的克隆表达及酶的性质

通过水生动物源性嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila，Ah）强毒株J-1株与弱毒株MR-1株抑制差减杂交得到gneJ差减片段，该片段与创伤弧菌（Vibrio vulnificus）和人源嗜水气单胞菌的UDP-乙酰葡萄糖胺-4差向异构酶基因有较高的同源性。扩增完整的gneJ基因，进行分布检测并将其克隆至质粒pET32a（＋），在大肠杆菌（Escherichia coli）BL21中进行异源表达，SDS-PAGE结果显示，重组表达蛋白的分子量约59．7kD，与理论推测值基本相同。酶活性分析表明，该重组蛋白可将UDP-乙酰葡萄糖胺转化为UDP-乙酰半乳糖胺，确证gneJ基因编码蛋白为UDP-乙酰葡萄糖胺-4-差向异构酶。Western Blot分析显示，嗜水气单胞菌J-1株胞外产物的兔抗血清可识别该重组蛋白，表明该蛋白与天然蛋白有相同的抗原性。以重组蛋白为免疫原，对小鼠进行动物保护实验，结果显示，该重组蛋白对小鼠有60％的保护率，证明UDP-乙酰葡萄糖胺-4差向异构酶可作为亚单位疫苗的侯选成分。     

秋季猪常发病的预报及防治

秋季气候多变，易诱使猪只发病．如果预防不及时．会给养猪户带来较大的经济损失。现就秋季猪多发的7种疾病作一简要介绍．希望能引起广大养殖户的重视．有针对性地强化饲养管理措施，做好预防工作。     

冬季畜禽常发病的预报及防治

冬季天气寒冷,畜禽在饲养管理过程中,易发生多种疾病。因此,及时正确地防控好这些疾病不仅可以提高畜禽的生产性能,还能防止疫病的大规模暴发,有很重要的意义。     

禽流感病毒A/Duck/Shnghai/02/99(H9)HA基因的克隆及序列分析

根据GenBank已公布的禽流感病毒H9亚型血凝素蛋白编码基因,设计了一对引物(H1和H2),RT-PCR扩增禽流感病毒A/Duck/Shanghai/02/99(H9)的HA基因,扩增片段与载体pUCm-T的连接产物转化大肠杆菌感受态细胞,重组质粒pUCm-T-HA经限制性内切酶酶切和PCR鉴定后进行测序。BlastN分析结果显示该分离株血凝素编码基因与已发表的鸭源禽流感病毒A/Duck/Shantou/1605/01(H9N2)和A/Duck/Hong Kong/Y280/97(H9N2)血凝素编码基因的核甘酸序列同源性为98%,从而从分子水平确定了该分离株为H9亚型禽流感病毒。     

单增李斯特菌溶源性噬菌体的诱导及鉴定

利用丝裂霉素C诱导获得单增李斯特菌溶源性噬菌体,并确定其核酸类型。PCR及其扩增产物的序列测定检测原噬菌体,透射电子显微镜观察丝裂霉素C诱导获得的溶源性噬菌体颗粒,DNase I、RNase A和绿豆核酸酶分别消化噬菌体基因组,确定噬菌体的核酸类型。结果显示,38株单增李斯特菌分离株中的16株在tRNAArg位点携有原噬菌体,其中1株可诱导出噬菌体颗粒,该噬菌体为长尾噬菌体,核酸为dsDNA。噬菌体的成功诱导为噬菌体及其功能基因的开发利用奠定了基础。     

PCR方法检测2型猪链球菌2种毒力因子

根据 2型猪链球菌毒力因子溶菌酶释放蛋白 (MRP)与细胞外蛋白因子 (EF)基因 (mrp与 epf)序列 ,分别设计、合成一对引物 ,建立聚合酶链反应 (PCR)方法。该方法扩增出 2型菌株的 mrp大小为 885 bp,epf为 62 6bp,而对马链球菌兽疫亚种 (C群 )、猪丹毒杆菌、猪肺疫巴氏杆菌、猪肺炎霉形体等 PCR均未扩增出任何条带。用 Xba 和 H ae 分别酶切 PCR扩增产物 ,均获得与预计一致的酶切图谱 ,PCR扩增产物测序结果显示 :其基因序列分别与 Gen Bank上公布的mrp全基因第 5 0 0～ 1 3 1 5位碱基及 epf全基因第 2 441～ 3 0 2 8碱基对一致。PCR检测的敏感度可达 1 0 0个细菌。用建立的 PCR对从病猪体内分离的菌株进行检测 ,检测的 1 5株 2型分离株中有 1 3株 mrp与 epf均为阳性 ,为典型的高毒力表现型菌株 (mrp epf ) ,1株为 mrp epf- ,1株为 mrp- epf- 。     

禽流感灭活苗不同免疫程序对抗体消长的影响

对1日龄矮D商品雏鸡随机分为A、B、C、D、E和对照组共6组,每组3个重复,每个重复100只,进行禽流感H5+H9疫苗的免疫。对照组不接种,A组~E组依次采取1日龄、1日龄和10日龄、1日龄和20日龄、10日龄和20日龄(0.5mL)、10日龄和20日龄免疫接种,每次接种0.3mL。每周采血1次,采用HA-HI国标法检测H5和H9抗体水平,以研究禽流感灭活苗H5、H9不同免疫时间与剂量的抗体消长规律。结果表明,21日龄后各试验组抗体水平均极显著地高于对照组,免疫效果显著。仅进行1日龄免疫一次,其抗体水平较低,达不到免疫保护要求。20日龄增大免疫剂量有助于提高抗体滴度,禽流感灭活苗于不同时间进行免疫均能达到预期的免疫效果,免疫应采取二次免疫,免疫间隔时间不大于10d。