柔嫩艾美耳球虫感染鸡盲肠和脾脏一氧化氮合酶的表达

采用NADPH—d(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate—diaphroase)组织化学法观察了雏鸡感染柔嫩艾美耳珠虫(E．tenella)后一氧化氮合酶(N0S)在盲肠和脾脏中的分布与表达情况。试验结果表明，所有正常鸡盲肠粘膜下层和肌层均有较深的着色，根据以往的资料和N0S的表达特性初步判断为神经元型N0S(nNOS)；试验鸡在感染后3～5d，盲肠粘膜上皮和肠腺上皮也有较深的着色，并从感染后7d开始着色减弱；而对照组鸡盲肠粘膜上皮和肠腺上皮以及对照组和试验组的脾脏几乎不着色或着色很浅。试验结果提示，盲肠粘膜上皮和肠腺上皮的着色可能是诱导型N0S(iN0S)表达的结果，而由其产生的N0参与雏鸡球虫感染过程。     

鸡柔嫩艾美耳球虫不同抗药性虫株的种内多态性研究

应用RAPD技术进行柔嫩艾美耳球虫4个单一抗药性虫株与1个敏感株的基因组DNA多态性分析，发现4个抗药性虫株及敏感株之间的相似值均大于99%；OPAO3引物对抗盐霉素株扩增出一条约500bp的特异条带，OPH02引物对抗克球粉株和抗盐霉素株均扩增出了约1kb的第三条主带，这些特异条带的出现很可能与球虫抗药性基因有关，有可能用于抗药性虫株的诊断与鉴定。     

2株柔嫩艾美耳球虫对5种抗球虫药的抗药性

选择130只21日龄雏鸡，研究了柔嫩艾美耳球虫（E.tenella)南京株和凤阳株对地克珠利（Diclazuril)、马杜霉毒（Maduramicin)、氯羟吡啶（Clopidol)、氯苯胍（Robenidine)和氨丙啉（Amprolium)的抗药性。试验鸡随机分成13组，其中每株球虫均设5个感染用药组，1个感染不用药组，另设1个不感染不用药组，每组10只鸡。以POAA，RLS，ROP，ACI作为指标。结果表明，2株柔嫩艾美耳球虫均对氨丙啉轻度抗药，对地克珠利敏感或轻度抗药，对氯羟吡啶中度抗药。对马杜霉和氯苯胍中度抗药或安全抗药。提示：目前在凤阳地区可合理地使用地克珠利和氨丙啉，对氯羟哟啶应慎用，对马杜霉素和氯苯胍须减少或暂停使用。     

雏鸡实验感染柔嫩艾美尔球虫的病理学研究

１１４只２３日龄无球虫罗斯小公鸡，分为三组，第１和第２每只鸡分别口服１．０８×１０＾５和５．４２×１０＾４个柔嫩艾美尔球虫孢子化卵囊，第３组对照。结果，第１、２组在感染后第４天呈现血便，第５天发性死亡，其死亡率分别为１３．６％５０和５．４％。尸体剖检，盲肠明显肿大，肠壁出血；后期，盲肠萎缩，并出现干酪样肠 芯。病理组织学变化特点，为出血一坏死性或出血一卡地他性盲肠炎，以及出血一卡他性直肠炎。第８天     

5株柔嫩艾美耳球虫对4种抗球虫药的抗药性

选择260只19日龄雏鸡，随机分成26组，每组10只，研究柔嫩艾美耳球虫(E．tenella)南京株、凤阳株、扬州株、宣城株和蒙城株对地克珠利(Diclazuril)、马杜霉素(Maduramicin)、氯羟吡啶(C1opido1)、氯苯胍(Robenidine)的抗药性。每株球虫均设4个感染用药组、1个感染不用药组，另外设1个不感染不用药组。以POAA、RLS、ROP、ACI作为指标，判定5株球虫对4种药物的抗药性。结果表明凤阳株、扬州株和蒙城株分别仅对马杜霉素、氯苯胍、地克珠利敏感，南京株和宣城株对该4种药物均已产生不同程度的抗药性。提示目前在凤阳、扬州和蒙城地区可分别合理地使用马杜霉素、氯苯胍和地克珠利，对其它药物须减少或暂停使用。     

常山口服液抗鸡柔嫩艾美耳球虫广东分离株的疗效研究

研究旨在明确常山口服液治疗鸡球虫病的疗效和最佳给药剂量。试验选取90只14日龄健康雏鸡,随机分为9组,每组10只,即常山口服液组(分别为2.5、5.0、15.0、25.0、35.0、50.0 m L/L水剂量)、妥曲珠利组(1 m L/L水)、感染对照组和健康对照组。除健康对照组外,每只鸡接种7×104个柔嫩艾美耳球虫广东分离株的孢子化卵囊,饮水给药7 d,观察其疗效。结果显示,常山口服液各剂量组其盲肠和十二指肠的肿胀现象较感染对照组明显减轻,血液性内容物明显减少,抗球虫指数(ACI)分别为87.7、136.2、141.8、136.2、109.7和108.0,均高于感染对照组;常山口服液按5.0、15.0及25.0 m L/L水剂量给药,抗球虫指数均高于对照药物妥曲珠利组(ACI=124.8)。结果表明,人工感染条件下,常山口服液较化学药物妥曲珠利具有更好的抗球虫疗效,且作为中药提取物,疗效对比试验效果较为理想。     

藏鸡和隐性白羽鸡感染柔嫩艾美耳球虫后免疫相关基因的表达变化分析

试验旨在从免疫遗传学的角度初步探讨藏鸡（TC）和隐性白羽鸡（RWC）对柔嫩艾美耳球虫（Eimeria tenella）易感性差异的分子机制,分别用1×10⁵个柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊感染对球虫具有抗性的藏鸡和易感的隐性白羽鸡。应用实时荧光定量PCR检测藏鸡和隐性白羽鸡感染前0 d和感染后第2、4、6和8天脾脏、盲肠、胸腺、法氏囊中γ-干扰素（IFN-γ）、白细胞介素-2（IL-2）、IL-16、Toll样受体（TLR3）和TLR15免疫相关基因的转录水平变化。结果显示,藏鸡脾脏IFN-γ、IL-2、IL-16及TLR3、TLR15免疫相关基因转录水平于感染后第4和8天明显上调,隐性白羽鸡则无明显变化。藏鸡盲肠IFN-γ转录水平在感染后第2天显著上调（P<0.05）,TLR3在感染后第4天起显著上调（P<0.05）,其余免疫相关基因变化幅度不大;隐性白羽鸡盲肠IFN-γ转录水平在感染后第8天显著上调（P<0.05）,IL-2在感染后第2天起显著上调（P<0.05）,IL-16在感染后第6天起显著上调（P<0.05）,TLR3在感染后第2和8天显著上调（P<0.05）,TLR15变化幅度不大。各免疫相关基因在2个品种鸡胸腺和法氏囊中均出现上调或下调,但除藏鸡法氏囊TLR3和TLR15转录水平变化幅度相对较大外,其余免疫相关基因与感染前相比变化幅度不大。以上结果显示,球虫感染主要导致藏鸡和隐性白羽鸡脾脏和盲肠中的各免疫相关基因出现显著变化,表明宿主的遗传背景在一定程度上可影响球虫感染的免疫应答。     

假蒟提取物对感染柔嫩艾美耳球虫鸡血液指标的影响

本试验旨在研究假蒟提取物对感染柔嫩艾美耳球虫鸡血液指标的影响。270只1日龄海南文昌公鸡,随机分为6个组,每组3个重复,每重复15只,T1、T2和T3组为对照组(依次分为不感染不给药组、感染不给药组、感染给药组);T4、T5和T6组为假蒟添加组,分别在基础日粮中添加200、400、600mg/kg假蒟提取物粉剂。15日龄时,每组随机抽取30只鸡,除T1组灌服生理盐水外,其他各组鸡均经口接种柔嫩艾美耳球虫卵囊悬液,分别于接种前1d,接种后3、6、9d清晨采血测定其血液指标。结果表明,与感染球虫不给药的T2组相比,假蒟组(T4、T5、T6)可以显著降低感染球虫鸡粪便中球虫卵囊值(P0.05)。假蒟组在感染球虫后第6天,与T1组比,RBC、HGB、HCT、Ca2+、Na+、Cl-、TP、ALB、GLB、TG、CHOL、T4等指标呈下降趋势;但在感染球虫后第9天,TP、GLB含量均显著高于T1组(P0.05);在感染球虫后第6天,假蒟组与对照组相比,ALT、AST浓度水平均显著降低(P0.05)。结果提示,假蒟提取物能提高感染球虫后鸡机体免疫机能,降低肝脏损伤,降低鸡感染球虫后粪便卵囊值,具有一定的抗球虫效果。     

细胞钙超载与鸡柔嫩艾美耳球虫病损伤关系

为探讨鸡柔嫩艾美耳球虫（E．tenella）宿主细胞损伤与钙超载的关系，采用组织定量检测、Von Kossa钙染色、焦锑酸钾电镜细胞化学技术对使用和未使用钙离子阻断剂的E．tenella感染鸡盲肠组织的细胞沉积钙、ATP酶、磷脂酶A2（PLA2）、游离脂肪酸和盲肠上皮细胞游离Ca^2＋的含量与分布进行了动态测定和分析。结果表明：（1）鸡患柔嫩艾美耳球虫病过程中，宿主细胞内钙和游离Ca^2＋明显增多（P〈0．01），并随盲肠损伤加重而增加；（2）在发病过程中盲肠组织Na^＋-K^＋-ATP酶、Ca^2＋-Mg^2＋-ATP酶、总ATP酶活性均有不同程度的下降，在感染严重期显著低于不感染对照组（P〈0．01）；（3）钙超载盲肠组织的PLA2活性和游离脂肪酸含量明显升高（P〈0．01），表明钙超载是鸡柔嫩艾美耳球虫病的一个重要损伤机制；（4）硝苯地平可以阻止Ca^2＋内流，减少宿主细胞内游离Ca^2＋，减轻宿主细胞的损伤，在本病发生的早期盲肠损伤较轻时，对鸡有一定的保护力，但随着疾病的发展，其作用下降。     

柔嫩艾美耳球虫表面抗原SAG2基因的克隆与表达

根据生物信息学预测的基因序列设计引物,应用RT-PCR方法从柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子总RNA扩增获得了鸡柔嫩艾美耳球虫表面抗原2(surface antigen 2,SAG2)基因序列,将其与pGEM-T easy载体连接后转化E.coliDH5α,筛选阳性克隆,以带有限制酶切位点的特异性引物用PCR方法扩增不含SAG2 N端信号肽序列的ORF序列后克隆至表达载体pET-32 a(+),构建了重组表达质粒pET-32 a(+)-SAG2,并将其转化至E.coliBL21(DE3)。经IPTG诱导,获得了SAG2重组抗原在大肠杆菌的高效表达,重组蛋白的表达量约占菌体总蛋白的35%,融合蛋白的分子量约为47 ku。菌体经超声处理后进行SDS-PAGE分析表明,表达蛋白以包涵体的形式存在。