不同生长时期凡纳滨对虾急性肝胰腺坏死病的检出与病原鉴定

随着集约化生产、养殖环境恶化,急性肝胰腺坏死病(AHPND)成为了当前制约对虾养殖效益的主要疾病之一。本试验以凡纳滨对虾不同生长时期的亲虾、虾苗、成虾作为研究对象,将对虾的肝胰腺进行初步富集后,采用荧光PCR和普通PCR的方法,检测样品中pirA^VP和pirB^VP毒素基因;对虾苗AHPND的病原进行分离鉴定、药敏试验和动物致病性试验。结果显示,在116份样品中检测到亲虾AHPND阳性3份,虾苗AHPND阳性7份,成虾AHPND阳性9份;从虾苗AHPND样品中分离纯化获得1株弧菌,经生化鉴定为副溶血性弧菌;16S rRNA系统发育树分析显示,该分离株与副溶血性弧菌聚为一类。药敏试验结果显示,该分离株对头孢西叮、头孢呋辛、复方新诺明等11种抗菌药敏感,对头孢噻吩耐药,对阿米卡星中介。动物致病性试验结果显示,健康凡纳滨对虾浸染1.8×10⁸ CFU/mL浓度的副溶血性弧菌菌液后,24 h内全部死亡,对虾的肝胰腺小管上皮细胞出现萎缩、变性、坏死等特征。本试验进一步掌握目前粤西地区不同生长时期凡纳滨对虾中AHPND的流行病学数据和...     

欧洲纵坑切梢小蠹的检疫鉴定研究

云浮口岸从土耳其进境木质包装中截获多头活小蠹虫,本研究对该小蠹虫的形态特征进行描述,同时采用小蠹科通用引物CI-J-2183和TL2-N-3014进行PCR扩增该虫的COⅠ基因序列。结果获得758 bp的基因序列,通过与Gen Bank数据库比对分析显示,该序列与Gen Bank数据库上的3条欧洲纵坑切梢小蠹COⅠ序列相似性高达99%;采用邻接法(NJ)构建的系统发育树也显示该虫与欧洲纵坑切梢小蠹亲缘关系极近且在同一进化分支中。结合形态特征和DNA条形码序列分析,可最终判定所截获昆虫为欧洲纵坑切梢小蠹。     

基于重组酶聚合酶扩增技术的玉米矮花叶病毒快速检测方法的建立

玉米Zea mays L.是重要的粮饲兼用作物。重要检疫性病毒玉米矮花叶病毒maize dwarf mosaic virus(MDMV)一直威胁玉米生产,为预防外来有害生物入侵,本研究以玉米可能携带的MDMV为目标,根据MDMV外壳蛋白(coat protein,CP)保守基因序列,基于重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA),设计了3对RPA引物,筛选并优化了反应体系,建立了MDMV的快速检测方法,最终的RPA反应体系中引物终浓度为0.4 μmol/L,反应温度为42℃,反应时间为20 min。该方法可特异性检测MDMV,对MDMV CP阳性质粒样品的检测灵敏度可以达到105拷贝/μL(≈369 fg/μL),高于RT-PCR的检测灵敏度。该方法具有快速准确等优点,可用于玉米种子或植株中携带MDMV的检测。     

番茄褐色皱果病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光RT-PCR检测方法的建立和应用

根据番茄褐色皱果病毒(tomato brown rugose fruit virus,ToBRFV)外壳蛋白(coat protein,CP)的保守基因序列设计l对特异性引物,建立了基于SYBR Green Ⅰ的ToBRFV实时荧光RT-PCR检测方法,并对其进行了特异性、灵敏度检测,对自然感染ToBRFV的番茄、辣椒...     

广东局首次检出检疫性有害生物——刺亦模草

<正>2016年3月,云浮出入境检验检疫局新港检验检疫科在对装载有原产摩洛哥大理石荒料的进口集装箱查验时发现了多种有害生物。经广东出入境检验检疫局技术中心植检室专家鉴定,检出了刺亦模草、莎草、紫草、菊科、蔷薇科等12种杂草。其中刺亦模草是我国进境植物检疫性杂草,这是广东云浮口岸首     

云浮口岸全国首次截获欧洲纵坑切梢小蠹

正2018年2月,云浮出入境检验检疫局工作人员对一批来自土耳其的大理石荒料查验时,在木质包装上截获多头小蠹虫,经广东检验检疫局检验检疫技术中心专家通过形态学鉴定和分子生物学技术鉴定,确认该虫为Tomicus destruens(Wollaston,1865)。因其尚无中文名,根据其拉丁文原意及形态特征,命名其中文名为欧洲纵坑切梢小蠹,后经中国检验检疫科学院动植物检验检疫信息资源共享服务平台查询,为     

扶桑绵粉蚧钙调蛋白基因的克隆与生物信息学分析

钙调蛋白(calmodulin,CaM)对生物体内多种Ca2+依赖的细胞功能和酶体系都有重要的调节作用。为研究扶桑绵粉蚧的信号转导受体蛋白,首次克隆了扶桑绵粉蚧钙调蛋白基因PsCaM的cDNA全长序列,其开放阅读框(ORF)包含447bp的片段,编码148个氨基酸。PsCaM基因由3个内含子和4个外显子组成。3个内含子的长度分别为73、81、72bp,分隔的4个外显子的长度分别为33、133、183、98bp。功能域分析结果显示:该蛋白具有2个EF-hand结构域,有13个Ca2+结合位点;该蛋白的理论等电点是6.21,属于稳定蛋白,且没有跨膜区域;通过同源建模获得了其蛋白的三维结构。多序列比较显示,PsCaM基因相对较保守。     

2012-2016年云浮口岸植物检疫现状及外来有害生物截获情况分析

[目的]掌握近年来云浮口岸进口货物携带外来有害生物的情况.[方法]对云浮口岸2012 ～2016年从进口货物中截获的植物疫情情况以及云浮口岸外来有害生物监测数据进行统计分析.[结果]2012 ～2016年云浮口岸共截获各类动植物139种,其中昆虫85种,共195批次;植物39种,共119批次;螨类1种,共5批次;线虫2种,共10批次;蜗牛5种,共12批次;蜘蛛6种,共204批次;真菌1种,共2批次.在云浮口岸截获的外来有害生物中,比萨茶蜗牛系全国口岸首次截获,欧洲榆小蠹和刺亦模草为广东检验检疫局口岸首次截获,红火蚁、双钩异翅长蠹、桔小实蝇、鹰嘴豆象、刺茄、苍耳属(非中国种)、四纹豆象等检疫性昆虫和植物系云浮口岸首次截获.云浮口岸近年来的动植物检疫工作有效地阻止了这些外来有害生物的入侵与传播.此外,从印度、巴基斯坦、伊朗、土耳其等国家进口石材荒料包装粗放,卫生状况较差,携带动植物疫情风险较大.最后根据进口石材的特点和疫情的分析结果,提出了若干条加强进境石材类检疫监管的措施.[结论]该研究结果为今后出入境检验检疫部门在入境植物检疫以及构建生物安全防控体系工作方面提供了参考.     

马铃薯斑纹片病菌含扩增内标的双重实时荧光PCR检测

马铃薯斑纹片病菌(Candidatus Liberibacter solanacearum)是一种主要为害伞形花科和茄科植物的重要有害生物,目前无法人工培养且可随种子远距离传播。准确灵敏的PCR检测方法对病害预警和防止扩散具有重要意义。本文通过复合引物法构建扩增内标(internal amplification control,IAC),建立了马铃薯斑纹片病菌含扩增内标的双重实时荧光PCR检测体系,有效指示了PCR检测过程中的假阴性现象。试验结果表明:双重与单重实时荧光PCR的检测灵敏度一致,当扩增内标添加量为3.4×10^-5ng时,样品DNA的检测低限为0.4 ng。40个样品的检测结果显示,与单重实时荧光PCR相比,双重荧光PCR方法的阳性检出率由25.00%提高到27.50%,提高了检测结果的准确性。