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草鱼病原菌AvX005的分离鉴定及其拮抗菌筛选研究 总被引:1,自引:0,他引:1
2016年4—7月,湖南望城乔口渔场爆发了较大范围的草鱼疾病,自爆发病的草鱼病变组织中进行细菌分离与培养,分离得到一株优势菌,回复感染试验测定,该菌株具有较强的致病性。经菌落形态观察、冷场扫描电镜观察、生理生化试验及16SrDNA基因序列同源性分析,鉴定为维氏气单胞菌,编号为AvX005(GenBank登录号:KU64116.1),在此基础上以维氏气单胞菌AvX005为指示菌,通过点种法和纸片扩散法筛选拮抗菌,拮抗试验发现新筛选的解淀粉芽孢杆菌对维氏气单胞菌AvX005有较好的拮抗效果,采用酸沉淀、C18反相柱色谱分离到抑菌活性物,LC-MS/MS鉴定分子量为1045.29。根据抑菌活性物的理化性质,初步确定解淀粉芽孢杆菌产生的抑菌活性物可能为脂肽类化合物。该研究不仅可为快捷、准确检测由维氏气单胞菌引起的鱼类疾病提供参考及填补国内维氏气单胞菌拮抗菌在分类地位、生物学特性等方面的不足,而且也为我国草鱼维氏气单胞菌病的生物防治提供科学资料。 相似文献
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聚磷酸激酶基因(Polyphosphate kinase gene,ppk)是放线霉菌中的一种影响抗生素合成的全局性负调控因子,阻断该基因能显著提高其次级代谢产物产量。本文利用PCR扩增了刺糖多孢菌中的ppk基因中间片段,经酶切连接技术将其克隆到大肠杆菌-链霉菌穿梭载体pOJ260上,构建阻断型载体pOJ260-ppk;通过接合转移将该功能质粒导入刺糖多孢菌中,获得了遗传性能稳定的重组菌株S.sp-△ppk。对工程菌株的PCR检测结果显示,ppk基因片段已整合到刺糖多孢菌染色体上并成功阻断了该基因的表达。摇瓶发酵结果显示,工程菌株多杀菌素产量较原始菌株提高了122%。阻断聚磷酸激酶基因的表达对刺糖多孢菌的菌丝形态及生长发育产生了影响,并有效地促进该菌多杀菌素的生物合成。 相似文献
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苏云金杆菌高毒力菌株4.0718的快速选育 总被引:16,自引:0,他引:16
从湖南省不同生态区域的旱作地,果园和稻园采集的858份土样中,分离筛选出苏云金杆菌30株。选取一株具典型苏云金杆菌菌落特征和较高杀虫毒力的菌株701^2c为出发菌株,经紫外线和两次亚硝基胍的交替复合诱变,显微涂片染色镜检,发现菌体的伴孢晶体的形状、大小、数量及芽孢与伴孢晶体的比例与杀虫菌株4.0718。该突变株杀虫毒力与原始菌株相比提高了7.5倍,在6、12和24h内供试小菜蛾三龄幼虫死亡率分别高达20%、97%和100%。此菌株的高效速效杀虫毒力经连续10代培养能稳定遗传。 相似文献
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苏云金芽孢杆菌4.0718菌株晶体毒素性质的研究 总被引:4,自引:0,他引:4
以苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)4.0718菌株伴孢晶体65kD原毒素为材料,比较了几种染色-脱色方法对电洗脱回收蛋白的影响。蛋白纯化的步骤包括SDS-PAGE分离、采用自制蛋白回收装置电洗脱回收杀虫晶体蛋白及抗胰蛋白酶核心多肽、超滤法脱盐、冷丙酮沉淀法除去考马斯亮蓝及SDS。经SDS—PAGE检测,呈现出均一的蛋白带,回收蛋白达到了电泳纯。以双向凝胶电泳(2-DE)技术分析了苏云金芽孢杆菌库斯塔克亚种HD—1和4.0718菌株伴孢晶体内的蛋白质组分。结果表明,两者相互匹配的蛋白点有54个,HD—1菌株的130kD亚基有2个点,其等电点在5.25~5.75之间,65kD亚基在等电点3.4~8.3之间具有广泛的分布,130与65kD之间的亚基的等电点集中在3.5~4.2之间,65kD以下亚基的等电点集中在3.5~6.2之间;4.0718菌株的130kD亚基仅有1个点,65kD亚基的蛋白点比HD-1菌株更多,130与65kD之间的亚基、65kD以下的亚基蛋白点均比HD-1菌株多且等电点分布范围更广。 相似文献
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暗黑鳃金龟Holotrichia parallela是一种重要的农业害虫,其成虫和幼虫均能对多种作物造成严重危害。为筛选对暗黑鳃金龟成虫具有毒杀活性的Bt蛋白,本研究首先对暗黑鳃金龟成虫的生活习性进行观察,用浸泡蛋白的榆树叶饲喂成虫,建立了Bt蛋白对暗黑鳃金龟成虫的生物学活性测定方法;制备了6种Bt Cry8类杀虫晶体全长蛋白和胰蛋白酶消化蛋白,对暗黑鳃金龟成虫进行了杀虫活性测定。初筛结果发现Cry8Ga1原毒素和消化蛋白均对暗黑鳃金龟成虫具有较高毒杀活性,其在浓度1.0 mg/mL时对暗黑鳃金龟成虫的7 d校正死亡率分别为100%和55%。为更进一步确定Cry8Ga1蛋白的杀虫活性,进行了致死中浓度测定,7 d生测结果显示,Cry8Ga1原毒素的LC50为0.387 mg/mL (95%置信区间为0.108~0.746 mg/mL),Cry8Ga1蛋白经胰蛋白酶消化后的LC50为0.702 mg/mL (95%置信区间为0.150~2.664 mg/mL)。取食Cry8Ga1原毒素蛋白及其消化蛋白后的暗黑鳃金龟成虫中肠细胞产生显著的病理学变化。本研究筛选到对暗黑鳃金龟成虫有毒杀作用的Bt蛋白,研究结果将为金龟子的生物防治开辟新的途径。 相似文献