可可毛色二孢全基因组分泌蛋白的预测及分析

【目的】可可毛色二孢（Lasiodiplodia theobromae）是一种世界性分布的重要植物病原真菌,可引起严重的葡萄溃疡病（Botryosphaeria dieback）,影响果木品质并造成巨大的经济损失。本研究预测并分析可可毛色二孢基因组范围内的分泌蛋白,并明确其基本特征,为该病菌分泌蛋白致病机理的研究打下基础。【方法】依据已公布的可可毛色二孢全基因组序列,利用信号肽预测软件SignalP v5.0、跨膜结构分析软件TMHMM v2.0、细胞器定位分析软件ProtComp v9.0、GPI锚定预测软件big-PI Fungal Predictor和亚细胞器定位分析软件TargetP v2.0生物信息学软件对该菌中的典型分泌蛋白进行筛选。对分泌蛋白N端信号肽的长度、氨基酸使用频率及其切割位点进行统计分析。依据蛋白序列的同源性,应用BLASTP程序对分泌组蛋白进行功能注释分析,预测其生物学功能。采用蔗糖酶缺陷的酵母分泌系统,对所选分泌蛋白的信号肽进行活性检测。利用qRT-PCR方法检测所选分泌蛋白基因在可可毛色二孢侵染葡萄中的表达情况。【结果】在可可毛色二孢全基因组编码蛋白中共筛选获得552个潜在的具有典型信号肽的分泌蛋白,占全基因组预测蛋白总数的4.3%,其编码蛋白长度集中于101—400 aa。信号肽统计分析表明,其信号肽长度以18—20 aa的序列最为集中,信号肽长度为20 aa的蛋白数量最多。信号肽中使用频率最高的氨基酸为丙氨酸;非极性、疏水的氨基酸使用频率最高,占氨基酸总数的60.2%。其信号肽的-3至-1位置上的氨基酸相对保守,切割位点属于A-X-A类型,可被Sp I型信号肽酶识别并切割。336个分泌蛋白具有功能注释,其功能较多集中于细胞壁降解有关的酶类以及致病相关蛋白,并且这些蛋白在分子量、等电点、脂肪族氨基酸指数等方面均存在差异。通过蔗糖酶缺陷的酵母分泌系统证实,挑选的9个分泌蛋白信号肽均具有分泌活性。qRT-PCR检测结果表明,所选分泌蛋白基因在该病菌侵染初期的表达发生变化。【结论】利用生物信息学分析技术从可可毛色二孢全基因组中共预测获得552个经典分泌蛋白。其信号肽氨基酸长度分布广泛,氨基酸组成中非极性、疏水的氨基酸使用频率最高。功能注释主要集中在细胞壁组分降解相关的酶类、致病侵染相关的坏死诱导相关蛋白以及几丁质结合蛋白等。     

TMV侵染对枯斑三生烟叶片中Ca2+分布的影响

以枯斑三生烟为材料,用细胞化学沉淀法测定了TMV侵染对烟草叶片细胞中Ca^2＋分布的影响,并探讨了Ca^2＋在植物抗病性中的作用。结果发现,枯斑三生烟健叶中的Ca^2＋主要分布于细胞间隙和液泡,接种TMV后,细胞间隙中的Ca^2＋逐渐向细胞内转移,在接种后48h,Ca^2＋主要分布于过敏性坏死细胞和近坏死区细胞,远坏死区细胞间隙缺Ca^2＋;以后由于枯斑停止发展,在接种后96h远坏死区细胞逐渐恢复钙稳态。     

甘蓝枯萎病菌原生质体的制备与再生条件的优化

建立甘蓝枯萎病菌（Fusarium oxysporum f.sp. conglutinans）高效遗传转化体系的途径之一是获得其具有再生功能的原生质体。本研究通过对甘蓝枯萎病菌菌丝摇培时间、菌丝的酶解时间、保护原生质体的渗透压稳定剂的种类和浓度等因素进行优化,建立了制备甘蓝枯萎病菌原生质体的高效、稳定体系,并在SR固体培养基上实现了甘蓝枯萎病菌原生质体的再生,再生率可达21.13%。该体系的获得将为下一步甘蓝枯萎病菌高效遗传转化体系的建立和致病机理的解析奠定基础。     

河北省番茄黄化曲叶病毒病的分子鉴定初报

双生病毒是一类具有孪生颗粒形态的植物单链病毒,目前双生病毒病害已在多个国家和地区的作物上造成严重危害。近年来,我国多省报道作物上有这类病毒的发生,且有逐年加重和扩散的趋势。根据危害番茄的双生病毒DNA A序列保守区设计简并引物,对2009年4月采自河北省魏县表现叶片黄化、曲叶症状的4个番茄样品进行PCR检测,均为双生病毒阳性,对样品的扩增片断进行了克隆测序,经序列比对分析,与番茄黄化曲叶病毒（Tomato leaf curl virus,TYLCV）山东分离物（FJ646611.1）序列相似性为99.25%~99.55%,说明河北番茄黄化曲叶病由TYLCV引起。     

可可毛色二孢菌侵染后的烟草酵母双杂交cDNA文库构建

正葡萄是世界上最重要的经济果树之一,据联合国粮食及农业组织统计,截止到2013年,中国葡萄栽培面积已达715.5万hm2,葡萄总产量超2 300万kg。长期以来,葡萄病害是影响葡萄产业健康发展的重要因素。近年来研究发现由葡萄座腔菌科真菌(Botryosphaeriaceae)引起的葡萄溃疡病(Botryosphaeria dieback)是葡萄上的主要枝干病     

有机农业及有机葡萄病虫害防治

有机农业和有机食品生产在世界上迅速发展,但大众对有机食品的概念、实质内容等的认识上还有许多分歧。在查阅有关资料的基础上,对有机食品的形成过程、有机食品的概念、有机食品在国内外的发展等进行了简单介绍,并对有机食品与绿色食品、无公害食品等进行了比较,同时对有机食品的理解进行了剖析,介绍了我国有机农业中葡萄病虫害的防控经验与实践。     

10种杀菌剂对马铃薯黑痣病病菌的室内毒力测定

采用菌丝生长抑制法,测定了10种杀菌剂对马铃薯黑痣病病菌的毒力。结果表明,10种药剂中戊唑醇的抑菌效果最好,EC_(50)为0.070 7 mg/L;其次是咯菌腈与氟啶胺,分别为0.079 8、0.116 4 mg/L。生物制剂寡雄幅霉菌与多抗霉素对马铃薯黑痣病病菌也有较明显的抑制作用。     

石渠高原高寒植被保护恢复区发展初探

文章简述了石渠高原高寒植被保护恢复区的区划方法、主要特征,分析生态区位,计算生产力级数,并对该区存在的主要问题、主要威胁以及区域发展的优势和潜力加以分析,提出了今后林业发展布局及目标。     

主要瓜类蔬菜霜霉病的发生于预防（一）

瓜类蔬菜霜霉病（Pseudoperonospora cubensis）是一种世界性病害，最早发现于北美的古巴（1886年）。我国最早报道于1912年，在湖南省的南瓜上发现。到目前为止，我国有记载的霜霉病的寄主有黄瓜、甜瓜、南瓜、西葫芦、瓠瓜、笋瓜、西瓜、冬瓜、丝瓜、苦瓜、佛手瓜等11种栽培植物及1种野生植物总状盒子草（Actinostemma lobatum vat．racemo—sum，台湾）。但是，其中主要是在黄瓜、甜瓜等少数蔬菜上为害较为严重。因此，本文的内容主要根据黄瓜及甜瓜霜霉病进行描述及介绍。     

北京市科技示范园区蔬菜病害无公害综合防治研究

一、主要工作内容蔬菜病害是蔬菜生产上一大障碍,长期以来,蔬菜病害防治主要依靠化学防治,化学农药的大量使用带来的产品农药残留超标、人畜中毒等问题日益受到全社会的关注,近几年来,冬瓜大面积枯死和夏播芹菜烂心死秧已成了困扰京郊两大蔬菜种植的疑难问题,通过我们深入细致的研究,探明了冬瓜大面积枯死和芹菜烂心死秧的病因、发病规律,找出防治这两种病害的关键技术;对瓜类白粉病;茄果类病毒病等几种主要病害,试图找出少用化学农药,利用寄主的遗传抗性和挖掘寄主的潜在抗性,通过生态调控措施优化寄主的生长环境,从而达到控制病害的目的.