表达鸡α干扰素重组酿酒酵母菌的构建与鉴定

通过构建鸡α干扰素真核表达载体,以获得能够表达鸡α干扰素的酵母工程菌株。首先根据GenBank公布的鸡α干扰素基因序列设计上、下游引物,以略阳乌鸡基因组DNA为模板,PCR扩增鸡α干扰素基因片段。然后,利用基因重组技术将鸡α-干扰素基因插入真核表达载体,通过菌落PCR和DNA测序确定目标载体,构建成功后转化至酿酒酵母AH109,再通过营养缺陷培养、质粒提取和PCR鉴定带JMB440-ChIFN-α载体的重组酵母菌株。最终通过酵母培养、总蛋白收集、SDS-PAGE电泳和Western blot等,确定鸡α干扰素基因能够与酵母菌株重组,并表达α干扰素,蛋白条带大小约为23ku,与预期结果一致,表明成功构建了表达鸡干扰素基因的工程酵母菌株。     

饲养方式对略阳乌鸡肌肉和脂肪相关基因mRNA表达水平的影响

为研究饲养方式对略阳乌鸡肌肉发育和脂肪形成的影响,分别检测笼养和散养方式下60日龄、120日龄略阳乌鸡肌肉组织中相关基因的表达水平。结果发现:散养方式可提高肌肉嫩度,降低其硬度;笼养方式可提高肌肉产量和肌内脂肪(IMF)含量;60日龄散养鸡肌肉组织中慢肌标志基因碳酸酐酶Ⅲ(CAⅢ)的表达量显著低于笼养鸡,而快肌标志基因肌球蛋白碱性轻链2(MYL2)、肌球蛋白碱性轻链3(MYL3)和肌内脂肪形成候选基因脂蛋白脂肪酶(LPL)、瘦素受体基因(LEPR)的表达水平显著高于笼养鸡;120日龄时,散养鸡CAⅢ表达量显著升高,而钙/钙调素依赖性蛋白激酶(Ca MK)、MYL2、MYL3、LPL、LEPR和和胰岛素样生长因子1(IGF-1)的表达量明显降低;随着日龄增加,笼养鸡骨骼肌中肌肉生长抑制素基因(MSTN)和腹脂沉积相关的甲状腺激素应答基因(THRSP)表达量显著升高,而散养鸡明显降低。综上所述,散养方式可提高略阳乌鸡骨骼肌中慢肌纤维相关基因表达水平,笼养方式促进骨骼肌中脂肪相关基因的表达,有利于肌内脂肪形成。