番鸭Viperin基因的克隆表达及其抗MDRV的作用研究

为了研究番鸭Viperin蛋白在感染番鸭呼肠孤病毒(MDRV)细胞和组织中的表达情况,以及其是否具有抗MDRV作用,采用RT-PCR方法检测番鸭Viperin基因在感染MDRV不同时间点293T细胞、番鸭鸭胚成纤维细胞(MDEF)和雏番鸭脾脏中的表达情况;并采用RT-PCR方法从番鸭脾脏中扩增出Viperin基因片段,将其克隆到真核表达载体p Flag-CMV-5a中,测序验证后转染入293T细胞,运用Western-Blot技术鉴定蛋白表达情况;最后用MDRV感染过表达番鸭Viperin的293T细胞,通过RT-PCR和qRT-PCR检测病毒在细胞中的增殖情况。结果表明,Viperin基因在感染MDRV的293T细胞、MDEF细胞和雏番鸭脾脏中表达量均升高;MDRV P10基因在过表达番鸭Viperin基因的293T细胞中的表达量显著低于对照组(P0.01),证实番鸭Viperin蛋白具有抑制MDRV增殖的作用。     

猪子宫内膜肥大细胞消涨规律初探

雌性小型猪１５头，分为二月龄、间情期、民情前期、发情期、妊娠期等六组。颈动脉放血处死，取子宫组织，经甲苯胺改良法和免疫组化法染色，观察肥大细胞的动态变化。子宫内膜肥大细胞的数量随个体的生长而增加。在发情周期中肥大细胞的数量呈规律性的变化：在民情前期一时性地剧增，至发情期陡然降至显著低于间情期的水平，在妊娠期也维持低于间情期的水平。本实验的结果提示，子宫内膜肥大细胞的数量可能反映子宫局部的免疫水平。     

母猪性周期和妊娠期中外周血T细胞及其亚群的观察

用酸性α-萘酯酶(ANAE)组化反应标记外周血T细胞。与间情期相比,总T细胞的比率及其两个亚群(辅助性T细胞和抑制性T细胞)的比率在发情前期无明显变化;在发情期和妊娠期,总T细胞的比率显著降低(P<0.05),其中,辅助性T细胞亚群的比率显著降低(P<0.01),而抑制性T细胞亚群的比率显著升高(P<0.01)。表明在发情期和妊娠期,母猪的细胞免疫水平显著地低于间情期。     

DEM内插算法对坡度坡向的影响

虽然DEM的应用越来越广泛,但是在实际研究运用中获取DEM的方式主要是利用各种矢量高程信息通过插值而来,不同的插值算法必然会影响DEM分析的结果;以南方丘陵地区为研究区域,利用样区的1∶10000的矢量地形图为数据源,通过对不同算法生成不同分辨率的DEM坡度、坡向的对比研究发现:在坡度小于30°时,不同的算法对坡度具有显著的影响,而大于30°时分辨率和算法均不会对坡度产生显著影响;研究表明:在具有大量平坦区域的地区,尽管ANUDEM算法生成的DEM总体上的精度最高,但是不会产生平坦区域,所以并不适合于这类地区的地形分析。     

中性粒细胞胞外诱捕网与病原体的相互作用及其机制

中性粒细胞作为机体天然免疫系统的重要组成部分，发挥至关重要的防御病原体感染的作用。中性粒细胞发挥防御作用的机制之一是通过释放中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extracellular traps，NETs）捕获并消灭病原体。然而有些病原体已进化出逃避NETs的机制，从而对机体造成持续损伤。此外，NETs的异常状态也会对机体造成一些损伤。近年来，NETs已成为中性粒细胞功能研究的热点，受到了国内外学者的广泛关注。有学者在禽的异嗜性粒细胞中也发现了类似NETs功能的网状结构，并将其命名为异嗜性粒细胞胞外诱捕网（heterophil extracellular traps，HETs）。作者主要对NETs抵御病原体入侵和病原体逃避NETs的机制并引起宿主致病等过程进行综述。     

H9N2亚型流感病毒感染过程中神经介素B及受体对NF-κB信号通路泛素酶的调控

神经介素B(neuromedin B,NMB)及受体(NMB receptor, NMBR)通过NF-κB信号通路参与抑制甲型流感病毒(influenza A virus, IAV)H1N1亚型(IAV/H1N1)的感染。但关于NMB和NMBR对NF-κB信号通路相关泛素蛋白酶的调控如何，尚未见报道。为探究NMB和NMBR调控IAV诱导的NF-κB信号通路相关的泛素蛋白酶表达的影响，本研究基于IAV/H9N2感染sh-NMBR细胞与NMB刺激的A549细胞，采用RT-PCR、qRT-PCR及Western blot(WB)分析NMB和NMBR对H9N2感染引起的NF-κB信号通路相关的E3泛素连接酶Mind bomb-2(MIB2)和Ring Finger Protein 8(RNF8)及去泛素蛋白酶Cylindromatosis(CYLD)的表达变化。结果显示：H9N2感染sh-NMBR细胞中，RNF8和CYLD表达增加，MIB2表达和P65磷酸化水平降低；NMB激活A549细胞中NMBR的表达后，诱导细胞中RNF8和CYLD的表达水平下降，MIB2表达和P65磷酸化水平增加。结果表...     

DEM在林地表面积计算中的应用研究

土地的表层利用情况与人类的生产生活息息相关,而对于土地利用中处于斜坡上的林地来说,其表面积比投影面积更具有意义,然而目前还没有找到一种高效、精确的计算其表面积方法;本文以重庆江津市为研究区域,利用等高线模拟地形,运用微积分的方法对林地的表面积的计算方法进行了探讨;研究结果表明在数据有限的情况下,此方法能够比较准确的计算林地的表面积,且比用投影面积乘以坡度的平均正割值所计算的面积更精确。     

H5N1亚型禽流感病毒RNA聚合酶PB1_P亚基片段的表达、纯化和结晶

 根据GenBank中H5N1亚型禽流感病毒RNA聚合酶PB1基因序列设计一对特异性引物,利用RT-PCR方法扩增H5N1亚型禽流感病毒的PB1_P基因,克隆到原核表达载体pET-28a载体中,经PCR、酶切和测序分析后,鉴定出阳性重组子。将阳性质粒pET-28a/PB1_P转化大肠杆菌BL21（DE3）,用0.5 mol/L IPTG,在37 ℃诱导表达4 h,经SDS PAGE和Western blot检测,获得重组蛋白PB1_P表达。并经Ni-NTA柱亲和层析与柱层析纯化表达蛋白,采用悬滴气相扩散法对纯化蛋白进行结晶。结果成功构建pET-28a/PB1_P重组质粒,SDS-PAGE结果显示重组蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达,Western-blot证明表达的融合蛋白具有良好的免疫原性,经蛋白纯化、初筛结晶,得到PB1_P重组蛋白初筛晶体,为深入研究流感病毒聚合酶的生物学功能、开发新型H5N1亚型禽流感病毒检测试剂盒奠定了良好的基础。     

山羊地方性鼻内肿瘤病毒全基因组序列分析及其gag基因促肿瘤发生的机制研究

本研究旨在获得山羊地方性鼻内肿瘤病毒（enzootic nasal tumor virus 2,ENTV-2）全基因组序列并进行分析。从福建某羊场的山羊鼻内肿瘤组织取样,针对ENTV-2设计引物,通过RT-PCR方法从肿瘤组织中分段扩增出6个特异性产物,测序后利用生物学软件DNAStar进行拼接,获得长度为7 443 bp全基因组序列,将其命名为ENTV-2-FJ。ENTV-2-FJ基因组结构与其他逆转录病毒类似,具有5'-U5-gag-pro-pol-env-U3-3'典型结构,包含4个开放阅读框和侧翼非编码区以及末端重复序列。为制备兔抗ENTV-2 gag蛋白多克隆抗体,将特异性扩增的gag基因克隆至pET-21a （+）载体,构建重组质粒pET-21a-gag,鉴定后转化至BL21（DE3）细胞并经IPTG诱导成功表达分子量约为70 ku的融合蛋白。Western blot分析表明,制备的兔抗gag蛋白抗体能在患病山羊肿瘤组织和表达gag基因的细胞中特异性地检测出gag蛋白。为了深入研究ENTV-2-FJ致瘤机制,作者构建了过表达gag基因的K562细胞系,并进行裸鼠致瘤试验。结果显示, gag蛋白通过激活JAK2-STAT5信号通路促进肿瘤的生长。综上,本研究获得了ENTV-2-FJ全基因组序列并对其进行分析,制备并验证了gag蛋白的多克隆抗体,揭示了gag蛋白的作用机制,这些结果为阐明ENTV-2的致病机制提供了科学依据。     

蛹虫草不同水提物体外抗白血病活性研究（英文）

蛹虫草(Cordyceps militaris)是一种著名的药用菌,在东亚地区已被广泛用作中药材和滋补品,对多种肿瘤细胞有治疗作用。本研究探讨了蛹虫草液体培养的菌丝体(CMME)、发酵液(CMBE)和全发酵产物(菌丝体和发酵液,CMPE)的水提物对人(Homo sapiens)白血病细胞Jurkat和K562的作用。四甲基偶氮唑蓝(methylthiazoletetrazolium,MTT)分析结果表明,这3种水提物对两种白血病细胞均有显著的抑制作用,在处理24 h时已经比较明显,且呈剂量和时间依赖性。与CMBE相比,CMME和CMPE对人白血病细胞的抑制效果更为显著,但两者的差异则不显著。这3种水提物对两种细胞的半数抑制浓度(IC50值)分别为CMMECMPECMBE。AnnexinV-FITC/PI双标记流式细胞术检测结果表明,CMME和CMPE的抑制效应与细胞凋亡有关,且早期和晚期的Jurkat和K562细胞凋亡率与水提物浓度呈正比。同时,CMME和CMPE对Jurkat细胞的凋亡诱导效果相似,但前者能引起更多的K562细胞凋亡。整体上,3种水提物中以CMME对细胞的抑制效应和细胞凋亡作用较为明显。另外,通过Western blot法检测抗凋亡因子Bcl-xL(B-cell lymphoma-extra large)的表达水平发现,处理48h后,4.00mg/mL的CMME能显著抑制Jurkat细胞中Bcl-xL蛋白的表达,而在高浓度CMME(8.00 mg/mL)的长时间处理(60 h)下,K562细胞中Bcl-xL蛋白的表达量略有下降。以上数据表明,蛹虫草水提物的抗肿瘤活性与细胞凋亡有关,且CMME在白血病治疗中比CMBE和CMPE更具有应用潜力。本研究首次比较了蛹虫草全发酵产物、发酵液和发酵菌丝体水提物对肿瘤细胞生长的抑制作用,蛹虫草3种水提物抗白血病活性的研究结果表明,其活性物质的产生主要为菌丝体内,而非分泌到细胞外。本研究结果为蛹虫草用于白血病治疗及其他相关研究提供基础数据,并为下一步探索其机理提供一定的参考资料。