牛皮蝇蛆病间接ELISA诊断方法的建立

以纹皮蝇Ⅰ期幼虫粗提蛋白为包被抗原,通过方阵试验确定了血清最佳稀释倍数为80倍,抗原最佳包被浓度为26.64μg/mL,并对其特异性、敏感性和重复性进行了试验,建立了牛皮蝇蛆病间接ELSIA诊断方法。再以建立的ELISA诊断方法对采自内蒙古地区的233份牛血清进行了检测。结果表明,所建立的牛皮蝇蛆病间接ELISA诊断方法具有较好的特异性、敏感性和可重复性,可用于牛皮蝇蛆病的血清学检测。     

纹皮蝇Hypodermin C基因原核表达及间接ELISA检测方法的建立

为建立牛皮蝇蛆病的抗体检测方法,本研究从纹皮蝇I期幼虫中提取总RNA,采用RT-PCR扩增了Hypodermin C(HC)基因.将该基因片段插入到原核表达载体pET-30a(+)中进行原核表达.获得了31ku以包涵体形式表达的重组HC蛋白.Western blot结果表明表达产物能够与阳性牛血清IgG特异性结合,具有良好的抗原活性.以纯化的重组HC作为包被抗原建立了牛皮蝇蛆病间接ELISA诊断方法,实验确定抗原最佳包被浓度为15.63 μg/mL,血清最佳稀释度为1:80,阳性标准判定为待检血清OD值＞0.256.所建立的诊断方法具有较好的特异性、敏感性和可重复性.应用该检测方法对230份临床血清进行检测,阳性率为20.6％.研究结果表明该间接ELISA方法是一种有效的牛皮蝇蛆病血清学检测方法.     

呼和浩特地区奶牛牛皮蝇蛆病防治时机的研究

内蒙古自治区牛皮蝇蛆病的防治模式已经使用了几十年,已经不再适应此区的牛皮蝇病防治,因此研究符合自治区地域特点和流行规律的最佳防治时机已经迫在眉睫。为此,项目课题组在前期工作的基础上,从2004年1月份起展开了对内蒙古呼和浩特城郊和农牧交错区奶牛牛皮蝇病的最佳防治时机的研究。1材料与方法1.1试验动物以呼和浩特市5个旗县区10个乡镇的5万多头城郊和农牧交错养殖区奶牛为研究对象。1.2试验方法1.2.1感染率和感染强度调查用摸瘤包方法于2—6月份进行牛皮蝇蛆病感染率和感染强度的调查,统计感染率和感染强度。1.2.2优势蝇种调查分别…     

奶牛牛皮蝇蛆病最佳防制时机的研究

本课题组于2005年3月~2006年3月完成了对内蒙古东部奶牛带(以兴安盟地区为主)牛皮蝇蛆病的调查研究。结果表明牛皮蝇蛆病感染率、感染强度都已明显下降,但仍有本病病原——牛皮蝇存在,且为混合感染,纹皮蝇蛆与牛皮蝇蛆的感染比例为4.1∶1,优势蝇种是纹皮蝇。2种病原(牛皮蝇和纹皮蝇)Ⅱ期幼虫12月末已基本全部离开食道。在该地区该病的最佳防制时机为7月末~9月初。     

牛皮蝇Hypodermin A基因在大肠杆菌中的表达

从牛皮蝇Ⅱ期幼虫中提取总RNA,进行RT-PCR扩增牛皮蝇Hypodermin A基因.将扩增基因进行克隆测序,构建原核表达栽体pET30-HA,转化大肠杆菌BL21(DE3).用IPTG诱导表达,得到表达量达到全菌蛋白35%以上的特异性蛋白.SDS-PAGE分析表明,表达产物大部分以包涵体形式存在.Western-blot检测结果表明,获得的重组蛋白为重组Hypodermin A,具有较好的免疫活性.