猪瘟病毒感染细胞中分子伴侣Jiv基因的表达检测与分析

Jiv蛋白是与猪瘟病毒(CSFV)细胞内复制密切相关的伴侣分子,为探究Jiv在CSFV感染细胞内的表达规律,应用实时荧光定量RT-PCR分别对3个猪源细胞株(SUVEC、PK-15、ST)在感染CSFV后不同时间Jiv和CSFV基因表达进行检测,分析两者的相关性。结果显示,3种猪源细胞株的Jiv和CSFV的基因在0~72h的表达逐步上调,72h~96h出现下降,二者变化趋势基本一致;此外,Jiv基因在0~48h上调幅度较其他时间段更为显著,ST细胞在不同时间段的Jiv表达均高于同时段的其他两种细胞,与ST细胞中CSFV复制趋势一致。结果表明,在CSFV感染细胞中Jiv基因的表达与CSFV复制呈正相关,即CSFV复制水平越高,Jiv基因表达水平也越高。本研究初步探明细胞Jiv蛋白在CSFV复制中的调节作用,为进一步明确Jiv蛋白参与CSFV复制的机制提供了新的资料。     

转录靶向猪Jiv基因shRNA细胞株的建立 及抗猪瘟病毒转基因猪的构建

【目的】构建转入靶向猪Jiv基因shRNA干扰片段的阳性细胞株,通过比较各细胞株对猪瘟病毒增殖的干扰效果,筛选对猪瘟病毒增殖有明显抑制作用的细胞株,为抗猪瘟转基因猪的构建提供材料。【方法】研究设计了靶向猪Jiv基因的4个shRNA干扰片段,并构建插入干扰片段的慢病毒(P1、P2、P3、P4)。将慢病毒分别转染PK-15细胞,阳性细胞接种猪瘟病毒后72 h用实时荧光定量PCR检测猪瘟病毒RNA的量,以比较4种干扰细胞株对猪瘟病毒增殖的干扰效果。将对猪瘟病毒增殖有较好干扰效果的P2慢病毒干扰载体转染猪胎儿成纤维细胞,获得稳定表达靶向猪Jiv基因shRNA干扰片段的猪胎儿成纤维细胞株,作为抗猪瘟病毒转基因猪构建的供体细胞,将细胞核移植到成熟的去核猪卵母细胞中,获得体细胞核移植胚胎,移植入受体母猪输卵管中进行转基因猪构建,对获得的转基因猪进行外源基因的鉴定。【结果】获得了4株转入靶向猪Jiv基因shRNA干扰片段的PK-15细胞株,其中转入P2干扰载体的细胞株对猪瘟病毒的增殖有明显的抑制作用,将转入P2干扰载体的猪胎儿成纤维细胞株为核供体细胞通过体细胞核移植,获得经鉴定为外源基因插入阳性的转基因猪。【结论】细胞Jiv基因的表达对猪瘟病毒的增殖有一定的影响,筛选获得的一个干扰细胞株对猪瘟病毒的增殖有明显的干扰效果;通过体细胞核移植技术获得一头转入靶向猪Jiv基因shRNA干扰片段（P2）的转基因猪。     

分子伴侣Jiv蛋白在瘟病毒感染中的作用

Jiv蛋白是近年来发现的一种与瘟病毒感染密切相关的细胞内分子伴侣。研究发现,分子伴侣Jiv蛋白上的一段编码90个氨基酸的序列(Jiv90)在牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的NS2-3聚合蛋白切割中起着关键的作用,能促使NS2-3聚合蛋白切割成NS2和NS3单体蛋白。将Jiv90基因片段插入猪瘟病毒(CSFV)强毒株Alfort-p447中构建的嵌合病毒Alfort-Jiv感染细胞后,检测发现CSFV NS3蛋白的表达量明显升高。这些都提示,Jiv蛋白在瘟病毒感染细胞过程中发挥着重要的调节作用,但对其确切的作用机制还有待深入研究。本文就Jiv蛋白的发现、对BVDV和CSFV感染的调节作用及Jiv蛋白功能的深入研究进行了展望,以期为Jiv蛋白的功能研究及其在瘟病毒感染过程中的作用机制的研究提供基础资料。     

畜禽产品兽药残留危害现状与分析

近20年来,随着养殖业的集约化、规模化发展,各种动物疫病不断暴发,养殖场为预防和控制动物疫病,大量使用各种兽药。然而,滥用兽药和非法使用违禁药物的现象时有发生,严重影响了畜禽产品的质量和食品安全。因此,开展兽药残留的检测与调查,对于提高人民健康水平,加强畜禽产品的市场竞争力有着重要意义,也为兽药残留的科学研究提供了基础性资料。