受体裂解酶实验室制备方法及在血清处理上的应用

哺乳动物（包括人）和禽类血清中往往含有非特异性血凝抑制因子，因此，在利用血凝抑制试验（HI）进行血清抗体测定之前，有必要对血清中非特异性因子进行排除。热灭活是一种排除非特异性因子的有效方法，但对特异性抗体破坏较大。红细胞吸附试验是一种常用而有效的方法，但这种方法仅对禽类血清中的非特异性血凝抑制因子有效，对哺乳动物血清效果不理想。利用受体裂解酶（RecentorDe－stroyingEnzyme，RDE）处理血清，即适用于禽类血清，也适用于哺乳动物血清，美国已在流感和禽流感诊断中广泛应用。本文将报道RDE的实验室制备方法及…     

Asia1型口蹄疫病毒含RSD受体识别位点感染性克隆的构建与病毒拯救

口蹄疫病毒(Foot-and-Mouth Disease Virus,FMDV)具有高的突变率和很强的适应性,在环境条件变化时会迅速从准种种群中选择变异株来适应新的环境,这些变异株包括在RGD受体结合基序内部或附近氨基酸的替换。FMDV Asia1/JS/China/05株经不同宿主传代后产生含RSD和RDD受体识别基序的变异株,为了研究含RDD受体识别基序的FMDV在受体结合位点内1个氨基酸的变化是否影响感染性病毒子的产生,作者利用已构建的含RDD受体结合位点的FMDV Asia1/JS/China/05株的全长感染性cDNA克隆为骨架,采用融合PCR方法,构建了该毒株含RSD受体位点的全长cDNA克隆pFMDV-RSD。线性化的pFMDV-RSD重组质粒和表达T7RNA聚合酶的真核质粒pcDNAT7P共转染BHK-21细胞,56 h后可观察到典型的FMDV致细胞病变效应。对收获的病毒分别进行序列测定、间接免疫荧光试验、电子显微镜观察和乳鼠致病性分析,结果证实该毒株细胞受体位点1个氨基酸的替换不影响活病毒的拯救。该试验为进一步研究含RSD受体结合位点FMDV的生物学特性奠定了基础。     

猪O型口蹄疫基因工程疫苗候选株的构建及其免疫原性分析

近年来,O型口蹄疫病毒已演化出多种谱系.目前应用的疫苗已不能有效保护多谱系口蹄疫的流行,这给我国猪口蹄疫的防控带来了极大的困难.为了进一步发展免疫原性好、抗原谱广的猪O型口蹄疫疫苗候选株,本研究以O/HN/93现用疫苗毒株的感染性克隆为骨架,构建了含VP3(58位)和VP1(43、48、137、139、140、141和142位)氨基酸改造的全长克隆.线性化的全长cDNA和T7RNA聚合酶质粒共转染BHK细胞后获得拯救病毒.RT-PCR和乳鼠致病性试验表明拯救病毒遗传稳定,具有与亲本病毒相似的致病性.用拯救的基因工程病毒灭活疫苗免疫猪28 d后分别用中国谱系、泛亚谱系和缅甸98谱系猪源毒的流行毒攻击,结果均获得了完全保护(16/16).O/HN/93灭活疫苗免疫猪能完全保护泛亚谱系和缅甸98谱系猪源病毒的攻击(16/16),但不能完全保护(12/16)中国谱系猪源病毒的攻击.结果表明基因工程病毒制备的灭活疫苗提高了对中国型猪源谱系病毒的免疫保护,拓展了抗原谱,是具有良好开发前景的疫苗候选株.     

国内现有猪口蹄疫O型灭活疫苗对2010年流行毒株的抵抗力

在2010年上半年,猪O型口蹄疫不断发生,作为国内几个生产厂家的猪口蹄疫现用疫苗种毒的提供者,我组进行了猪源流行毒对该种毒灭活疫苗免疫猪的攻毒保护试验及观察。结果如下:1)、猪源流行毒致猪发病速度慢。猪源流行毒接种猪后,致猪发病的时间在3～5天,而疫苗株致猪发病时间是接种后2～3天;2)、该疫苗毒株能有效抵抗猪源流行毒的攻击,PD50大于6;3)、免疫保护和ELISA抗体水平没有线性相关性;4)、免疫保护与140S抗原量有相关性。     

DNA疫苗—一种集表达抗原蛋白与佐剂功能于一体的DNA

传统的免疫,无论是使用弱毒疫苗、灭活疫苗还是使用基因工种疫苗,都可称为蛋白依赖性免疫,即它们都是靠直接向体内输入抗原来刺激机体产生免疫应答的。而ＤＮＡ疫苗与传统疫苗的本质区别在于ＤＮＡ疫苗本身不是蛋白质,而是经过改造带有某种或某些蛋白编码基因并能在体细胞内表达蛋白的质粒ＤＮＡ。ＤＮＡ疫苗的基本原理是:通过注射这种改造的质粒ＤＮＡ后,ＤＮＡ进入体细胞,伴随着体细胞的生命活动进行其转录和翻译,从而不断产生具有免疫活性的抗原。ＤＮＡ本身可以在免疫应答过程中起到佐剂的作用。通过肌肉注射大量ＤＮＡ后,可以激活巨噬…