两种中药方剂对奶牛感染性腹泻的治疗效果

为探讨两种中药方剂对奶牛感染性腹泻的治疗效果,选择河北省保定市某奶牛场人工感染轮状病毒(RV)和牛病毒性腹病毒(BVDV)的成年牛和犊牛为治疗对象。试验犊牛和成年牛均随机分为治疗组和对照组,各治疗组分别用两种中药方剂进行治疗,采用煎汤灌服,犊牛100g/次～150g/次,成年牛300g/次～500g/次,每天1次,连用3d～5d。对照组按牛场常规使用病毒唑及庆大霉素进行治疗。结果两种中药方剂对犊牛腹泻治愈率为70%～76%,有效率为90%～94%;成年病例治愈率为74%～80%,有效率为92%～96%。两种中药方剂对犊牛及成年牛感染性腹泻治疗效果明显优于临床上常用的抗病毒化药或抗生素(P<0.05)。     

水合氯醛、速眠新Ⅱ、二甲苯胺噻唑对家兔心电图、呼吸率和血压的影响

为了探讨麻醉药对正常家兔心电图、呼吸率和血压的影响,将5~6月龄的家兔20只随机分成4组,分别为正常对照组、水合氯醛组、速眠新Ⅱ组、二甲苯胺噻唑组。采用RM6240BD多通道生理信号采集处理系统,测定家兔动脉血压、呼吸率,Ⅱ导联家兔心电图(electrocardiograph,ECG)波形和心率(heart rate,HR)变化。结果显示,ECG各波形变化均比较恒定,仅动作电位在传导过程中各段时间变化存在差异;注射不同的麻醉药后,水合氯醛使家兔HR加快,而注射速眠新Ⅱ及二甲苯胺噻唑后则使HR明显减慢,尤其是二甲苯胺噻唑对HR的影响较大;呼吸率(respiration rate,RR)的变化,3种麻醉药均比正常组高,而二甲苯胺噻唑组最高;血压变化,动脉收缩压(systolic blood pressure,SBP):二甲苯胺噻唑＞水合氯醛＞速眠新Ⅱ,且均低于正常水平;动脉舒张压(diastolic blood pressure,DBP):水合氯醛＞二甲苯胺噻唑＞速眠新Ⅱ,但水合氯醛组与二甲苯胺噻唑组差异不显著(P＞0.05)。家兔正常状态下,其心电图、心率、呼吸频率和血压的变化与有关文献存在差异,有必要正确掌握其变动范围。     

牛病毒性腹泻病毒HB-DCZ株E0基因的克隆与抗原表位预测

根据GenBank上发表的牛病毒性腹泻病毒(BVDV) Oregon C24V株E0基因的核苷酸序列设计1对特异性引物,应用PCR技术扩增BVDV HB-DCZ株E0基因.将PCR产物克隆到pMD18-T载体,克隆产物进行序列测定与分析.结果显示,HB-DCZ cDNA体外扩增获得特异性条带,约为687 bp.序列测定结果表明,HB-DCZ株E0基因由681个核苷酸组成,编码227个氨基酸.与已公开发表的BVDV其他毒株核苷酸和推导氨基酸序列同源性相似顺序依次为:CCSYD 99％和98.7％、QHZK10 98.4％和97.8％、VEDEVAC 98.2％和97.8％、Oregon C24V80.9％和89.9％、Yak 74.2％和81.1％.HB-DCZ与CCSYD、QHZK10以及VEDEVAC株的遗传距离较近,与国际标准毒株C24V、Yak株的遗传距离较远.运用Kyte-Doolittle方案预测氨基酸的亲水性,采用Karplus-Schulz方案预测蛋白质的柔性区域,按Jameson-Wolf方案预测抗原指数,利用Emini方案预测蛋白质的表面可及性.对预测结果综合分析,推测最有可能的B细胞表位位于N-端6～17、23～29、47～53、59～68、70～81、97～109、114～122、127～134、137～143、165～172、186～198和213～220.     

猪附红细胞体病流行病学调查及不同药物治疗效果

对保定市猪附红细胞体病进行流行病学调查,并对感染附红体断奶仔猪进行药物治疗试验.选择保定市6个县区30个不同规模的猪场和20个散养户,随机采集不同年龄阶段猪血液样品2 040份,进行直接压片镜检、血液涂片染色镜检和碘制动试验等病原学检测;选择阳性断奶仔猪进行药物治疗试验.结果保定市猪附红细胞体感染率为74.25％,不同年龄阶段的猪不同季节均可感染附红细胞体;临床治疗及体外药敏试验结果表明,贝尼尔、咪唑苯脲、盐酸多西环素、磺胺间甲氧嘧啶和土霉素对断奶仔猪附红细胞病的治疗具有较好的效果,尤以盐酸多西环素效果最佳.     

牛病毒性腹泻病毒E0基因重组表达质粒pMG36e-E0的构建与免疫原性分析

利用SacⅠ、HindⅢ限制性内切酶分别对pMG36e与pMD19-T-E0进行双酶切,将目的基因E0整合入穿梭表达载体pMG36e,构建牛病毒性腹泻病毒E0基因重组表达质粒pMG36e-E0。提取重组质粒pMG36e-E0,进行双酶切鉴定及PCR鉴定。将阳性重组质粒pMG36e-E0转化到大肠杆菌DH5α中进行表达,对表达产物进行SDSPAGE和Western-blotting鉴定。用表达的E0蛋白二次免疫家兔,间接ELISA法检测其血清抗体水平。结果,重组质粒经双酶切得到大小分别约为3 600、691bp的2个片段,PCR扩增出691bp的片段,双酶切与PCR鉴定结果表明目的基因E0正确插入到载体pMG36e中。SDS-PAGE电泳结果表明E0基因在大肠杆菌获得了表达,表达产物相对分子质量大小约为27 000。Western-blotting分析结果证明表达产物能被BVDV阳性血清所识别。ELISA检测结果证明表达的E0融合蛋白能刺激动物产生抗体,具有天然蛋白的免疫原性。     

堆型艾美耳球虫3-1E重组质粒微球的制备及体外释放试验

用聚乳酸羟基乙酸共聚物（PLGA）将鸡堆型艾美耳球虫重组表达质粒pcDNA3.1-3-1E包封,采用水包油包水（W/O/W）双重乳化方法制备pcDNA3-3-1E/PLGA微球。通过正交试验设计优化PLGA微球制备工艺,考察PLGA浓度、聚乙烯醇（PVA）浓度、超声功率、复乳搅拌时间对评价指标（即微球粒径大小、包封率、载药量）的影响,确定制备微球的最佳工艺条件。测定微球的形态、粒径、完整性、质粒DNA包封率、载药量和释放程度;进行体外模拟鸡胃液和肠液试验,观察微球体外释药效果。结果显示,当PLGA浓度为8%、PVA浓度为1.5%、超声功率为60W、复乳搅拌6h为微球制备的最佳工艺参数,在光镜下呈散在圆形,粒径小于12μm。微球的包封率、载药量分别为84.25%和4.46%,裸质粒与微球中质粒超螺旋比例差距不显著,这表明在包被过程中的超螺旋质粒未发生明显的降解。在模拟鸡的胃肠液累积释放试验中,它的累积释放能力依次为pH 3.0〉pH 7.4,载药微球在模拟鸡的胃肠液中24h释放26.8%,模拟肠液中24h释放11.2%,30d时体外累积释放率为81.7%,表明微球具有一定的缓释效果。