天坛株痘苗病毒基因缺失弱毒株的构建及鉴定

本研究旨在通过敲除部分与天坛株痘苗病毒(vaccinia virus Tiantan strain,VTT)毒力和宿主范围等相关的复制非必需基因,并结合双标记筛选及外源筛选标记敲除技术,构建多基因缺失VTT弱毒株。人工合成7对重组臂,结合痘病毒早晚期复合强启动子pE/L和外源筛选标记增强型绿色荧光蛋白(Enhance green fluorescent protein,EGFP),构建穿梭载体质粒pTC-EGFP、pTA35-EGFP、pTA66-EGFP、pTE-EGFP、pTB-EGFP、pTI-EGFP和pTJ-EGFP。将上述质粒依次与VTT或基因缺失VTT共转/感染BHK细胞,并通过同源重组和荧光蚀斑筛选方法,逐一敲除拟缺失基因片段(TC:TC7L^TK2L;TA35:TA35L;TA66:TA66R;TE:TE3L;TB:TB13RTK2L;TA35:TA35L;TA66:TA66R;TE:TE3L;TB:TB13R^TB14R;TI:TI4L;TJ:TJ2R)。利用Cre/Loxp系统实现对外源筛选标记的敲除,最终获得天坛株痘苗病毒基因缺失弱毒株TTVAC7,并运用PCR方法对TTVAC7进行鉴定和遗传稳定性检测。结果表明,本研究成功构建了缺失7个目的片段的天坛株痘苗病毒弱毒株TTVAC7,且该弱毒株具有良好的遗传稳定性。     

不同刈割强度下羊草转录组研究

刈割是一种重要的草地管理措施,刈割留茬高度直接影响草地生产力及群落结构,在牧草生产中具有重要意义。为研究羊草在不同刈割强度下的转录响应,利用Illumina HiSeq-PE150高通量测序技术,对不同刈割留茬高度(0,2,4,8,12 cm)处理下羊草再生叶片进行了转录组测序。共得到139767803条读长(reads),41.94 Gb原始数据。经过过滤、质控与从头组装后,总共得到转录本270207条,总长度为191.6 Mb。通过与多种数据库比对得到48097条单基因簇(Unigene)注释结果。筛选出了所有刈割强度处理与不刈割对照组显著差异基因共2579条,经过生物信息分析,将其定位到碳水化合物代谢、损伤应答、过氧化氢分解、植物激素信号转导等功能与代谢通路。利用聚类方法得到了随着刈割强度增强,表达量规律变化的基因,分别富集到了过氧化物酶体、光合作用等代谢途径。对羊草在不同刈割高度下的转录组进行了研究,为草本植物分子生物学研究提供了宝贵的数据资源,对于解析羊草响应刈割的分子调控机制及相关基因挖掘具有重要指导意义。     

放牧对三江源区高寒草甸主要植物表型特征的影响

矮嵩草和高原早熟禾是青藏高原的主要优势植物,研究其对放牧的表型反应对揭示高寒草甸生态系统的放牧响应机制具有代表意义。以青藏高原三江源区高寒草甸为例,通过设置自由放牧与围封禁牧试验,研究了高原早熟禾和矮嵩草茎叶功能性状对放牧的响应。结果表明:与围栏禁牧相比,放牧抑制了高原早熟禾和矮嵩草的生长,导致了2种植物株高、叶面积的显著下降(P0.05),植物个体表现出明显的矮小化现象。而长期放牧后,短期围封对于植物叶片数、根长、根粗等功能性状的恢复效果并不显著(P0.05),说明放牧退化草原植物性状具有保守性。     

重组腺病毒Ad－HP对肝癌细胞及肝癌肺转移模型的抑制效应

为探讨重组腺病毒Ad－HP对人肝癌细胞BEL－7402的影响及其对鼠肝癌肺转移模型的抑制作用,本研究利用MTT染色法进行了Ad－HP的体外抑瘤研究,并应用AnnexinV检测、Caspase活性检测、AO／EB染色和DAPI染色等方法分析了Ad－HP的抑瘤方式。另外,本研究利用鼠肝癌细胞H22,建立了肝癌肺转移动物模型,并检测了Ad－HP对肝癌肺转移的抑制作用及其对模型动物免疫的影响。结果表明,Ad－HP能够有效抑制BEL－7402细胞的生长,且其作用具有一定时效和剂效关系趋势;Ad－HP感染导致BEL7402细胞呈现磷脂膜外翻、细胞核皱缩、细胞膜通透性增加和Caspase酶活性增强等典型凋亡特征;应用Ad－HP治疗肿瘤模型能够有效延长模型动物平均生存期,控制转移灶形成,增强NK和CTL活性,上调Thl类细胞因子水平。总之,Ad－HT能够通过诱导细胞凋亡抑制BEL－7402肿瘤细胞增殖,并且能够有效控制肝癌肺转移灶形成,延长模型动物平均生存期。     

羊草不同组织实时定量PCR内参基因的筛选

为筛选羊草(Leymus chinensis)不同组织实时定量PCR(qRT-PCR)试验体系中的最佳内参基因,以羊草叶、茎、根、穗为研究材料,利用qRT-PCR技术分析TUA、TUB、18SrRNA、EF-1α、APRT、CYP、Actin和CBP20共8个常用候选管家基因的表达情况,并使用geNorm和NormFinder软件进行综合评价,以期筛选出羊草不同组织中最稳定的内参基因。结果表明,8个候选内参基因在羊草不同组织表达稳定性不同,其中,叶片中稳定性较高的内参基因是Actin;茎中稳定性较高的内参基因是EF-1a;根中稳定性较高的内参基因是APRT和18SrRNA;穗中稳定性较高的内参基因是TUB。本研究结果将为开展羊草功能基因的表达分析提供重要参考。     

利用化学激发子防控作物害虫研究进展

诱导防御反应是植物抵御害虫为害的一种重要机制。在这一防御机制中,各种化学激发子,包括植食性昆虫相关分子模式、植物激素及其类似物、植物激发子多肽等发挥着重要作用。合理开发利用这些化学激发子,可望帮助植物建立一种天然的防御体系,从而降低害虫种群密度、减轻害虫为害,减少化学农药使用量。本文将主要对诱导植物抗虫性的化学激发子的最新研究成果进行概述,并展示利用化学激发子防控田间作物害虫的最新研究案例,提出亟待解决的问题,以促进化学激发子在作物害虫防控中的应用。