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构建菌丝霉素(Plectasin,PT)的串联表达菌株,研究各串联体融合表达产物的菌内抑菌活性.根据大肠杆菌表达系统对密码子的偏爱性,人工合成优化后PT基因,构建表达质粒pGEX-PT/pe;并利用同尾酶法分别构建PT基因二聚体表达质粒pGEX-PT/pes2与PT基因三聚体表达质粒pGEX-PT/pes3 ;然后分别将各表达质粒转化入BL21(DE3)进行IPTG的诱导表达,对各表达蛋白进行SDS-PAGE、Western Blot分析,并测定各融合表达产物的菌内抑菌活性.测序结果表明,串联体扩增到产物大小分别为135、261和387 bp的目的基因片段;SDS-PAGE 分析各串联表达菌表达的融合蛋白相对分子质量分别约为30、35和40 ku,其产量分别占细菌总蛋白的64.5％、26.4％和25.3％.Western Blot分析表明各表达蛋白均具有良好的免疫反应性;菌内抑菌结果显示,各融合表达产物均表现对DH5α的弱抑制作用,但随PT基因串联数的增加,融合表达产物的抑菌效果显著提高,且抑菌时间延长.各串联表达菌株的成功构建与其表达产物的宿主菌抑制作用,为菌丝霉素高效抑菌产品的开发奠定了基础. 相似文献
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