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为研究CRISPR/Cas9腺病毒载体在鸡胚中进行基因敲入的可行性,将包装不同滴度增强型绿色荧光报道基因(Enhance green fluorescent protein,EGFP)的腺病毒载体和慢病毒载体显微注射到HH14时期鸡胚的外周血管中,对胚胎发育至3.5 d和9 d鸡胚存活、各器官中EGFP荧光强度等指标进行检测;将包装CRISPR/Cas9系统的腺病毒载体和Donor片段的腺病毒载体共同显微注射到鸡胚后,对成年公鸡各器官中EGFP荧光长期表达、EGFP基因敲入等指标进行检测。结果显示:两种病毒载体对鸡胚心脏和性腺的转染效率呈现显著的滴度依赖性,但1×1011TU/mL的EGFP腺病毒载体将9 d鸡胚存活率从93.18%显著降低至64.11%(P<0.05);选择滴度为1×1010TU/mL的CRISPR/Cas9腺病毒和Donor腺病毒载体进行EGFP的基因敲入,注射后成年公鸡多个组织均能稳定表达绿色荧光,PCR检测证明该荧光来自EGFP的基因敲入。研究提示:腺病毒载体比慢病毒载体具有更高的鸡胚转染效率,使用CRISPR/Cas9腺病毒载体可以在鸡胚中实现高效的EGFP基因敲入。 相似文献
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