传染性法氏囊病病毒主要结构蛋白VP2、VP1和VP2-VP1串联基因的原核表达及其初步应用

为获得传染性法氏囊病病毒(IBDV)特异性抗体检测用抗原VP2、VP1及VP2-VP1蛋白,分别设计引物扩增IBDV野毒株NN1172的VP2和VP1基因,并扩增VP2和VP1基因中抗原性和亲水性较好的重要区域,通过PCR扩增基因串联方法对截短的VP2和截短的VP1基因进行串联,首次获得VP2-VP1串联基因,并对VP2、VP1和VP2-VP1串联基因进行了原核表达和鉴定。结果成功构建了原核表达载体pET-VP2、pET-VP1和pET-VP2-VP1;诱导表达条件显示,3个重组质粒分别转入BL21菌株后经0.05 mmol/L IPTG诱导表达,分别得到分子量为69、114和63 kDa的VP2、VP1和VP2-VP1重组蛋白,且均以包涵体形式表达,3个重组蛋白分别于诱导后5、3和6 h时表达量最多。Western blot结果显示,表达的VP2、VP1和VP2-VP1蛋白与鸡抗IBDV阳性血清均具有良好的反应原性。以纯化的VP2、VP1和VP2-VP1蛋白作为包被抗原对传染性支气管炎病毒(IBV)、呼肠孤病毒(ReoV)、禽白血病病毒(ALV)和新城疫病毒(NDV)4种阳性血清检测均为阴性,表明所获得的纯化蛋白具有高度的特异性;对免疫了IBD灭活疫苗,IBD基因工程疫苗和IBD弱毒疫苗的商业鸡群进行抗体检测,结果均能显示疫苗免疫后机体抗体水平的变化趋势。本研究表明利用该原核表达系统所表达的3个蛋白均具有良好的免疫反应活性,为IBDV特异性抗体的检测和新型亚单位疫苗的研发奠定基础。     

烟草烟碱合成代谢调控研究进展

烟碱是烟草最主要的生物碱,直接影响着烟叶的质量及烟叶的可用性。对烟碱合成代谢调控的研究现状进行了综述,包括论述了环境条件、栽培措施、外源激素、烘烤调制等因素对烟碱代谢的调控效果以及烟碱代谢关键基因的研究进展,并提出烟碱合成的根特异性遗传机理、烟碱代谢相关调控基因的分离鉴定及其同源基因的发现是后续的研究方向。     

放养鸡感染传染性法氏囊病病毒继发细菌感染而致关节炎的诊断

2017年12月,桂林某养殖公司放养的广西龙胜凤鸡连续多批次出现单侧或者双侧跛行、站立不稳、食欲减退、羽毛蓬乱等症状,共造成鸡群20%的发病率和1%~2%的死亡率。剖检发现病变主要发生在鸡跗关节以下,从跗关节沿肌腱向下剪开,可见淡黄色清亮液体流出,法氏囊萎缩。无菌取鸡的病变关节处液体及其组织分别进行细菌和支原体的分离培养,并用其法氏囊组织研磨液进行传染性法氏囊病病毒的RT-PCR检测。结果分离到大肠杆菌和葡萄球菌,支原体分离检测呈阴性,传染性法氏囊病病毒检测呈阳性。根据鸡群发病情况、临床症状、剖检病变和实验室病原检测结果确诊该鸡群为传染性法氏囊病病毒感染后引起机体免疫抑制而继发的细菌性关节炎。     

原糖厂滤泥燃烧特性测定

为了了解原糖厂滤泥作为能源资源利用的可行性,根据煤的工业分析方法,测定了该滤泥的空气干燥基含水分、挥发分、固定碳、灰分含量,以及50％含水量时,收到基低位发热量.作为比较,测定了同等含水量的亚硫酸法糖厂滤泥的收到基低位发热量.测定结果为,滤泥的空气干燥基含水量为9.05％、挥发分含量60.58％、灰分含量19.58％、固定碳含量为10.78％;湿基含水量为50％的原糖厂滤泥和亚硫酸法糖厂滤泥的低位发热量分别为8700kJ/kg和7200kJ/kg,显示原糖厂滤泥具有高于水分为50％的蔗渣发热量.实验结果表明,经一定干燥后,原糖厂滤泥不失为一种低灰分、高挥发分的优良固体燃料.     

乌鸡一株A亚群禽白血病病毒的分离鉴定与全基因组序列分析

为了解广西地区某乌鸡养殖场中是否存在禽白血病病毒(ALV)感染,将从该养殖场中无菌采集的抗凝血分离的血浆接种DF-1细胞进行病毒分离,并采用ELISA和PCR扩增的方法对细胞培养物分别进行检测,成功分离鉴定出一株A亚群禽白血病病毒(ALV-A),命名为GX18LZA01株。测序结果显示GX18LZA01株前病毒基因组DNA序列全长7 561bp。遗传演化分析显示,GX18LZA01与10株国内外A亚群参考毒株同处一个大的分支,核苷酸(nt)相似性为91. 8%~96. 6%,其中与SDAU09C1参考株相似性最高(96. 6%);进一步对其gp85基因的分析发现,它与A亚群参考毒株也同处一个大的分支(nt:87. 9%~97. 8%),与全基因组分析的结果一致。本研究结果表明,乌鸡存在A亚群ALV感染,gp85基因可以替代全基因组作为其分子流行病学和系统发育研究的最佳选择。     

鹿蹄草内生真菌的分离鉴定及其对鹿蹄草的生理效应

采用表面消毒法及选择培养基分离鹿蹄草根部内生真菌,通过初步回接试验筛选高效菌株,采用形态学及18SrDNA序列分析方法对高效菌株进行鉴定,并通过二次回接试验测定高效菌株对宿主的生理效应。结果表明,从鹿蹄草中分离到7株内生真菌,初步回接试验表明其对鹿蹄草的生长均有促进作用;筛选到一株高效菌株R25,鉴定结果表明该菌株为丛赤壳属(Nectria)真菌;该菌株能显著提高宿主根系活力,以及叶片中叶绿素a、可溶性糖和超氧化物歧化酶活性。筛选的高效菌株能显著提高鹿蹄草的生长代谢活性,在鹿蹄草的引种驯化过程中具有重要的应用价值。     

鹿蹄草资源的开发与利用研究

探讨了传统药用植物鹿蹄草在食品、园林绿化、化工、生物领域的开发和应用,分析了应用中存在的问题,并对未来的开发和利用进行展望。     

变黄期和定色期不同烘烤工艺对翠碧一号烟叶细胞壁物质的影响

为了探讨不同烘烤工艺处理对烟叶细胞壁物质含量和品质的影响,试验设置4种变黄期和定色期不同烘烤工艺处理,分析烘烤过程和烤后烟叶纤维素、粗木质素、果胶等细胞壁物质含量及纤维素酶、果胶甲酯酶活性。结果表明:烟叶烘烤过程中纤维素、粗木质素、果胶含量在烘烤36 h前快速降低,48 h后降幅减小,36 h前降幅依次为T3、T4、T2、T1,48 h后为T4、T2、T1、T3;果胶甲酯酶24和72 h活性最高,48 h活性降到最低,形成双峰曲线;纤维素酶活性在48 h后达到最高。通径分析结果表明,T2处理烤后烟叶细胞壁物质含量最低,化学成分协调,感官质量总体得分最高,烟叶质量最好。T2处理降低细胞壁物质含量有利于提高感官质量,提升烤后烟叶质量。     

黄羽肉鸡马立克氏病病毒强毒株GX18NNM4的分离鉴定及其致瘤基因meq的序列分析

为探究黄羽肉鸡鸡群临床异常的发病原因,通过病理剖检、组织病理学观察、PCR检测、细胞培养、间接免疫荧光试验(Immunofluorescent assay,IFA)、序列测定进行病原分离鉴定。结果显示:病鸡心脏、肝脏等器官均有肿瘤样病变;常见肿瘤病病毒PCR检测呈现马立克氏病病毒(Marek′s disease virus,MDV)阳性,细胞培养病毒分离及IFA鉴定结果表明成功分离一株MDV野毒株(命名为GX18NNM4);分离株meq基因的序列分析表明,GX18NNM4与vvMDV参考株GX0101的同源性最高,其核苷酸及氨基酸相似性分别高达99.8%和99.4%,且其突变位点符合国内强毒株的特征。通过氨基酸序列分析发现GX18NNM4的两个脯氨酸重复序列PPPP发生了突变,即PPPP→PNPP,且GX18NNM4与vvMDV/vv+MDV参考株RB1B、Md5、GX0101及648A的脯氨酸发生中断的数量同在0~3的范围内。结果表明该鸡群为MDV感染。