小鼠ES细胞在不同饲养层上培养nanog基因的 表达水平与生长行为

观察小鼠ES-D3细胞在MEF、新生牛睾丸支持细胞(nBTSCs)和新生兔睾丸支持细胞(nRTSCs)饲养层上生长4 d nanog基因的表达水平和生长行为。RT-PCR分析显示，MEF饲养层上培养4d的ES-D3 nanog基因含量高；nBTSC饲养层上培养nanog基因表达较低；而RTSC饲养层上培养nanog基因表达最低。结果显示：不同饲养层上的ES-D3细胞集落形态和培养4d分化程度有差异。在MEF饲养层上的ES-D3细胞培养4d，集落形态仍然很规则，细胞间紧密，集落表面少见大细胞，AKP染色强阳性。在nBTSC饲养层上的ES-D3细胞，集落界限清晰，AKP染色显示，集落大部分细胞呈阳性，少数的细胞集落为弱阳性，可见集落表面分散有较多的大细胞。在nRTSC饲养层上的饲养层上的ES-D3，集落隆起不明显，集落界限不清晰，大部分集落形态不太规则，AKP染色显示集落中部分细胞呈阳性，少数的细胞集落为全阴性，集落表面有较少的大细胞，集落周围有伸出的成纤维细胞。     

ES-D3细胞nanog基因干扰载体的构建 及其干涉效果*

选择ES细胞nanog基因中4个区域合成寡聚核苷酸,构建了4个含有小鼠U6启动子的siRNA（小分子干涉RNA）表达载体并瞬时转染小鼠ES-D3细胞.半定量RT-PCR分析显示,所构建的4个siRNA表达载体中有3个可以在细胞内转录出siRNA或shRNA（短发夹RNA）,诱发RNA干涉（RNAinterference,RNAi）,能显著抑制目的基因nanog的表达;同时发现,干扰的ES-D3细胞生长48 h后,集落形态与未干扰细胞相比差别不大,但隆起不如后者明显,形态也不如后者规则,生长速度也较慢,AKP染色阳性,与未转染细胞相比没有差别.     

人类胚胎干细胞研究述评

对人类胚胎干细胞(hESCs)的来源、培养方法、建系条件、生物学特性和鉴定方法、遗传操作及其需解决的问题进行了讨论。提出目前研究的重点在于揭示维持ES细胞多能性和自我更新的机理,进一步优化人类和其他哺乳动物类ES细胞的分离、培养、建系方法,探讨其定向分化机理,建立胚胎干细胞(ESCs)和胚胎生殖细胞(EGCs)的大规模快速扩增技术;完善hESCs向重要功能细胞(生殖细胞)分化的体系;单细胞比对分析ESCs、畸胎瘤细胞(ECSs)、EGCs、类胚体(EBs)、各级生殖细胞和成体细胞的基因及蛋白表达图谱,以探求生殖细胞、成体细胞、ESCs、ECSs、EGCs的本质区别,积极开展将ES细胞用于治疗人类疾病模型的研究。     

奶牛不排卵状况的研究综述

卵泡生长可分为三个阶段：卵泡出现；卵泡的选择优势化与闭锁分离；卵泡排卵。不排卵的情况可分为：①生长卵泡不能生长至“分离期”。原因可能是极度的营养缺乏。②卵泡可生长到“分离期”，但没有达到排卵体积。这方面研究得较多，认为这类牛比正常牛有更强的E2对GnRH／LH的负反馈，在营养不良或吮乳时可引起这类不排卵状况。③卵泡生长的最终体积大于排卵卵泡，这类牛的特征是下丘脑对E2的正反馈作用不敏感；高产奶牛常见。对于第一种情况，关键在于预防，提高育成期的饲管水平。后两种常见的不排卵状况是由于下丘脑对E2反应的敏感性改变；常用增加血液循环中P4的浓度改变GnRH／LH释放的脉冲以协助卵泡最后阶段的生长，或重新建立下丘脑对E2的正反馈来治疗。     

胚胎移植技术的现状与展望

统计与分析了1991－2000年国际胚胎移植状况，结果表明胚胎移植已成为畜牧产业中最活跃的领域之一，胚移比例最大的依然是牛，其它各类的动物胚胎移植，如：绵羊、山羊、猪、马、鹿、美洲驼、羚羊等，也十分活跃。牛的胚胎移植，有几个重要指标分析结果如下：（1）供体牛的品种分布基本相同，肉牛与奶牛所占比例接近，但不同国家之间差别很大；（2）每头供体所得可用胚数在5－6枚之间；（3）鲜胚移植与冻胚移植的比例基本持平，但近年来冻胚移植的比例稍大于鲜胚移植；（4）通过IVF体外方式生产胚胎数目有所增长，目前每年大约在3－4万枚；（5）妊娠率、鲜胚移植妊娠率在60％以上，冻胚移植妊娠率在50％以上，IVF体外方式生产胚胎妊娠率在40％左右；（6）胚胎移植技术的发展状况在全世界分布不均衡，北美和欧洲胚移技术最成熟；（7）胚胎贸易有所增长。最后，对该技术存在的问题与发展前景提出了探讨和展望。     

小鼠ES细胞在不同饲养层上培养nanog基因的表达水平与生长行为的研究

观察小鼠ES-D3细胞在MEF、新生牛睾丸支持细胞(nBTSCs)和新生兔睾丸支持细胞(nRTSCs)饲养层上生长4dnanog基因的表达水平和生长行为。RT-PCR分析显示,MEF饲养层上培养4d的ES-D3nanog基因含量高;nBTSC饲养层上培养nanog基因表达较低;而RTSC饲养层上培养nanog基因表达最低。结果显示:不同饲养层上的ES-D3细胞集落形态和培养4d分化程度有差异。在MEF饲养层上的ES-D3细胞培养4d,集落形态仍然很规则,细胞间紧密,集落表面少见大细胞,AKP染色强阳性。在nBTSC饲养层上的ES-D3细胞,集落界限清晰,AKP染色显示,集落大部分细胞呈阳性,少数的细胞集落为弱阳性,可见集落表面分散有较多的大细胞。在nRTSC饲养层上的饲养层上的ES-D3,集落隆起不明显,集落界限不清晰,大部分集落形态不太规则,AKP染色显示集落中部分细胞呈阳性,少数的细胞集落为全阴性,集落表面有较少的大细胞,集落周围有伸出的成纤维细胞。     

无血清培养山羊内细胞团的研究

对32只关中奶山羊进行超排处理,获得胚胎263枚,其中囊胚122枚。采用机械法、酶消化法和免疫外科法分离囊胚83枚,得到内细胞团(ICM)65个。将ICM培养于小鼠胎儿成纤维细胞饲养层上,研究含血清和无血清条件下ICM的增殖规律,并比较添加不同生长因子对ICM增殖的影响。结果表明,无血清培养时,ICM细胞增殖相对较慢,分化减少;添加LIF、bFGF、两种同时添加或均不添加对原代ESC样集落形成率的影响不显著(P>0.05),但添加10 ng/mL bFGF稍微有助于ICM增殖。山羊ICM适宜于无血清培养。     

小鼠ES细胞在不同饲养层上培养nanog基因的 表达水平与生长行为

观察小鼠ES-D3细胞在MEF、新生牛睾丸支持细胞(nBTSCs)和新生兔睾丸支持细胞(nRTSCs)饲养层上生长4dnanog基因的表达水平和生长行为。RT-PCR分析显示,MEF饲养层上培养4d的ES-D3nanog基因含量高;nBTSC饲养层上培养nanog基因表达较低;而RTSC饲养层上培养nanog基因表达最低。结果显示:不同饲养层上的ES-D3细胞集落形态和培养4d分化程度有差异。在MEF饲养层上的ES-D3细胞培养4d,集落形态仍然很规则,细胞间紧密,集落表面少见大细胞,AKP染色强阳性。在nBTSC饲养层上的ES-D3细胞,集落界限清晰,AKP染色显示,集落大部分细胞呈阳性,少数的细胞集落为弱阳性,可见集落表面分散有较多的大细胞。在nRTSC饲养层上的饲养层上的ES-D3,集落隆起不明显,集落界限不清晰,大部分集落形态不太规则,AKP染色显示集落中部分细胞呈阳性,少数的细胞集落为全阴性,集落表面有较少的大细胞,集落周围有伸出的成纤维细胞。     

母牛超数排卵的研究进展

超数排卵技术作为一项实用的繁殖技术 ,在牛的改良和育种中应用广泛。常用的超排程序是 2 0世纪 80年代初成型并推广使用的。现在超排技术基本稳定 ,近 10年国际胚胎移植协会的统计资料表明 ,每头供体牛平均可获得 6枚可用胚。在超排研究中 ,人们最初以减少个体差异和提高受精率为中心 ,逐步转向从激素、程序和饲养管理方面寻找简化实用的改进方法 ,并且对预测个体的超排效果作了一些探索。文章从对供体母牛超排前的预测、超排方案的细化、影响超排效果的因素以及改进超排的思路 4个方面对超排研究进行了论述。     

胚胎工程技术及其在畜牧业中的应用

胚胎工程技术研究的目的,是对哺乳动物的胚胎在体外进行人为控制操作,让其继续发育,进而获得优良或珍稀动物个体,并应用这类技术进行基础研究和应用开发性研究。文章主要叙述了胚胎移植、胚胎冷冻保存、胚胎分割、体外受精、性别鉴定及控制、转基因动物、细胞核移植、胚胎干细胞和胚胎嵌合等胚胎工程技术及其在畜牧业中的应用前景。