Ⅰ型鸭肝炎病毒RNA聚合酶基因的克隆及原核表达

根据Ⅰ型鸭肝炎病毒（Duck hepatitis virus,DHV-Ⅰ）ZJ-Ⅴ株基因组序列（GenBank登录号：EF382778）,设计了一对扩增RNA聚合酶基因（RNA-dependent RNA polymerase,RdRp）的特异性引物,以ZJ-Ⅴ株基因组为模板,扩增DHV-Ⅰ的RdRp基因。运用DNAStar软件对ZJ-Ⅴ株病毒与GenBank上已发表的其他不同DHV毒株的RdRp基因序列进行同源性比较和遗传进化分析,结果表明,ZJ-Ⅴ株与A型DHV-ⅠR85952株（DQ226541）的同源性为97.1%,亲缘关系最近,与2株台湾新型（B型）DHV之间为76.9%和77.0%,与C-GY株和4株韩国新型（C型）DHV株之间为76.2%~76.5%,亲缘关系较远。将RdRp基因克隆至原核表达载体pET-32a（＋）,获得重组表达质粒pET-RdRp,转化宿主菌E.coli BL21（DE3）,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析结果显示RdRp蛋白分子量约为65 kDa,Western blot检测证明RdRp蛋白能与Ⅰ型鸭病毒性肝炎阳性血清产生特异性免疫反应,具有良好的免疫学活性。本文为进一步研究DHV-Ⅰ的复制机理奠定了基础。     

密码子优化型鹅细小病毒病毒样颗粒的表达与鉴定

根据昆虫细胞密码子的偏嗜性,对鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)VP2基因的密码子进行优化,利用Bac-to-Bac表达系统构建了表达优化VP2基因的重组杆状病毒,通过感染昆虫细胞(Sf9)获得病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)。SDS-PAGE分析显示Sf9细胞中出现了65 kDa的蛋白条带,间接免疫荧光(indirect immunofluorescent assay,IFA)和Western blot结果均证实表达产物能与鼠抗GPV VP2抗体发生特异性反应,说明其具有良好的免疫反应性。同时,试验结果还证明,密码子优化后的GPV VP2基因在昆虫细胞中表达量得到了提高,明显高于野生型VP2基因。透射电镜观察纯化后的昆虫细胞表达产物,可见直径约30 nm的VLPs,表明密码子的优化并不影响VP2蛋白的组装。本研究为进一步研制诊断抗原以及新型GPV疫苗等奠定了基础。     

无角陶赛特羊与小尾寒羊杂交自群繁育后代生产性能研究

通过无角陶赛特羊与小尾寒羊母羊杂交，对自群繁育后代(以下简称“自繁后代”)早期增重、生长发育、繁殖性能进行了测定。结果显示，自繁后代3月龄公、母羊体重、日增重和6月龄体重较小尾寒羊都明显提高，自繁后代3月龄、6月龄和成年羊胸宽和胸围均显著大于小尾寒羊；自繁后代下半年各月份自然发情比例高于上半年，胎均产羔数为1.63。结果表明：自繁后代早期增重显著好于小尾寒羊，肉用体型较小尾寒羊显著改善，繁殖产羔率较无角陶赛特有所提高，发情呈现一定季节性。     

兔出血症病毒感染性克隆的优化

为避免细胞外转录步骤,使RHDV感染性克隆的转录和病毒拯救过程一步化,试验通过PCR反应在RHDV cDNA序列的5′端添加T7启动子核心序列,3′端添加具有自身切割功能的核酶核心序列.然后,将RHDV基因组的不同cDNA片段装配到pTVT转录载体中,构建了含有RHDV全长cDNA序列的重组质粒pTVT-RHDV.在转染能稳定表达T7RNA聚合酶的BHK细胞后,将收获的细胞培养物感染MA104细胞.分别用逆转录PCR、间接免疫荧光检测以及一步生长曲线等方法对拯救病毒进行了鉴定.结果表明,试验成功拯救出了RHDV,优化了RHDV感染性克隆的构建过程.     

J亚群禽白血病毒gp85基因表达及初步应用

J亚群禽白血病毒（Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J）的囊膜糖蛋白GP85是亚群特异性抗原。将ALV-J的gp85基因克隆至原核表达载体pET-30a（＋）EcoRⅠ和SalⅠ两个酶切位点之间,经IPTG诱导在大肠杆菌中以His-Tag融合蛋白的形式获得了高效表达,Western blot显示该表达产物具有生物学活性。GP85蛋白经纯化、复性后免疫家兔,制备了抗ALV-J GP85的多克隆抗体。以纯化的蛋白为抗原包被ELISA检测板,对疑似血清样本进行了实验室检测,检出率较高。本研究为ALV-J的诊断和流行病学调查奠定了基础。     

渑池县马铃薯秋季栽培技术研究初报

马铃薯是渑池县传统蔬菜类作物,全县常年种植面积330km2,全部为春季栽培。2011年以来,开展了马铃薯秋播技术试验研究,重点研究马铃薯秋播种植模式、播期,取得了宝贵的经验,为渑池县马铃薯的生产提供了新的发展思路,为农民增收开辟了新的渠道。     

龙潭国家森林公园旅游资源丰富

经国家林业部批准、正在开发的广西桂平龙潭国家森林公园,总面积达7800公顷。其广阔的原始森林和丰富的动植物自然资源将为人们旅游度假提供优美的环境。 瀑布是公园的辐射中心,路曲、山陡、石奇、潭深、林茂是其特点。那里群山叠跃,山体陡峻,沟壑纵横,植被丰富,古老的针叶混交林漫山遍野,粗大的古藤绕树攀岩。瀑布高达30余米,宽10余米,两侧是百丈悬崖。经广西区林业勘测设计院设计规划,共有各种景点49个,其中一级景点7个,二级景点16个,三级景点26个。